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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王卫 豆献英 李德青 张正光
采用病毒诱导基因沉默技术从本氏烟(Nicotiana benthamiana)cDNA文库中筛选受3种不同激发子(Nep1、harpin和INF1)诱导的过敏性细胞死亡的调控基因。以农杆菌Gv3101为宿主、利用PVX病毒表达载体构建了含有7 000个单克隆的本氏烟cDNA文库,采用牙签刺伤法和注射接种法,从6 000个克隆中筛选到了34个能使激发子诱发的过敏性细胞死亡表型发生改变的克隆。对上述阳性克隆进行序列测定和分析,发现其中13个与已知的基因具有较高的同源性,其中克隆Nb14-4编码1个特异的ALY蛋白;克隆Nb3-9和Nb4-26分别编码1个苹果酸脱氢酶和果糖二磷酸醛缩酶;Nb4-28...
关键词：
激发子 过敏性细胞死亡 病毒诱导基因沉默
[期刊] 中国农业科学
[作者]
甘芸哲 张正光 王源超 郑小波
【目的】从基因组水平筛选不结球白菜中受激发子PB90诱导过敏性细胞死亡早期上调表达的基因。【方法】采用抑制性差减杂交的方法筛选疫霉菌激发子PB90注射处理不结球白菜叶片5h内上调表达的基因。【结果】测定分析了200个上调表达的cDNA片段,生物信息学分析表明它们包含70个上调表达的基因片段,共分为9类:基本能量或代谢产物;蛋白质合成分解;细胞信号传导;细胞凋亡;转录;运输相关和编码未知功能的蛋白等。进一步用半定量RT-PCR分析了候选基因beclin,thioredoxin,HLA-B,MAP3K,SPT1,SPT2和AGO1,表明这7个基因在PB90诱导不结球白菜过敏性细胞死亡早期上调表达。...
[期刊] 华北农学报
[作者]
韩建东 曹远银 姚平
小麦接种高度非亲和性的小麦秆锈菌后,在其细胞间隙液(IWF)中可能存在激发子。通过硫酸铵沉淀法将其分级,再将各分级沉淀蛋白溶液注射到高度非亲和性互作小麦叶片中,观察过敏性坏死反应(HR)和过氧化物酶(POD)及苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性变化。结果表明:激发子成分主要集中在50%~80%硫酸铵沉淀蛋白部分中,能明显诱导叶片发生过敏性坏死反应;40μg/mL的该分级沉淀蛋白溶液处理小麦叶片后,PAL和POD活性在早期已有显著增加,分别在诱导处理后36 h和60 h左右出现最高峰,较对照分别增加了37.47%和78.20%。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
胡景江 刘志龙 文建雷
以杨树愈伤组织为试验材料 ,研究了杨树溃疡病菌细胞壁裂解物——低聚糖对杨树细胞有关抗病指标的诱导作用。结果表明 ,该低聚糖具有明显的激发子活性 ,能够诱导杨树细胞苯丙氨酸解氨酶 (PAL)、几丁质酶、β- 1,3-葡聚糖酶活性显著增高 (分别为对照的 2 .80 ,1.99,2 .84倍 )和木质素、HRGP的积累 (分别为对照的2 .35 ,2 .6 1倍 )。因此可以认为 ,低聚糖激发子主要是通过快速启动和增强防卫基因表达的速度和强度 ,使植物体内同抗病性有关的物质代谢增强 ,导致抗病物质快速形成和积累 ,从而诱导或增强了植物的抗病性。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李云锋 曹燕 纪春艳 王振中
利用PLACE数据库,对大麦β-1,3-葡聚糖酶同功酶基因PGⅢ启动子的可能顺式作用元件进行分析,并设计特异性引物。通过5′-缺失法获得了不同大小的启动子片段,分别与报告基因gus(β-葡聚糖酸醛苷酶基因)耦联,构建植物表达载体,通过农杆菌介导法转化水稻胚性愈伤组织。GUS组织化学染色结果表明,稻瘟菌来源的激发子可以诱导PGⅢ启动子不同缺失体驱动的gus表达。荧光法结果表明,缺失体P1(-1 107 bp)具有最高的激发子诱导活性,而缺失体P4(-359 bp)驱动的gus表达量迅速降低,缺失体P5的诱导活性最低。这表明转录起始位点上游-1 107 bp序列是保持启动子最高活性所必需的,而-5...
关键词：
水稻 启动子 激发子 GUS活性
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李云锋 王振中 贾显禄
采用离心、超滤、DEAE SepharoseFF阴离子交换层析柱等方法对稻瘟菌 (Magnaporthegrisea)细胞壁来源的激发子活性物质进行了提取 ;以一套水稻抗稻瘟病近等基因系为材料 ,对其诱导水稻叶片植保素、过氧化物酶 (POD)与苯丙氨酸解氨酶 (PAL)活性进行了检测 ;结果表明 ,粗激发子提取物 (CEF)及DEAE SepharoseFF层析提取物DSⅡ和DSⅢ菌具有激发子活性。经热、胰蛋白酶和过碘酸钠处理后的生物活性检测结果表明DSⅡ和DSⅢ的活性位点均位于糖基部分。
关键词：
水稻 激发子 活性位点
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李堆淑 冀玉良 胡景江
【目的】研究寡聚糖激发子对毛白杨愈伤组织抗杨树溃疡病菌的诱导作用。【方法】分别采用筛选出降解杨树溃疡病菌丝体、壳聚糖、果胶糖且活性较高的寡聚糖激发子A1、B、C3诱导毛白杨愈伤组织,以无菌水处理的毛白杨愈伤组织为对照,并在诱导48h后挑战接种杨树溃疡病菌,测定毛白杨愈伤组织内Vc、可溶性蛋白质和可溶性糖含量的变化。【结果】经A1、B、C3 3种寡聚糖激发子诱导48h后接种杨树溃疡病菌,毛白杨愈伤组织中Vc、可溶性蛋白质含量的变化基本上呈单峰曲线,A1、B、C3 3种寡聚糖激发子诱导接种的毛白杨愈伤组织中Vc含量峰值比对照峰值分别提高了99.02%,95.46%和85.64%;寡聚糖激发子诱导接...
[期刊] 华北农学报
[作者]
谭冬梅 许雪锋 李天忠 王忆 韩振海
用聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG6000)处理新疆野苹果(Malus sieversii(Ledeb)Roem.)幼苗。通过对其叶片及根系中各细胞器的超微结构分析发现,干旱胁迫能诱导新疆野苹果发生细胞程序性死亡,并具有以下特点:随着干旱处理时间的延长,根系中各细胞器形态结构发生变化的时间普遍早于叶片;同是叶片,海绵组织中各细胞器形态结构发生变化的时间早于栅栏组织;同是根系,皮层细胞中各细胞器形态结构变化的时间普遍早于中柱细胞。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
夏启中 张明菊 张献龙 郭小平
棉花悬浮细胞经高浓度细胞分裂素(2mg/LKT或4mg/LKT)处理后第4天大量死亡,培养物呈褐黑色;抽提总DNA,进行琼脂糖胶电泳,结果表明:2mg/LKT和4mg/LKT两处理中有明显的大小为140~180bp及其倍增量片段的DNA“梯”。进行PI和FDA染色显微观察可以看到:2mg/LKT处理中大部分细胞的细胞核较小,核质浓缩,呈棒形或弯月形;胞质浓缩,出现了不对称的质壁分离,且丧失了FDA染色活性。这些结果表明,由高浓度细胞分裂素处理引起的棉花悬浮细胞大规模死亡是一种细胞程序性死亡(PCD)。不同的生理状态(UCSA和BAE)和不同生长时期(指数增长期和静止期)的棉花悬浮细胞对高浓度细...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
柳金伟 焦娇 王蕾 王莲莲 褚小静 梁元存
【目的】阐明氯化汞处理烟草悬浮细胞产生的细胞死亡具有细胞编程死亡(programmed cell death,PCD)的特征和分子机制。【方法】采用形态和生物化学方法观察氯化汞处理细胞后的变化,并采用药理学方法,通过添加抑制剂和抗氧化剂阐明氯化汞引发的信号转导途径。【结果】氯化汞诱导产生的细胞死亡具有PCD特征,包括染色质浓缩、细胞核的TUNEL检测呈阳性和DNA ladder的形成。氯化汞诱导烟草悬浮细胞过氧化氢积累,过氧化氢酶和抗坏血酸等抗氧化剂能降低细胞死亡率。蛋白激酶抑制剂、磷脂酶C和磷脂酶D的抑制剂能显著地降低氯化汞引起的细胞死亡和过氧化氢积累。【结论】氯化汞引起的细胞死亡是一种PC...
关键词：
烟草 氯化汞 细胞编程死亡
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
乔广行 丁平 李涛 王克荣
为了验证营养体不亲和性导致细胞凋亡的假说,对栗疫病菌融合细胞基因组DNA的降解物进行了琼脂糖凝胶电泳检测,观察了融合细胞的细胞核变化,测定了融合细胞的活性氧产生、脂肪粒积累以及进行了融合细胞死活鉴定。结果表明:不同亲和群菌株的孢子混合涂板,孵育后经历萌发、细胞融合,融合细胞基因组DNA经琼脂糖凝胶电泳可以检测到DNA梯状条带,这一特征为营养体不亲和性诱导的程序性细胞死亡提供了新的证据;细胞学上可观察到不亲和性菌株融合细胞细胞核降解、活性氧产生减少、脂肪粒积累增多及融合细胞死亡,这些特征与细胞凋亡的特征相似。
关键词：
栗疫病菌 营养体不亲和 程序性细胞死亡
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
任瑞芬 李泽迪 朱梦婷 刘燕 张孔英
目的】超低温保存后花粉生活力呈多种变化情况，已有研究表明活性氧（ROS）是超低温保存后花粉生活力变化的主要原因之一。因此，本研究探讨液氮冻存后花粉生活力与ROS诱导的氧化应激和细胞程序性死亡间的关系，以进一步揭示ROS在超低温保存后花粉生活力变化中的作用机制。【方法】以芍药‘粉玉奴’的花粉为材料，对比分析超低温保存不同时间长度后花粉生活力、ROS生成量、氧化应激以及细胞程序性死亡指标的变化情况。【结果】花粉超低温保存过程中，ROS成分超氧阴离子自由基（O_2·-）含量在液氮冻存1个和3个月后相对较高，过氧化氢（H_2O_2）含量随着保存时间的延长显著增加，羟自由基（·OH）含量在保存3个月后开始下降，且H_2O_2和·OH含量均与花粉生活力显著相关。其次，氧化损伤指标丙二醛（MDA）含量在保存3个月后显著升高，与花粉生活力、H_2O_2和·OH含量显著相关；细胞程序性死亡（PCD）指标caspase-3-like蛋白酶活性在液氮冻存1个月和3个月后均高于对照，细胞凋亡率在保存5个月和8个月后显著升高，且细胞凋亡率均与花粉生活力、H_2O_2和·OH含量均显著相关。此外，适宜浓度的外源抗氧化剂（抗坏血酸、谷胱甘肽）和类凋亡抑制剂（caspase-3抑制剂）显著提高了液氮冻存8个月后的花粉生活力。【结论】芍药‘粉玉奴’花粉超低温保存过程中，ROS对超低温保存后的花粉生活力产生了重要的影响，其成分H_2O_2和·OH的作用尤为突出，其诱发的氧化应激反应和细胞程序性死亡是液氮冻存后花粉生活力变化的重要原因。
[期刊] 水产学报
[作者]
王骞 王承德 罗敏意 黎果 车行 林蠡 赵丽娟
为研究miR-155在柱状黄杆菌胞外多糖(FC-EPS)诱导的细胞凋亡中的作用机制，本实验采用RNA干扰(RNAi)技术，通过过表达miR-155和敲降踝蛋白基因(talin-1)，皆能抑制FC-EPS诱导的细胞凋亡，并鉴定出talin-1为miR-155的靶蛋白。在FC-EPS诱导细胞凋亡的过程中，踝蛋白水平显著升高，在凋亡发生阶段检测到凋亡执行蛋白Caspase-3的活化，同时检测到2条踝蛋白剪切异构体，大小分别约为200 ku和250 ku；将构建的鲤Talin-1真核表达质粒转染鲤上皮瘤细胞(EPC)，过表达的Talin-1延迟且延长了细胞凋亡的进程，并检测到上述2条踝蛋白异构体。然而，当以FC-EPS转染EPC细胞时，Talin-1先下降再恢复到正常水平，细胞不发生凋亡。因此，在FC-EPS诱导细胞凋亡的过程中，细胞通过上调miR-155来调控靶基因talin-1 mRNA和蛋白转录的变化，以及产生Talin-1蛋白异构体来抑制细胞发生凋亡。本研究为有效防治柱状黄杆菌疾病提供新思路。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
商明清 梁元存 刘爱新 胡雪光 董汉松
用来自赤星病菌弱毒株的糖蛋白激发子处理烟草 ,能明显抑制烟草体内过氧化氢酶 (CAT)的活性 ,增加组织中H2 O2 的含量。诱导后 1dCAT活性就已开始下降 ,至第 6天下降到最低 ,以后又逐渐恢复。而H2 O2 含量的变化趋势与CAT活性的变化相反 ,随CAT活性的降低 ,组织中H2 O2 含量逐渐增加 ,在诱导后第 10天达到最大值。激发子处理烟草还可以诱导碱性PR蛋白基因PR 1b的表达 ;同时 ,烟草对赤星病强毒株的抗性逐渐增强 ,以诱导后第 10天接种抗性最强 ,且这种抗性是系统性的。水杨酸 (SA)处理后CAT及H2 O2 的变化与上述趋势类似。
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