为了解溴氰菊酯对克氏原螯虾的毒性及致毒机理,采用24h换水式生物试验研究了溴氰菊酯对克氏原螯虾的96h急性毒性,分光光度法检测了6、12、24和48h后0.01、0.02和0.04μg/L溴氰菊酯对肝胰腺超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力和丙二醛(MDA)的含量等氧化胁迫相关指标的影响。结果表明,24、48和96h的半致死浓度分别为0.1560、0.0993和0.0562μg/L,安全浓度为5.62ng/L;在整个暴露过程中,溴氰菊酯各个处理组都引起了氧化胁迫相关指标的变化。SOD和CAT活力的变化趋势相同,都呈抑制-诱导-抑制的变化规律,MDA含量则一直高于对照组。暴露6h后...

为研究溴氰菊酯对克氏原螯虾的毒性效应及致毒机制,实验将克氏原螯虾成虾暴露于农药溴氰菊酯0.5、0.1和0.005μg/L等3个浓度的药液中24 h后,采用透射电镜观察克氏原螯虾肌肉组织超微结构损伤情况,并以细胞色素氧化酶活力(CCO)、乳酸脱氢酶活力(LDH)和乳酸(LD)含量为生物标志物评价溴氰菊酯对克氏原螯虾肌细胞呼吸产能功能的影响。结果显示,3个浓度的溴氰菊酯都会造成肌细胞超微结构不同程度的损伤,且浓度越大损伤越严重,损伤主要表现为肌原纤维断裂、肌浆网溶解,线粒体溶解。此外,3个浓度的溴氰菊酯都会对CCO活力、LDH活力和LD含量产生影响。其中0.1μg/L的溴氰菊酯在6~24 h的暴露...

为了揭示急性盐度胁迫下克氏原螯虾(Procambarus clarkia)肝脏抗氧化酶和鳃丝Na+/K+-ATP酶的活性变化情况,将养殖于淡水中体重为(7.51±1.23)g的克氏原螯虾幼虾直接转移至盐度4‰、8‰、12‰和16‰的水体中,于转移后6、12、24、48、96 h分别检测肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)以及鳃丝Na+/K+-ATP酶活性的变化。结果表明:随着盐度的升高和胁迫时间的延长,肝脏中SOD和CAT活性开始显著增强,到达一定强度后又逐渐下降。而GPX活力表现出降低的趋势,尤其在低盐度条件下,与...

为了揭示急性盐度胁迫下克氏原螯虾（Ｐｒｏｃａｍｂａｒｕｓ ｃｌａｒｋｉａ）肝脏抗氧化酶和鳃丝Ｎａ＋／ｋ＋－ａＴＰ酶的活性变化情况，将养殖于淡水中体重为（７．５１±１．２３）ｇ的克氏原螯虾幼虾直接转移至盐度４‰、８‰、１２‰和１６‰的水体中，于转移后６、１２、２４、４８、９６ ｈ分别检测肝脏中超氧化物歧化酶（ｓｏＤ）、过氧化氢酶（ｃａＴ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ｇＰＸ）、谷胱甘肽－ｓ－转移酶（ｇｓＴ）以及鳃丝Ｎａ＋／ｋ＋－ａＴＰ酶活性的变化。结果表明：随着盐度的升高和胁迫时间的延长，肝脏中ｓｏＤ和ｃａＴ活性开始显著增强，到达一定强度后又逐渐下降。而ｇＰＸ活力表现出降低的趋势，尤其在低盐度条件下，与．．．

为探讨高pH急性和慢性胁迫对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)非特异性免疫和抗氧化能力的影响,分别设置对照(pH 7.6)和试验(pH 10.2)2个pH处理组,对克氏原螯虾进行急性(0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、5 d)和慢性(10 d、15 d)pH胁迫试验。结果显示:高pH应激后,试验组血浆总蛋白(TP)含量和酸性磷酸酶(ACP)活性呈上升趋势。高pH急性胁迫下,24 h内试验组血浆碱性磷酸酶(AKP)呈先上升后下降趋势,5 d AKP活性显著上升;试验组血浆血糖(GLU)及皮质醇(CORTISOL)含量于pH胁迫5 d后达到峰值,且显著高于对照组;试验组肝胰腺超氧化物歧化酶(SOD)活性呈下降趋势,并于24 h开始显著低于对照组;试验组肝胰腺谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性在3～24 h显著低于对照组;试验组鳃乳酸脱氢酶(LDH)活性先下降后上升。高pH慢性胁迫下,试验组血浆AKP、ACP活性显著高于对照组;试验组血浆GLU及CORTISOL含量、鳃LDH活性呈下降趋势,肝胰腺SOD则呈上升趋势;肝胰腺GSH-Px、MDA水平于胁迫10 d时达到峰值。结果表明,高pH急性胁迫会对克氏原螯虾的免疫防御机制产生影响,导致氧化应激,随着胁迫时间的延长(慢性胁迫),机体部分非特异免疫和抗氧化指标逐步恢复。

虾青蛋白(Crustacyanin， CRCN)在甲壳动物脂类代谢及低氧胁迫应激调控等方面具有重要的功能。为获取虾青蛋白在克氏原螯虾(Procambarus clarkii)性腺发育和低氧胁迫应答中的作用，本研究在克氏原螯虾肝胰腺组织中鉴定出1个类虾青蛋白PcCRCN-L基因的cDNA序列，分析了PcCRCN-L基因的结构特征和进化模式，研究了PcCRCN-L基因在不同组织与性腺不同发育时期的表达特征，探讨了PcCRCN-L在低氧–复氧胁迫下的表达响应模式。结果显示，PcCRCN-L基因cDNA序列长2 700 bp，其开放阅读框(ORF)长度为1 587 bp，编码528个氨基酸残基；DNA序列长6 130 bp，位于克氏原螯虾基因组的第12号染色体，包含5个外显子和4个内含子，内含子/外显子剪接方式符合GT-AG规则。PcCRCN-L具有1个完整的lipocalin结构域，包含典型的序列保守区Ⅰ(SCR1)序列G-X-W、保守区Ⅱ(SCR2)序列T-D-Y和保守区Ⅲ(SCR3)序列精氨酸R。多序列比对与系统进化分析结果显示，PcCRCN-L独立于传统虾青蛋白A和C亚族，单独聚为一支。PcCRCN-L在克氏原螯虾多个组织中均有表达，在肝胰腺中表达量最高；在性腺不同发育时期，肝胰腺以及卵巢组织中的PcCRCN-L基因表达量显著降低；低氧胁迫下，肝胰腺组织中PcCRCN-L表达量显著降低，复氧后显著升高。研究结果表明，PcCRCN-L与克氏原螯虾性腺发育密切相关，并参与了克氏原螯虾的低氧–复氧胁迫应激调控。

为探究海水酸化与溴氰菊酯（DM）复合暴露对皱纹盘鲍稚鲍的毒性效应，采用3个pH值（8.1、7.7和7.4）和3个溴氰菊酯浓度（0、0.6和6.0 μg/L）对稚鲍进行复合胁迫，并对贝壳微观结构与硬度、组织中抗氧化酶活性以及应激、凋亡相关基因表达量进行了检测。结果显示，经过海水酸化与溴氰菊酯复合暴露31 d后稚鲍贝壳CaCO_(3)晶体沉积困难，文石板片变小并形成分散的板层堆叠，文石板片之间孔隙增大，并且伴随着贝壳硬度的显著降低。同时，海水酸化与溴氰菊酯能够引起稚鲍组织抗氧化酶活性的改变，其中超氧化物歧化酶（SOD）活性随着pCO_(2)与溴氰菊酯浓度的上升而持续降低，并且在海水酸化与溴氰菊酯复合暴露下稚鲍SOD活性明显低于单一暴露物，说明海水酸化与溴氰菊酯对稚鲍SOD活性的影响具有明显交互作用。而在相同pH暴露下，溴氰菊酯能够使稚鲍CAT与GST活性显著上升。此外，本研究还观察到了稚鲍组织中应激基因与凋亡相关基因表达量随着pCO_(2)与溴氰菊酯浓度的上升均有提高，并且海水酸化与溴氰菊酯暴露在HSP70、HSP90、Caspase-3以及FADD等基因表达量上具有明显协同作用。研究表明，海水酸化与溴氰菊酯暴露能够对稚鲍产生明显毒害效应，并且在引起稚鲍组织氧化应激与细胞凋亡的反应中具有一定交互作用。

以克氏原螯虾(Procambarus clarkii)酚氧化酶(PO)为材料,采用L-DOPA为反应底物,分光光度计测定不同温度和pH条件下PO活力,研究克氏原螯虾PO的特性,为其免疫学研究及优化PO准确测定方法提供依据。结果显示PO活力最高时的温度为35℃,低于和高于35℃活力逐渐下降,45℃以上活力迅速下降;0℃仍具有最高活力的24%。在pH4.0～9.5内PO均具有活力,鳃组织最佳pH5.5,血清最佳pH6.5。因此测定克氏原螯虾PO活力的最佳参数为温度35℃,pH5.5(鳃)或6.5(血清)。以上结果说明冰浴终止反应法测定克氏原螯虾PO活力会影响结果的准确性,要慎用。

将克氏原螯虾(Procambarus clarkii)成虾在Zn2+质量浓度为0、0.40 mg/L、4.04 mg/L和40.37 mg/L的硫酸锌溶液中浸浴21 d,分别于第7、14和21天时每组随机抽取5只虾,采集肝胰腺、鳃、触角腺、性腺、肌肉及消化道组织,于Bouin′s液中固定24 h。采用石蜡切片和HE染色的方法,观察其组织的病理变化,从组织学水平研究硫酸锌对克氏原螯虾的慢性毒性作用。结果显示,浸浴时各Zn2+浓度组肝胰腺、触角腺细胞质中出现被染成红棕色的颗粒,且颗粒的数量与浸浴浓度及时间成正相关。0.40 mg/L组在浸浴期间各组织均未出现其他明显病变;4.04mg/L组及40....

采用石蜡切片技术，结合生物酶的测定，以体重（２５．８８±４．４０）ｇ的克氏原螯虾（Ｐｒｏｃａｍｂａｒｕｓ ｃｌａｒｋｉｉ）为研究对象，研究了低ＰＨ胁迫对克氏原螯虾鳃和肝胰腺生理代谢与组织结构的影响。在得出９６ Ｈ ｌｃ５０的基础上，将克氏原螯虾暴露于半致死浓度ＰＨ水体中９６ Ｈ，以ＰＨ７．６作为对照，并于胁迫后０ Ｈ、２ Ｈ、８ Ｈ、２４ Ｈ、９６ Ｈ采集鳃和肝胰腺样品，测定鳃部分代谢酶和肝胰腺主要抗氧化指标，并对鳃和肝胰腺组织进行切片观察。实验结果表明，ＰＨ ９６ Ｈ ｌｃ５０为３．６７５。低ＰＨ暴露后，实验组鳃Ｎａ～＋－ｋ～＋－ａＴＰ酶和乳酸脱氢酶（ｌａｃＴａＴｅ ｄｅＨｙｄｒｏｇｅＮａｓ．．．

舞毒蛾是重要林业食叶害虫，揭示其Ｇ蛋白偶联受体介导Ｇ蛋白对ＧＳＴＳ的调控，这对于挖掘分子靶标开发新型杀虫剂具有重要意义。本文构建转ＬｄＯＡ１基因果蝇载体，获得表达ＬｄＯＡ１基因果蝇品系，分析了转基因果蝇ＧＳＴＳ基因表达量及对溴氰菊酯胁迫的响应，为明确昆虫ＯＡ１基因功能提供理论依据。通过传统的酶切－连接方法构建重组载体ｐＵＡＳＴ－ＡＴＴ Ｂ－ＬｄＯＡ１，采用转基因技术构建表达ＬｄＯＡ１基因的纯合果蝇品系；利用ｐＣＲ技术验证转基因果蝇品系；并运用实时荧光定量ＲＴ－ｐＣＲ技术测定转基因果蝇ＧＳＴＳ ｄｅＬＴＡ家族基因表达量及低浓度溴氰菊酯胁迫对ＧＳＴＳ基因表达量的影响。ｐＣＲ扩增条带显示转ＬｄＯＡ１．．．

以克氏原螯虾(Procam barus clarkii)为材料,研究温度、pH对其血清酚氧化酶活力及稳定性的影响。实验以L-dopa为反应底物,在试验设计的温度范围(20,30,40,50,60,70℃)内,测得酚氧化酶活力的最适温度为20℃,随温度升高酶活力迅速下降,该酶在20~40℃范围内表现出较高的热稳定性,而30℃时最稳定;该酶的最适pH 7.0,在pH 6.0和7.0的缓冲系统中表现出较强的稳定性。

为探究芡实(Euryale ferox)提取物对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)生长免疫的影响,本实验按照饲喂饲料芡实提取物的添加浓度分为对照组(0 g/kg)、0.5%芡实组(5 g/kg)、1%芡实组(10 g/kg)和2%芡实组(20 g/kg),连续投喂克氏原螯虾28 d,实验结束后测定克氏原螯虾的生长参数和嗜水气单胞菌攻毒后的存活率,并分析了抗氧化酶活、免疫相关酶活和相关基因表达情况。结果显示:芡实提取物对克氏原螯虾的生长和嗜水气单胞菌攻毒后的存活率没有影响。与对照组相比,0.5%芡实饲喂显著增加了克氏原螯虾血清中的酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活性,而1%和2%芡实血清中的ACP活性显著降低,2%芡实组克氏原螯虾血清中的SOD活性显著增加。在肝胰腺中,0.5%芡实组克氏原螯虾的ACP活性也显著增加,但其它酶活没有显著变化。荧光定量PCR的结果显示,2%芡实显著增加了克氏原螯虾CypA和GPxs mRNA的表达,而Astacidin mRNA的表达在各组之间均无显著差异。综上结果表明,芡实提取物能在一定程度上增强克氏原螯虾的抗氧化能力和免疫力,而不影响其生长。

为探究低氧-复氧胁迫对罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii）仔虾存活及机体抗氧化因子的影响，本研究分别将罗氏沼虾仔虾放入溶解氧浓度1.0、1.2和1.4 mg/L的水体中进行胁迫，测定并估算胁迫开始后第4、8、12、24、48和72h存活率及半致死浓度(LC₅₀)；随后将罗氏沼虾仔虾重新放入溶解氧浓度为2.2mg/L的水体中进行低氧胁迫72小时后，再将水体溶解氧浓度在4h内恢复至6.0mg/L、12h内恢复至8.4mg/L，测定低氧胁迫第0、4、8、12、24、48、72小时以及复氧胁迫后第4、12小时鳃、肝胰腺及肌肉组织中抗氧化酶（SOD、CAT、GSH-PX）、磷酸水解酶（AKP、ACP）活力及丙二醛（MDA）含量。结果表明，罗氏沼虾仔虾在3种低氧浓度胁迫下死亡率及LC₅₀值均随胁迫时间延长而逐渐上升，且低氧胁迫后第12、24小时死亡率显著高于第4、8小时死亡率（P＜0.05）。在低氧胁迫0至72小时内，罗氏沼虾仔虾鳃、肝胰腺和肌肉组织SOD、CAT和GSH-PX活力呈现先上升后显著降低（P＜0.05）、复氧胁迫后又显著上升的变化趋势（P＜0.05）；在低氧胁迫72h后再复氧胁迫时，肝胰腺AKP、ACP活性显著高于鳃、肌肉组织，且AKP、ACP活力均呈现低氧胁迫时先显著上升（P＜0.05）后逐步降低、复氧后先降低再上升的变化趋势；鳃、肝胰腺和肌肉中组织MDA含量呈现先上升而后不断降低直至复氧后再次回升；在低氧胁迫第12～24小时内，鳃、肝胰腺、肌肉组织中SOD、CAT和GSH-PX活力的上升及下降均发生显著变化（P＜0.05）。综上所述，低氧及低氧-复氧胁迫均影响了罗氏沼虾仔虾存活及抗氧化能力，且低氧胁迫后第12～24小时为罗氏沼虾仔虾应激响应的关键时间点，研究结果将为揭示罗氏沼虾低氧及低氧-复氧胁迫下生理生化响应机制提供基础理论参考。

【目的】探究晒田环境胁迫下克氏原螯虾卵巢发育相关生化指标和激素的变化及对卵巢发育的影响，为晒田环境胁迫促进克氏原螯虾卵巢成熟这一生产操作的改良和标准化提供理论依据，促进克氏原螯虾产业可持续发展。【方法】将2个面积为1300m~(2)的池塘中投放的克氏原螯虾分别作为晒田组和对照组，以晒田组排干水为试验起点，晒田组排水晒田10d，对照组正常养殖。分别在晒田环境胁迫0、3、7、10 d采集2组中的雌性克氏原螯虾，每次采样数量为30只，测量、称重后取卵巢、肝胰腺和血清，检测卵巢发育相关的生化指标[碱性磷酸酶（AKP/ALP）、酸性磷酸酶（ACP）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、前列腺素F2α（PGF2α）、前列腺素E2（PGE2）]、性类固醇激素[雌酮（Estrone）、17β-雌二醇（17β-E2）、睾酮（T）、孕酮（PROG）]、高血糖家族激素[高血糖激素（CHH）、性腺抑制激素（GIH）、蜕皮抑制激素（MIH）、大颚器抑制激素（MOIH）]和卵巢发育相关激素[蜕皮激素（Ecdysone）、甲基法尼酯（MF）、皮质醇（Cortisol）]，并进行对比分析。【结果】随着时间增加，晒田组雌性克氏原螯虾卵巢成熟率高于对照组，卵巢发育分期主要分布在IV期。生化指标试验结果表明，晒田胁迫0 d时，晒田组雌性克氏原螯虾不同组织中AKP/ALP、ACP、GSH-Px、PGF2α和PGE2含量均显著低于对照组（P<0.05，下同）或与对照组雌性克氏原螯虾无显著差异（P>0.05，下同）；晒田胁迫3和7 d时，晒田组雌性克氏原螯虾不同组织中生化指标含量均显著高于对照组或与对照组雌性克氏原螯虾无显著差异；晒田胁迫10 d时，晒田组雌性克氏原螯虾不同组织中生化指标含量均显著高于对照组雌性克氏原螯虾。性类固醇激素试验结果表明，晒田胁迫0和3 d时，晒田组雌性克氏原螯虾血清中Estrone、17β-E2、T和PROG含量显著高于对照组或与对照组雌性克氏原螯虾无显著差异；晒田胁迫7和10 d时，晒田组雌性克氏原螯虾血清中性类固醇激素均显著高于对照组雌性克氏原螯虾。高血糖家族激素试验结果表明，晒田胁迫0 d时，晒田组雌性克氏原螯虾血清中CHH、GIH、MIH和MOIH含量均显著高于对照组雌性克氏原螯虾；晒田胁迫3和7 d时，晒田组雌性克氏原螯虾血清中高血糖家族激素含量显著高于、低于对照组或与对照组雌性克氏原螯虾无显著差异；晒田胁迫10 d时，晒田组雌性克氏原螯虾血清中高血糖家族激素显著低于对照组或与对照组雌性克氏原螯虾无显著差异。卵巢发育相关激素试验结果表明，晒田胁迫0 d时，晒田组雌性克氏原螯虾血清中Ecdyone、MF和Cortisol含量均显著高于、低于对照组或与对照组雌性克氏原螯虾无显著差异；晒田胁迫3 d时，晒田组雌性克氏原螯虾血清中卵巢发育相关激素显著高于对照组或与对照组雌性克氏原螯虾无显著差异；晒田胁迫7和10 d时，晒田组中卵巢发育相关激素均显著高于对照组。【结论】晒田环境胁迫能促进克氏原螯虾卵巢成熟，加快卵巢发育相关生化指标和激素的变化。晒田胁迫7～10 d时，促进卵巢发育成熟的效果达峰值。