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溶藻弧菌感染后凡纳滨对虾鳃组织免疫相关基因的表达

[期刊] 中国水产科学 [作者] 罗词兴黄旭雄李桑赵利斌危立坤陈春燕刘林林曾蓓蓓

分别给凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)注射生理盐水、3×106 CFU/mL(低浓度组)和9×106 CFU/mL(高浓度组)溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)菌液,采用荧光定量PCR技术,检测不同处理后凡纳滨对虾鳃组织中Toll受体、IMD和溶菌酶基因表达量随时间的变化。结果表明,处理42 h内,注射生理盐水组对虾的Toll受体和IMD mRNA表达量无显著变化,溶菌酶mRNA表达量在注射36 h后显著升高。急性感染溶藻弧菌后,凡纳滨对虾鳃组织中Toll受体、IMD和溶菌酶mRNA的表达量峰值分别出现在感染后24、42和36 h;溶藻弧菌的感染剂量不影...

关键词：凡纳滨对虾溶藻弧菌 Toll受体mRNA IMD mRNA 溶菌酶mRNA

凡纳滨对虾Crustin-like基因的克隆及在副溶血弧菌感染条件下的表达分析

[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版) [作者] 张艳艳刘小林黄海洪钱昭英王宪宗相建海李义军

【目的】研究凡纳滨对虾Crustin-like基因(即CL基因)的结构和功能,探明CL基因是否参与副溶血弧菌侵染条件下的免疫应答,为进一步研究凡纳滨对虾的免疫机制和抗病育种奠定基础。【方法】采用RT-PCR技术克隆凡纳滨对虾CL基因;用DNAstar、Clustalx、MEGA 5.0、PROSITE、TMpred和SignalP软件,分析CL基因序列及其蛋白结构,并预测蛋白功能;利用副溶血弧菌进行攻毒试验和实时定量PCR,检测CL基因在病原侵染条件下的表达情况。【结果】克隆获得了凡纳滨对虾CL基因(登录号:JQ824114)的cDNA,全长为501bp,含有33bp的5′非翻译区(1～33b...

关键词：凡纳滨对虾 Crustin-like基因序列分析副溶血弧菌实时定量PCR

微囊藻毒素MC-LR对凡纳滨对虾细胞免疫相关基因表达水平的影响

[期刊] 上海海洋大学学报 [作者] 傅一鸣李智柳峰松刘利平

对凡纳滨对虾进行血窦注射微囊藻毒素MC-LR染毒,取染毒前后肝胰腺及血细胞,采用Illumina Hiseq 2500测序平台进行基因表达谱分析,并对差异基因的基因本体(gene ontology,GO)注释和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路进行显著性富集分析。结果发现,酚氧化酶原、胰蛋白酶及C型凝集素等基因有显著的差异性表达。在GO富集性分析中发现细胞粘附显著性差异表达,细胞杀伤及细胞粘附分子结合物差异表达。KEGG富集性分析发现血细胞中吞噬体显著性差异表达,细胞凋亡、内吞作用和细胞粘附分子等通路呈表达差...

关键词：凡纳滨对虾微囊藻毒素转录组细胞免疫

饲料中添加益生菌对凡纳滨对虾抗感染和5种免疫基因表达的影响

[期刊] 水产学报 [作者] 张盛静宋晓玲赵小金黄倢

为研究饲料中添加益生菌对凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染能力和非特异性免疫基因表达水平的影响,以初体质量为(6.95±1.20)g的凡纳滨对虾为研究对象,在室内养殖箱进行3周的养殖实验和2周的副溶血弧菌人工感染实验;其中,对照组每日投喂普通商品饲料,实验组每日投喂在普通商品饲料中添加地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌/枯草芽孢杆菌(1∶1)配制成的3组实验饲料,实验饲料中益生菌的终浓度为107cfu/g。并采用实时荧光定量RT-PCR方法,对保护率最高的地衣芽孢杆菌/枯草芽孢杆菌实验组进行凡纳滨对虾相关免疫基因表达水平的分析。实验结果表明,在饲料中添加单一益生菌或复合益生菌均可显著提高对虾抗副...

关键词：凡纳滨对虾益生菌抗病力免疫基因副溶血弧菌

饲料中花生四烯酸水平对凡纳滨对虾免疫相关基因表达及抗菌能力的影响

[期刊] 水产学报 [作者] 赵利斌王鑫磊黄旭雄陈春燕李航

为了评估饲料中花生四烯酸（ａｒａｃｈｉｄｏｎｉｃａｃｉｄ，ａｒａ）水平对凡纳滨对虾免疫相关基因表达及抗菌能力的影响，分别以鱼油和混合植物油为脂肪源，设计了２个系列共９组不同ａｒａ含量的等氮等能，且具备相同饱和脂肪酸（ＳＦａ）、单不饱和脂肪酸（ＭＵＦａ）、多不饱和脂肪酸（ＰＵＦａ）和ｎ－３／ｎ－６比例的实验饲料，投喂对虾６周后，检测各组对虾在急性感染溶藻弧菌０、２４、３６和４２ｈ时鳃组织中Ｔｏｌｌ受体、ｉＭｄ（ｉＭＭＵｎｅｄｅＦｉｃｉｅｎｃｙ）和溶菌酶Ｍｒｎａ表达量，并统计感染后９６ｈ内对虾的死亡情况。结果表明：１对虾摄食以鱼油为脂肪源的饲料［饲料ｄｈａ（２２：６ｎ－３）和ｅＰａ（２０．．．

关键词：凡纳滨对虾花生四烯酸溶藻弧菌 Toll受体m RNA IMD mRNA 溶菌酶mRNA

副溶血弧菌对凡纳滨对虾肝胰腺抗氧化酶活性和基因表达的影响

[期刊] 中国水产科学 [作者] 赵伟王雷刘梅蒋克勇齐灿灿杨广王宝杰

为了研究致病性副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)对凡纳滨对虾(Litopanaeus vannamei)肝胰腺抗氧化酶活性及相关基因表达的影响,本研究选取始体重(2.20±0.24)g的健康凡纳滨对虾初270尾,将其随机分为2组,分别以0 CFU/m L和5×107 CFU/m L剂量的致病性副溶血弧菌对凡纳滨对虾进行浸浴攻毒实验。在实验第6小时、12小时、24小时和36小时取肝胰腺,进行抗氧化酶活性及免疫相关基因表达测定。结果显示,感染副溶血弧菌后,实验组对虾肝胰腺中超氧化物歧

关键词：凡纳滨对虾副溶血弧菌肝胰腺抗氧化酶基因表达

饲料添加益生菌对凡纳滨对虾肠道菌群、Toll受体及溶菌酶基因表达及抗感染的影响

[期刊] 中国水产科学 [作者] 张盛静赵小金宋晓玲王春迪刘文亮黄倢

以初体重为（７．２０±１．３８）ｇ的凡纳滨对虾（Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓｖａｎｎａｍｅｉ）为研究对象，在室内养殖箱进行３周的养殖实验和２周的哈维氏弧菌（ｖｉｂｒｉｏｈａｒｖｅｙｉ）人工感染实验，其中对照组每日投喂普通商品饲料，实验组每日投喂在普通商品饲料中添加地衣芽孢杆菌（ｂａｃｉＬＬｕｓＬｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）１．０×１０～８ｃｆｕ／ｍＬ配制成的实验饲料。目的是研究饲料中添加益生菌对凡纳滨对虾肠道菌群、ｔｏＬＬ受体及溶菌酶基因表达量和抗哈维氏弧菌能力的影响。实验结果表明，在饲料中添加地衣芽孢杆菌可显著提高对虾抗哈维氏弧菌感染的能力，其相对免疫保护率为２２．２２％。与对照组相比，实．．．

关键词：凡纳滨对虾益生菌抗病力免疫基因哈维氏弧菌

饲料胆固醇含量对凡纳滨对虾免疫相关基因表达及耐低温低溶解氧胁迫能力的影响

[期刊] 上海海洋大学学报 [作者] 闫明磊王鑫磊黄旭雄李松林汪毅姜德田李来强

为探究饲料中胆固醇含量对淡水养殖凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)免疫相关基因表达及耐低温低溶解氧胁迫能力的影响,在鱼粉含量为10%的基础饲料中分别添加0、1.0、2.0、3.0、4.0 g/kg的胆固醇,制成5组等氮等能饲料(C0、C1、C2、C3和C4,实测胆固醇含量依次为0.78、1.57、2.45、3.43和4.18 mg/g)投喂初始体质量为(0.14±0.03) g的凡纳滨对虾。养殖8周后检测对虾耐低温和低溶解氧胁迫的能力以及急性感染副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)后免疫相关基因(Toll受体、IMD和溶菌酶mRNA)相对表达量。结果表明:饲料胆固醇含量显著影响弧菌急性感染后对虾鳃组织Toll受体、IMD和溶菌酶mRNA相对表达量。在弧菌感染进程中,C2组对虾Toll受体和溶菌酶的mRNA表达量表现出最大的变化幅度;而IMD mRNA表达量最大变化幅度出现在C1组,其次为C2组。急性感染弧菌后各组对虾Toll受体和溶菌酶mRNA相对表达量峰值均出现在感染后24 h;C2、C3和C4组IMD mRNA表达量峰值出现在感染后24 h,而C0和C1组IMD mRNA表达量峰值出现在感染后42 h。急性程序降温胁迫下,C0和C4组对虾100%死亡的温度为15℃;而其他组对虾100%死亡的温度为14℃。急性低溶解氧胁迫下各组对虾的耗氧量和致死溶氧浓度无显著性差异。综上所述:在淡水养殖条件下,饲料中2.45 mg/g的胆固醇含量可以提高凡纳滨对虾的免疫灵敏性,而饲料中胆固醇含量为(1.57～3.43) mg/g时凡纳滨对虾表现出较好的抗低温胁迫能力。

关键词：凡纳滨对虾胆固醇免疫相关基因表达弧菌低温低溶解氧

溶藻弧菌RseB基因缺失对凡纳滨对虾致病性的影响

[期刊] 上海海洋大学学报 [作者] 孟璐车金远黄旭雄罗土炎鲍宝龙

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是海水养殖过程中一种常见的致病菌。当温度为25～35℃时，容易暴发流行性的弧菌病。利用OverlapPCR和同源基因重组技术，成功构建溶藻弧菌RseB基因敲除缺失株。结果显示：与野生溶藻弧菌相比，在生长速度上，RseB基因显示出与生长具有相关性，RseB基因缺失提高了溶藻弧菌的生长速度；RseB基因缺失造成溶藻弧菌溶血性下降37.5%。凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)致病性试验结果显示，RseB基因缺失菌株感染后凡纳滨对虾开始死亡时间推迟4 h, LT_(50)推迟20 h。攻毒后的第24小时，RseB基因缺失菌株在对虾中的定殖能力下降53.4%。受溶藻弧菌感染的凡纳滨对虾肝胰腺严重受到侵染，肝小管的排列顺序紊乱，并且间隙变大、边界线也逐渐模糊，肝胰腺小管的管腔消失；肝细胞的排列开始不规则，有些肝细胞形状很明显地肿大，甚至整个细胞开始变性，被伊红染深，细胞核开始消失。相同时间点的病理切片显示，RseB基因敲除菌株感染的凡纳滨对虾肝胰腺受损情况相对较轻。

关键词：溶藻弧菌 RseB 基因敲除致病性凡纳滨对虾

凡纳滨对虾Toll受体和溶菌酶mRNA组织表达的差异研究

[期刊] 上海海洋大学学报 [作者] 黄旭雄罗词兴郭腾飞温文华雪铭周洪琪

采用荧光定量PCR技术,检测了凡纳滨对虾不同组织(血淋巴、鳃、肌肉和肝胰腺)中Toll受体和溶菌酶mRNA的相对表达量。结果表明:凡纳滨对虾Toll受体和溶菌酶mRNA在不同组织间的表达量存在显著差异。Toll受体mRNA在各组织中的相对表达水平由高到低顺序依次为血淋巴>鳃>肌肉>肝胰腺。溶菌酶mRNA表达水平则依次为血淋巴>鳃>肌肉>肝胰腺,但血淋巴和鳃之间无显著差异。溶菌酶mRNA和Toll mRNA表达量重复测定间的变异度在血淋巴和鳃组织间无显著差异。表明鳃和血淋巴是检测凡纳滨对虾Toll受体和溶菌酶mRNA的相对表达量的理想实验材料。研究亮点:Toll受体能够将异物入侵的信号从细胞外传...

关键词：凡纳滨对虾 Toll受体mRNA 溶菌酶mRNA 血淋巴鳃

凡纳对虾感染副溶血弧菌后pVA1-like质粒的组织分布及增殖特点

[期刊] 渔业科学进展 [作者] 苏兴琦傅强李旭鹏孔杰田吉腾曹宝祥刘宁栾生罗坤孟宪红

对虾急性肝胰腺坏死病（acute hepatopancreatic necrosis disease， AHPND）主要由副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）携带的pVA1-like质粒表达毒力蛋白PirAB^Vp所致。本研究通过2次定量口饲的感染方式对凡纳对虾（Penaeus vannamei）成虾进行弧菌胁迫，研究相对低摄菌量实验组(L组，10⁵ CFU/尾)与相对高摄菌量实验组(H组，10⁷ CFU/尾)的个体5个不同时间点（感染后3、6、9、24和48 h）的9种不同组织（鳃、胃、肠道、眼柄、肌肉、肝胰腺、第五游泳足、腹部神经和第二触角鞭）中弧菌分布及变化情况。通过毒力蛋白PirA^Vp的基因表达量反映副溶血弧菌携带的pVA1-like质粒量，进而代表弧菌的分布及变化特点。结果显示，H组和L组的总体死亡率无差异，且均在3～6 h达到死亡高峰。2个实验组中病原质粒在各组织中的拷贝数不同，腹部神经与肠道组织平均质粒拷贝数均高于其他组织；同一组织内H组比L组的质粒拷贝数高1.9～4.9倍。质粒变化相关性分析显示，质粒拷贝数变化情况与对虾摄菌时间、死亡率无显著关系。同时2个实验组的质粒拷贝数变化特点也不同。L组中，有6个组织的质粒拷贝数随时间呈先上升后下降的趋势，而在胃、肠和肝胰腺中随时间呈波动变化；H组中，有7个组织的质粒拷贝数随时间呈现波动变化，但在胃和第五游泳足中随时间呈先上升后下降的趋势。第二触角鞭和第五游泳足在各取样时间段均可检测出PirA^Vp，可作为保种成虾活体常态病原检测的候选组织。本研究探究了商品规格种虾感染不同浓度Vp_AHPND后在体内不同组织的分布及扩增动态变化的特点，可为AHPND精准抗性测试方案的制定和致病机理研究提供数据与理论依据，也为保种期成虾准确的病原监测的候选组织提供参考。

关键词：凡纳对虾副溶血弧菌 PirA^Vp 荧光定量PCR 组织分布

凡纳对虾感染副溶血弧菌后pVA1-like质粒的组织分布及增殖特点

[期刊] 渔业科学进展 [作者] 苏兴琦傅强李旭鹏孔杰田吉腾曹宝祥刘宁栾生罗坤孟宪红

关键词：凡纳对虾副溶血弧菌 PirA^Vp 荧光定量PCR 组织分布

饲料中添加酵母提取物对凡纳滨对虾免疫相关基因表达及抗菌机能的影响

[期刊] 水产学报 [作者] 黄旭雄罗词兴危立坤陈春燕赵利斌李桑刘林林曾蓓蓓

为了评估饲料中添加酵母提取物对凡纳滨对虾免疫灵敏性和平衡性的相关基因表达的影响,以鱼粉含量为24.5%的基础饲料(对照组)及在基础饲料中添加2.5%酵母提取物的实验饲料,分别饲喂凡纳滨对虾56 d,检测两种饲料投喂的对虾在急性感染溶藻弧菌前后鳃组织Toll受体、IM D和溶菌酶mRNA表达量变化及感染后的对虾死亡情况。结果表明:摄食添加酵母提取物饲料的凡纳滨对虾鳃组织中Toll受体mRNA和溶菌酶mRNA表达量均显著高于对照组对虾(P0.05)。急性感染溶藻弧菌后,两组对虾鳃组织Toll受体、IMD和溶菌酶mRNA表达量随感染进程均...

关键词：凡纳滨对虾酵母提取物 Toll受体mRNA IMD mRNA 溶菌酶mRNA 溶藻弧菌

哈维氏弧菌浸浴后凡纳滨对虾肠道组织病理变化及转录水平的免疫应答

[期刊] 水产学报 [作者] 夏青王宝杰刘梅蒋克勇王雷

为研究凡纳滨对虾在不同浓度哈维氏弧菌的浸浴攻毒作用下肠道损伤的动态发展过程及肠道免疫基因表达水平,采用组织切片探究对虾肠道组织形态,采用实时荧光定量PCR测定抗脂多糖因子基因(ALF)、对虾素基因(Pen-4c)和Crustin基因(Cru)以及溶菌酶基因(LZM)、脂肪酸结合蛋白基因(Fabp)的表达水平变化,并对肠道及水体中的弧菌数目进行监测。结果表明,哈维氏弧菌侵染后,在低浓度组侵染32 h、中浓度组侵染16 h及高浓度组侵染8 h后出现轻度感染,在低、中浓度组侵染40 h后及高浓度组侵染16 h后发生重度感染。Cru在低、中浓度组侵染24 h和高浓度组侵染16~24 h出现显著表达;A...

关键词：凡纳滨对虾哈维氏弧菌浸浴攻毒免疫基因 q PCR 组织病理

发酵豆粕替代鱼粉对凡纳滨对虾生长、免疫相关酶及免疫相关基因表达的影响

[期刊] 水产学报 [作者] 刘韬黄旭雄苏美英杨景丰郭子好孔纯华雪铭

从免疫相关酶活及基因转录水平角度探讨发酵豆粕替代鱼粉对凡纳滨对虾健康生长及免疫机能机制的影响。实验设置5种实用饲料,以30%鱼粉组(FM)为对照组,分别用4%(FSM4)、8%(FSM8)、12%(FSM12)和16%(FSM16)的发酵豆粕,替代9.7%、19.4%、29.1%和38.8%鱼粉,分为4个处理组,饲养体质量为(7.62±0.23)g的凡纳滨对虾60 d后,统计生长性能,检测肌肉营养成分、血清及肝胰腺免疫相关酶活性,肝胰腺HSP70和鳃Toll受体、IMD、溶菌酶(LZM)免疫相关基因m RNA的表达水平。结果显示:(1)与对照组相比,发酵豆粕替代鱼粉对凡纳滨对虾成活率无显著影响;过低或过高水平的发酵豆粕替代鱼粉皆会影响凡纳滨对虾的特定生长率。(2)除FSM12组外,肌肉粗蛋白含量发酵豆粕替代组均低于对照组;粗脂肪含量随着发酵豆粕替代量的升高而降低,FSM16组最低。(3)血清谷丙转氨酶活FSM4和FSM16组显著高于对照组;谷草转氨酶活FSM4组最高,而FSM8组最低;除FSM12组外;碱性磷酸酶活性发酵豆粕替代组显著高于对照组;除FSM16组外,血清总蛋白与肝胰腺丙二醛含量发酵豆粕替代组与对照组无显著性差异。(4)随着发酵豆粕替代量增加,鳃Toll受体m RNA表达呈上升趋势,鳃IMD m RNA表达则呈先升后降趋势,发酵豆粕替代比例过高会降低鳃LZM m RNA表达水平,而肝胰腺HSP70 m RNA表达量则随着发酵豆粕替代比例增加呈上升趋势。综上所述,发酵豆粕适量替代鱼粉对凡纳滨对虾生长性能无显著影响,并可提高免疫相关酶活,改变免疫相关基因的表达。本实验条件下适宜发酵豆粕用量为8%~12%;替代量过高,会引起机体的过度应激。

关键词：凡纳滨对虾发酵豆粕鱼粉生长免疫相关基因

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