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[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王学斌 司龙亭 孟茜 李坤
选用再生能力较强的黄瓜自交系M8为试验材料,在再生体系建立的基础之上,采用根癌农杆菌介导法将转化酶抑制子基因转入黄瓜中。将农杆菌菌液浸泡过的子叶节分别接种在浓度梯度为1mg.L-1到10 mg.L-1的选择培养基上,研究子叶节对潮霉素的耐受性和敏感度。使用农杆菌菌液浸泡5,10,15,20min,分别接种到筛选培养基上,研究浸泡时间对转化效率的影响。结果表明:HygB的选择压浓度为6mg.L-1,侵染时间为15min时,再生频率最高,为18.9%。经PCR检测表明转化酶抑制子基因已经整合到黄瓜基因组中,转化率为2.0%。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
傅淑 刘昭霞 陈进 杨广
以油菜品种"浙大622"为背景材料,将其外植体(子叶柄和下胚轴)分别在含0、10、20、30、40、50和100 mg·L~(-1)卡那霉素(Kan)或壮观霉素(Spe)的分化培养基中培养,根据其再生芽的生长情况,筛选出最适抗生素浓度.结果表明:外植体的愈伤鲜重、再生芽率和单个外植体再生芽数均随着Kan或Spe浓度的升高而下降;外植体的再生芽白化率随着Kan或Spe浓度的升高而上升,且子叶柄在浓度高于20 mg·L~(-1) Kan或30 mg·L~(-1) Spe中的再生芽均为白化芽,下胚轴在浓度高于30 mg·L~(-1) Kan或20 mg·L~(-1) Spe中的再生芽均为白化芽.
[期刊] 中国农业科学
[作者]
龚一富 高峰
【目的】研究根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株N9-1侵染甘薯外植体后其生理生化特性的变化规律。【方法】用根癌农杆菌菌株N9-1侵染甘薯品种"新大紫"的茎段、叶片和叶柄为外植体,分别在共培养0、1、3、5d后取样,测定根癌农杆菌感染甘薯外植体后的生理生化特性变化。【结果】根癌农杆菌感染甘薯茎段、叶片和叶柄外植体后,可溶性蛋白质含量随共培养天数的增加而逐渐下降。在感染初期,由于逆境的出现,消耗了外植体内大量的POD和SOD,从而使其POD活性和SOD活性下降。感染后期由于植物抗病机制的作用使POD和SOD活性升高。感染后的甘薯外植体中的内源ABA和GA3含量均表...
关键词：
甘薯 根癌农杆菌 生理生化特性
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘翠 李喜焕 常文锁 张春锋 张彩英
以MYB转录因子GmPHR1为目的基因,冀豆12、冀豆16和绥农14为转化受体,比较农杆菌介导大豆不同外植体的遗传转化技术,为大豆转基因育种提供技术支撑。结果表明,以茎尖转化系统的不定芽诱导率、植株再生率和转化效率最高,且对基因型的依赖性最小,但由于对抗生素的敏感性较差,因而存在一定程度的假阳性;其次,以胚尖转化系统的不定芽诱导率、植株再生率和转化效率较高,对基因型的依赖性较小,同时对抗生素的敏感性较强,因而是一种较为理想的转化系统。而子叶节、下胚轴转化系统则表现出不定芽诱导率、植株再生率和转化效率均较低,且存在较强的基因型依赖性等不足。同时,利用上述4种转化系统,获得了3个供试大豆品种的转基...
关键词：
大豆 农杆菌介导转化 外植体类型 转基因
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
代红艳 李文然 刘霁菡 刘月学 张志宏
以近轴端子叶为外植体,研究了菌液浓度、菌液浸泡时间、共培养时间及推迟筛选对根癌农杆菌介导的苹果属植物平邑甜茶转化效率的影响,建立了平邑甜茶高效的转化体系。结果表明:较优转化体系是将成熟胚接种在胚萌发培养基上培养,7～10d后剪取近轴端子叶,子叶外植体在OD600=0.5的EHA105菌液中浸泡10min后在再生培养基上共培养5d,然后在附加20mg.L-1Kan和400mg.L-1Cef的再生培养基上选择培养,在此转化体系上平邑甜茶抗性芽再生率达9.0%。对27个Kan抗性株系的叶片进行GUS组织化学染色分析,23个株系呈现出GUS染色阳性反应。本研究为平邑甜茶的基因工程育种奠定了重要基础。
关键词：
平邑甜茶 子叶 转化 再生 农杆菌
[期刊] 华北农学报
[作者]
王节之 郝晓芬 郑向阳 王潞英 孙美荣
谷子组织培养不同阶段( 愈伤组织、分化再生苗和根) 潮霉素抗性浓度均在5 mg/L 明显敏感,最高临界浓度为10 mg/L。米粒的潮霉素抗性浓度偏高10 mg/L开始敏感,最高临界浓度15mg/L。潮霉素抗性浓度的筛选为检测谷子转几丁质酶基因奠定基础。
关键词：
谷子 组织培养 米粒 潮霉素 浓度
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
奚亚军 范学科 侯文胜 张启发 路明
研究了潮霉素不同质量浓度对西农 1376和京花 1号小麦愈伤组织及种子的筛选效果。结果表明 ,潮霉素对小麦愈伤组织的适宜筛选质量浓度为 110 mg/L,对转基因小麦后代种子筛选以 14 0 mg/L 较为适宜 ;不同基因型材料对潮霉素的敏感性存在一定差异
关键词：
小麦 遗传转化 潮霉素
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李名扬 罗金华 陈红
用处于对数生长期的发根农杆菌（Ｒ１０００，Ａ４和１５８３４）感染甜橙子叶外植体，与菌体共培养３天后，转至含头孢霉素的无激素ＭＴ培养基进行选择培养，１５天后开始产生毛状根，转化率在２５％～３６％之间。毛状根在分单根进行的克隆培养中能稳定地保持激素自主性生长。在无激素的ＭＴ培养基上，毛状根可自发地产生不定芽，适当添加一定种类及浓度植物生长调节剂，可明显提高毛状根再生芽的频率。再生植株叶片和毛状根提取液的电泳检测表明，甘露碱合成酶及农杆碱合成酶均呈阳性，证明Ｒｉ质粒的Ｔ—ＤＮＡ转移并整合到甜橙细胞核基因组中，在转化体及再生植株中得到了表达。
关键词：
柑桔,发根农杆菌,离体转化,植株再生
[期刊] 林业科学研究
[作者]
田国忠 朱水芳 罗飞 李怀方 裘维蕃
采用含有激素合成相关基因的根癌农杆菌 ,伤口接种已感染植原体的泡桐丛枝组培苗和健康组培苗 ,结果发现对丛枝苗的致瘤能力明显低于健康对照苗 ,且被接种病苗的丛枝症状缓解。从健苗获得的 T- DNA转化泡桐瘤组织细胞能在无激素培养基上稳定生长和连续继代培养 2年以上 ,说明瘤组织细胞自身已获得了细胞分裂素和生长素合成能力。根据已报道的根癌农杆菌株系p Til5955T- DNA的异戊烯基转移酶基因 ( ipt)的保守序列 ,设计了一对引物 ( CYT和 CYT′) ,用多聚酶链式反应 ( PCR)扩增了我国杨树致瘤农杆菌 ipt基因部分序列 ( 4 2 7bp片段 ) ,也从遗传转化的两个泡桐无性...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
杨宏 刘小俊 梁根云 房超 刘独臣 蔡鹏 李跃建
以华南型黄瓜‘二早子’、‘白丝条’、‘川绿2号’近叶柄部子叶为外植体,对影响农杆菌介导的卡那霉素抗性遗传转化体系的主要因素如基因型、不定芽诱导最佳激素配比、筛选压、农杆菌侵染时间、农杆菌侵染浓度、共培养温度等进行试验,建立一个高效的黄瓜子叶遗传转化体系。结果表明,子叶分化再生能力‘川绿2号>‘二早子’>‘白丝条’。1.5 mg/L 6-BA+0.1mg/L TDZ+0.5 mg/L ABA能较好地促进‘二早子、‘白丝条子叶不定芽再生,而"川绿2号"在含1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/LABA的MS培养基就能达到最佳分化率。筛选压与外植体分化能力有关,分化能力强的基因型需要较高的kan...
关键词：
华南型黄瓜 农杆菌 遗传转化 因素
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
郭其强 李慧娥 张艳福 郑维列
设置5种浓度(0、50、100、200、300 mg·L-1)ABT溶液和浸泡时间处理藏柏和巨柏插穗开展扦插试验,探讨其对西藏2种柏树插穗生根的影响。通过测定插穗切口愈合率、膨大率、腐烂率和根系发育等指标,应用隶属函数值法综合评价不同处理对藏柏和巨柏插穗生根的影响。结果表明:100 mg·L-1的ABT溶液中浸泡插穗3 h对藏柏和巨柏插穗愈伤组织和根系发育状况最优。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
尹汉文 郭世荣 刘伟 陈海丽
采用基质栽培方式,研究了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)在盐胁迫下对黄瓜植株生长、生理生化代谢、产量及品质的影响。结果表明,在无盐胁迫栽培时,枯草芽孢杆菌对黄瓜植株的生长具有促进作用;在1 g.L-1NaC l胁迫下,枯草芽孢杆菌同样促进植株的生长,增加了株高与叶面积,提高了植株SOD、POD和CAT保护酶的活性,降低了MDA的含量,产量比未添加枯草芽孢杆菌处理的增产18%,且一定程度地提高了果实的品质;而在2 g.L-1NaC l胁迫下,枯草芽孢杆菌对黄瓜植株的生长和产量无促进作用。因此,在1 g.L-1NaC l胁迫下,枯草芽孢杆菌可一定程度提高黄瓜植株的耐盐性。
关键词：
枯草芽孢杆菌 盐胁迫 黄瓜
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
夏磊 王团团 段莉莉 李季 陈劲枫
[目的]本文旨在揭示黄瓜亚硝酸还原酶基因(CsNiR)的表达特征及其在黄瓜再生体系中的功能。[方法]以黄瓜自交系CCMC为试验材料,克隆CsNiR的编码区序列全长,对其进行生物信息学分析;利用本氏烟草表皮细胞瞬时表达系统对CsNiR蛋白进行亚细胞定位,并采用RT-qPCR技术分析CsNiR基因在不同组织中的表达量。对不同基因型黄瓜子叶节外植体的NiR活性与外植体分化率进行相关性分析,测定在不同培养条件下不同基因型黄瓜子叶节外植体CsNiR基因表达量,并统计在不同NH~+_4/NO~-_3比例(1∶5、1∶2、1∶1、2∶1)培养条件下外植体分化率情况。[结果]CsNiR基因ORF全长为1 752 bp,编码583个氨基酸,具有含血红素蛋白β-化合物区域和4Fe-4S区域的完整NiR蛋白结构。系统进化树分析发现植物中CsNiR高度保守,黄瓜与甜瓜氨基酸序列相似性高达96%。RT-qPCR结果表明,CsNiR基因在黄瓜成熟叶表达量最高,雄花中次之,在茎尖和侧芽等分化组织中表达量最低,具有组织特异性。亚细胞定位结果表明CsNiR主要在细胞膜和叶绿体中表达。对不同基因型黄瓜子叶节的NiR活性与再生率的测定发现,NiR活性与黄瓜外植体分化率显著负相关。在不同基因型黄瓜外植体诱导分化过程中,CsNiR基因的表达在含有诱导激素培养基上的表达量显著低于无诱导激素的培养基,当NH~+_4/NO~-_3为1∶5时,黄瓜子叶节外植体分化率最高。[结论]植物中NiR高度保守,CsNiR基因的表达具有特异性,在茎尖等分生组织表达含量最低,NiR活性与外植体分化率呈负相关关系,降低NH~+_4/NO~-_3比例有助于提高黄瓜外植体分化率。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王烨 顾兴芳 张圣平 苗晗
转化效率低一直是黄瓜转基因的瓶颈,本研究旨在采用硫辛酸(LA)和乙酰丁香酮(AS)辅助进行农杆菌转化,研究硫辛酸作为一种新的转化诱导剂对黄瓜遗传转化的影响。结果表明,在添加浓度相同的情况下,仅在培养基中添加LA的转化效率比较仅在菌液中加入LA有显著提高,而当菌液和培养基中同时加入LA与AS的转化频率最高,即采用100 mg/L LA和50 mg/L AS处理后,黄瓜子叶节Hyg抗性芽的再生频率由28.3%升高到86.7%,SouthernBlot验证抗性植株的阳性率为7.5%。因此,在黄瓜遗传转化过程中使用硫辛酸有利于转化细胞的分化,更有助于提高抗性植株的阳性率。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王玉珍 罗景兰 徐进 刘香玲
以水稻品种ZH11和RBQ为材料,通过水稻成熟胚盾片诱导有效愈伤组织及农杆菌介导的遗传转化技术,获得水稻转基因植株,为水稻转基因体系的建立和完善奠定基础。结果表明:NMB培养基适合水稻成熟胚盾片愈伤组织诱导,MS培养基适合愈伤分化;500mg/L谷氨酰胺或精氨酸有利于愈伤组织的形成;培养条件:愈伤组织诱导时温度25～28℃,暗培养,pH5.8;分化时温度25～28℃,光照1500～2000lx,12～14h/d,pH5.8;6 BA对继代过程中愈伤组织的生长有促进作用;潮霉素筛选的最佳浓度为50mg/L。
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