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[期刊] 渔业科学进展
[作者]
柳学周 臧坤 徐永江 李春广 史宝 王妍妍
利用cDNA末端快速克隆(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)方法获得了漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)促黄体素(Luteinizing Hormone,LH)β亚基的cDNA全长序列,检测了LHβ亚基mRNA的组织表达水平,揭示了垂体、肝脏和卵巢中LHβ亚基mRNA在卵巢发育周期中的表达水平变化,利用酶联免疫技术(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)测定了血浆LH和雌二醇(Estrodiol,E2)表达水平的变化。结果表明,漠斑牙鲆为卵巢非同步发育分批产卵性鱼类,LHβ亚基cDN...
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
孙中之 柳学周 徐永江 梁友 李娟 陈军 张洧民
经过66d的控温、控光和加强营养等生殖调控措施,漠斑牙鲆雌性亲鱼性腺发育成熟率为69%,雄鱼性腺发育成熟率为85%,总计产卵8090ml,其中未受精卵6175ml,受精卵1915ml,受精率为24%。孵化水温18℃,盐度27～29,pH8.0～8.2,受精卵50h后孵化出仔鱼;共孵化出初孵仔鱼112.0×104尾,孵化率为58.5%。仔稚鱼培育水温为19～20℃,幼鱼培育水温为20～22℃,经过90d的培育,苗种全长达30mm。18个培育池120m3水体,共培育出全长大于30mm的鱼苗30余万尾,总成活率为26.8%;单位出苗量为1562.5尾/m2;幼鱼白化率小于3%。试验结果表明,用"控温...
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
徐永江 蔡文超 柳学周
研究了饥饿对漠斑牙鲆前期仔鱼生长发育的影响,并计算了仔鱼的饥饿不可逆点。结果表明,仔鱼3日龄开口,卵黄于5日龄消耗完毕,油球于6日龄消耗完毕,混合营养期为3～6日龄,饥饿对仔鱼卵黄和油球的吸收速度影响不显著。摄食仔鱼生长呈线性增加,饥饿仔鱼则在饥饿开始一段时间后呈现负增长的趋势。10日龄饥饿仔鱼出现较为明显的饥饿特征,如胸角凸出,消化道萎缩等。在18～20℃培育水温下,仔鱼饥饿不可逆点出现在7日龄和8日龄之间。
关键词：
漠斑牙鲆 仔鱼 饥饿 不可逆点 胸角
[期刊] 中国水产科学
[作者]
柳学周 宁鑫 徐永江 赵明 李春广 李军
采用紫外线(UV)灭活的冷冻真鲷(Pagrosomus major)精子激发漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)卵子发育。冷冻真鲷精子适宜的UV灭活剂量为72 mJ/cm2,随着处理时间延长,胚胎的孵化率呈现哈特维希效应,其中40 s灭活组胚胎孵化率达到最高[(29±1.9)%],单倍体率100%。利用冷休克法抑制卵子第二极体排出,成功获得雌核发育二倍体仔鱼。冷休克处理温度为0~2℃,处理起始时间3 min、持续时间45 min时,雌核发育二倍体胚胎的孵化率最高,达(9.4±0.71)%,获得批量雌核发育仔鱼。雌核发育仔鱼经流式细胞仪和染色体倍性鉴定,均为二倍体(2n=...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
周纳宇 曹丹丹 王志刚 张全启 齐洁 王旭波 于海洋
本研究分析了CD59基因在牙鲆(Paralichthys olivaceus)感染鳗弧菌(Vibrio anguillarum)前后的表达模式。结果显示,感染前,CD59基因在检测的4种免疫器官中均不表达;感染后,该基因均有不同程度的表达,其中,肾脏的表达量最高。对牙鲆CD59基因进行原核表达,构建原核表达载体pET-32a-CD59,并将其转化入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,使用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,获得约为29 kDa的重组蛋白pET-32a-CD59。
关键词：
牙鲆 CD59 原核表达 抑菌活性
[期刊] 水产学报
[作者]
杨景峰 陈松林 徐亘博 苏鹏志 田永胜 翟介明 李波
采用紫外线(UV)对冻存的花鲈精子进行照射使其遗传物质失活,作为异源精子诱导源,与漠斑牙鲆卵子进行"授精",可以诱导漠斑牙鲆卵进行雌核发育。结合静水压处理,抑制第二极体排出,成功获得了漠斑牙鲆雌核发育二倍体鱼苗。实验表明,同源精子和异源精子均可在紫外线照射遗传失活后诱导漠斑牙鲆卵雌核发育,经实验筛选出异源精子诱导漠斑牙鲆雌核发育的最佳条件为花鲈冻存精子采用80mJ/cm2的紫外线照射,然后与漠斑牙鲆卵子进行授精,培育水温18℃条件下,受精后4～5min,施以65MPa的静水压休克处理6min,可有效诱导漠斑牙鲆卵的雌核发育。采用形态学、流式细胞仪DNA含量分析和微卫星标记技术对雌核发育鱼苗进行...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
高丽娜 付元帅 施志仪 苏艳芳 张红梅
通过ＰＣＲ技术，从牙鲆（ＰａＲａｌｉＣｈｔｙｓ ｏｌｖａＣｅｕｓ）总ＲＮａ中获得牙鲆ｌｉＮ－２９基因Ｃ ＤＮａ序列，该序列全长１ ７６９ ｂＰ，包括１ ３２９ ｂＰ开放阅读框，编码４４２个氨基酸，预测其是一种多锌指结构蛋白；氨基酸序列对比分析显示，牙鲆ｌｉＮ－２９与大黄鱼（ｌａＲｉｍｉＣｈｔｈｙｓ ＣＲｏＣｅａ）的同源性最高，达９５．２５％；系统进化树分析表明，牙鲆与其他鱼类聚集一支，并且与罗非鱼的进化关系最近。荧光定量ＰＣＲ显示，在牙鲆胚胎和仔鱼发育阶段，以原肠胚期ｌｉＮ－２９表达量最高；组织表达分析表明，脑中表达最高，肌肉中最低。外源甲状腺激素（ｔｈ）在牙鲆仔鱼发育初期（ｔｈ处理后２ Ｄ、．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李晓妮 柳学周 史宝 徐永江 李晓晓 张金勇
通过荧光实时定量PCR方法(qRT-PCR)检测雌性性成熟牙鲆(Paralichthys olivaceus)第Ⅴ时期不同时相的卵母细胞中膜孕激素受体(mPRα)的表达,同时采用原位杂交、免疫组化和Western blotting方法研究性成熟雌性牙鲆mPRα mRNA和蛋白在各组织中的分布和表达。qRT-PCR结果显示,在牙鲆卵巢成熟时期的第Ⅴ时相卵母细胞,mPRα mRNA的表达量最高,表明mPRα介导孕激素参与了牙鲆卵母细胞成熟的调控。组织定量定位结果显示,在牙鲆的卵巢、脑、头肾、肾、肝脏组织中均有
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
付瑞雪 周纳宇 刘金相 王旭波 贺艳 张全启 于海洋
采用重测序方法,利用牙鲆(Paralichthys olivaceus)野生个体,扩增了牙鲆丝氨酸蛋白酶(Serine protease)I-1基因的编码区(CDS)和2605 bp的启动子序列。在牙鲆丝氨酸蛋白酶I-1基因(Po SP I-1)编码区中筛选出9个单核苷酸多态性位点(SNPs),同时在其启动子区筛选出28个SNP位点。对感染鳗弧菌的抗病牙鲆和易感牙鲆进行了部分SNP位点的分型,通过分析CDS中SNP位点的分布情况,发现SNP365A/G位点在抗病个体中的AG基因型的基因频率是60%,高于易感个体的40%(P=0.01)。q RT-PCR结果显示,易感个体在细菌感染后,Po SP...
关键词：
丝氨酸蛋白酶基因 牙鲆 鳗弧菌 多态性
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
生安志 鞠辉明 李贵阳 李杰 莫照兰
利用ｑＰＣＲ方法，检测ＨｓＰ９０α和ＨｓＰ９０βｍ ＲＮＡ在不同月龄牙鲆（ＰＡＲＡｌｉＣＨｔＨｙｓ ｏｌｉｖＡＣｅｕｓ）不同组织的表达水平，进一步检测在不同温度刺激、鳗弧菌感染后的表达变化。结果显示，ＨｓＰ９０α和ＨｓＰ９０β在不同发育期的１３种组织（肝脏、脾脏、头肾、后肾、心、肌肉、背皮、胃、肠、鳃、腹鳍、脑和血液）中均有表达。ＨｓＰ９０β表达水平整体高于ＨｓＰ９０α；８月龄牙鲆在肝、鳃、背皮、背肌、腹鳍的ＨｓＰ９０α表达量要显著高于其他发育期（１月龄、１２月龄、２４月龄）同组织的表达量（Ｐ＜０．０５），而ＨｓＰ９０β在不同月龄牙鲆的表达量也存在差异，在肝和肠的表达量较高，在鳃、背肌和腹鳍的．．．
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
吴明林 施志仪 付元帅 张俊玲
MicroRNAs(miRNAs)通过抑制编码基因的转录调控关键的生物学进程。研究发现,let-7是时序发育过程中的重要调控因子,在促进幼体向成体转变的发育过程中起着极其重要的作用。利用Solexa测序技术从牙鲆中成功鉴定出let-7家族的10个成员((let-7a,let-7b,let-7c,let-7d,let-7e,let-7f,let-7g,let-7h,let-7i,let-7j)。相对于let-7家族其他成员,let-7d的拷贝数最多,推测其在牙鲆发育过程中扮演着更重要的角色。运用实时荧光定量PCR方法分析let-7d在牙鲆变态发育不同时期的表达,结果发现,在对照组和甲状腺激素处理...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
刘蒙蒙 王晶 高金宁 马丽曼 张全启
以牙鲆为研究对象，利用染色体步移（Ｇｅｎｏｍｅ ｗａｌｋｉｎＧ）获得了ａｃｔｉｖｉｎ两个β亚基基因的上游部分启动子序列，并对其进行了转录调控元件的生物信息学预测分析。获得了ａｃｔｉｖｉｎβａ和βＢ两个亚基的启动子部分序列，长度分别约为２．７ ｋＢ和２．４ ｋＢ；在预测的ａｃｔｉｖｉｎβＢ转录起始位点（＋１位）的上游３１ Ｂｐ处有１个典型的ｔａｔａ Ｂｏｘ，而在ａｃｔｉｖｉｎβａ中未发现ｔａｔａ Ｂｏｘ的存在。两个基因的启动子上发现了多个转录因子Ｓｐ１、ｏｃｔ－１、ｃ／ｅＢｐ、ｃＲｅＢ、Ｇａｔａ－１、ＨｎＦ－３、ＨｎＦ－１、ＵＳＦ等结合位点，还发现了与内分泌相关的ｐｉｔ－１、ｅＲ、ｐＲ、ＧＲ、Ｒ．．．
关键词：
牙鲆 激活素 启动子 生物信息学分析
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
刘蒙蒙 王晶 高金宁 马丽曼 张全启
以牙鲆为研究对象,利用染色体步移(Genome walking)获得了Activin两个β亚基基因的上游部分启动子序列,并对其进行了转录调控元件的生物信息学预测分析。获得了ActivinβA和βB两个亚基的启动子部分序列,长度分别约为2.7 kb和2.4 kb;在预测的ActivinβB转录起始位点(+1位)的上游31 bp处有1个典型的TATA box,而在ActivinβA中未发现TATA box的存在。两个基因的启动子上发现了多个转录因子Sp1、Oct-1、C/EBP、CREB、GATA-1、HNF-3、HNF-1、USF等结合位点,还发现了与内分泌相关的Pit-1、ER、PR、GR、R...
关键词：
牙鲆 激活素 启动子 生物信息学分析
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
谢彩霞 邢巨斌 鲍宝龙
为了调查表皮细胞分裂原epigen基因是否与牙鲆变态发育有关,分析了从变态期牙鲆仔鱼cDNA文库中测序得到的epigen基因。发现epigen基因编码162个氨基酸,具有信号肽序列,一个跨膜结构域和EGF-like结构域。EGF-like结构域包含有可形成3个二硫键的6个半胱氨酸残基,是表皮生长因子家族的结构特征。此外,利用荧光实时定量RT-PCR,调查了epigen基因在牙鲆眼睛移动过程中的变化。相比眼睛移动之前(17DAH,day after hatching),epigen基因在眼睛移动初期(19DAH)表达明显增强,为17DAH时的2.363倍;而在眼睛移动过程的高峰期(23DAH),...
[期刊] 海洋渔业
[作者]
孙近近 张俊玲 孙文慧 施志仪
ｄａｚｌ（ｄｅｌｅｔｅｄ ｉｎ ａｚｏｏｓｐｅｒｍｉａ－ｌｉｋｅ）基因是多种物种精子发生的重要调控因子，为探讨该基因在牙鲆（ｐａｒａｌｉｃｈｔｈｙｓ ｏｌｉｖａｃｅｕｓ）性腺发育分化中的作用，本研究采用同源克隆和ｒａｃｅ技术克隆了牙鲆ｄａｚｌ基因的ｃｄｎａ序列，利用生物信息学方法分析了其序列结构，并利用实时荧光定量ｐｃｒ技术检测了该基因在牙鲆成体组织和早期发育阶段的表达情况。结果发现：牙鲆ｄａｚｌ ｃｄｎａ序列全长２ ０３１ ｂｐ，包括１０５ ｂｐ的５＇端非翻译区，１ ２７５ ｂｐ的３＇端非翻译区和编码２１７个氨基酸残基的６５１ ｂｐ开放阅读框；氨基酸同源序列比对显示该序列存在一个高度保守的ｒ．．．
关键词：
牙鲆 dazl cDNA克隆 基因表达
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