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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
金雯雯 王德迪 潘增祥 决肯 李齐发
［目的］为了解湖羊和巴什拜羊骨形态发生蛋白１５（ＢＭＰ１５）基因编码区和５＇调控区（５＇ＵＴＲ）序列特征与差异，检测其ＳＮＰＳ（ＳｉＮｇｌｅ ＮＵｃｌｅｏＴｉｄｅ ＰｏｌｙＭｏＲＰｈｉＳＭＳ）并探索其功能。［方法］利用克隆测序技术获得湖羊和巴什拜羊ＢＭＰ１５基因编码区和５＇ＵＴＲ序列，运用生物信息学方法分析其序列特征；采用ｄＮＡ池测序法筛选湖羊和巴什拜羊ＢＭＰ１５基因ＳＮＰＳ，直接测序法检测ＳＮＰＳ位点多态性；采用荧光素酶报告基因系统检测启动子区活性。［结果］湖羊和巴什拜羊ＢＭＰ１５基因编码区序列长度均为１ １８２ ＢＰ，编码３９３个氨基酸，编码蛋白含有典型的ＴｇＦ－β结构域；湖羊和巴什拜羊Ｂ．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
贺三刚 陈芯 刘晨曦 刘国松 刘明军
采用测序和PCR-RFLP的方法,分析了MSTN基因启动子区在7个品种绵羊中的单核苷酸多态性,结果表明:存在2个SNP位点(-959T/C,-784G/A),表现为6种基因型(TT、TC、CC、GG、GA、AA),在-959T/C位点中,国外肉用绵羊品种陶赛特、德国肉用美利奴及我区的巴士拜羊,TT为优势基因型,地方品种绵羊巴音布鲁克羊、多浪羊和阿勒泰羊在该位点中CC为优势基因型,经χ2检验,其群体的基因频率和基因型频率均处于Hardy-Weinberg平衡状态,群体遗传多态性分析表明,这6个绵羊品种中群体的多态信息含量(PIC)均处于0.25～0.50之间,为中度多态,特克赛尔羊在该位点未发生...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
徐业芬 李齐发 李二林 涂飞 胡冬利 谢庄 陈玲
【目的】研究湖羊卵巢组织BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数的相关性,筛选影响湖羊多胎性状的候选基因,为揭示湖羊高繁多胎分子遗传机理提供参考。【方法】选取16只经产湖羊母羊,分为产单羔组和多羔组,发情后24～36h屠宰,取卵巢,计数排卵点,记录排卵数;应用RT-PCR技术检测BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因的组织表达特征,进一步利用实时荧光定量PCR技术分析各基因mRNA在单羔组和多羔组卵巢组织中的表达差异。【结果】BMP2、BMP4和BMP7基因在湖羊母羊卵巢组织内表达,而且在垂体及下丘脑、子宫、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、输卵管组织中均有表达...
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨燕燕 邵凯 达来 曹贵方 苏和 田瑛 杭乃诚 乌达巴拉 青格勒
选择影响Invedal和Hanna绵羊多胎性状的BMP15基因作为多胎候选基因,旨在探索该候选基因与蒙古羊双羔群体繁殖性状之间的关系,为开展蒙古羊高繁殖力的遗传学基础研究提供科学依据。本试验以蒙古羊单羔群体(18只)、多胎类型小尾寒羊(30只)为对照组对蒙古羊双羔群体(50只)进行了BMP15基因的遗传多态性分析,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性PCR-RFLP(Restriction Fragment Polymor-phisms,RFLPs)分子标记技术对BMP15的FecXI位点突变进行多态性分析;采用单核苷酸多态性标记PCR-SSCP技术对BMP15的B1位点进行多态性分析,结...
关键词：
羊 多胎 BMP15基因
[期刊] 华北农学报
[作者]
李君 闫志浩 贾万里 许蒙蒙 张景锋 徐秋良 韩浩园 权凯
脂肪甘油三酯水解酶(ATGL)是脂肪水解过程中的主要限速酶，是调控细胞中甘油三酯和脂肪酸之间平衡的关键因子。为了分析奶山羊ATGL基因启动子的结构及转录调控机制，以奶山羊全血DNA为模板，通过PCR技术扩增出ATGL基因5′侧翼序列并进行生物信息学分析；构建了5个不同长度的启动子缺失片段报告基因载体，通过转染奶山羊乳腺上皮细胞并检测其活性，确定其核心区域；分别用PPARG激动剂罗格列酮和SREBP1激动剂T0901317处理细胞，检测其对ATGL启动子活性的影响。结果表明，克隆得到奶山羊ATGL基因5′侧翼序列2 721 bp,包含转录起始位点上游2 024 bp。经在线软件分析发现，ATGL启动子含有真核生物启动子元件TATA-box和CpG岛；对转录因子结合位点预测发现，其上含有FOXO、SREBF1、PPARG、C/EBPα和E2F1等结合位点。启动子活性分析结果表明，ATGL启动子核心区域位于转录起始位点上游-256—+1位，且在-527—-256位存在负调控元件。用罗格列酮和T0901317处理细胞后发现，二者均能显著上调ATGL启动子活性，且罗格列酮作用的区域为-527—-256位，T0901317在-882—-527位发挥作用，表明PPARG和SREBP1调控ATGL启动子活性。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周荣艳 魏彦辉 锡建中 李兰会 陈辉 高立杰 张振红
【目的】分析山羊ＰＲＮＰ基因启动子活性区域，旨在筛选调节朊蛋白表达水平的关键区域或转录因子，为阐明山羊ＰＲＮＰ基因的表达调控提供理论依据，并为从遗传学角度降低朊蛋白病的发生提供思路；【方法】以山羊ＰＲＮＰ基因序列（ＧｅＮ ＢａＮｋ登录号：ｅＵ８７０８９０）为模板，设计特异性引物，扩增山羊ＰＲＮＰ基因５′侧翼区片段，并将扩增片段克隆至Ｐ ｅａＳＹ－Ｔ３载体，鉴定为阳性的克隆进行测序；利用生物信息学方法和在线工具进行启动子区域和转录因子结合位点的预测；利用缺失突变技术扩增启动子区不同长度的片段１１个，并克隆至Ｐ ｅａＳＹ－Ｔ３载体后，鉴定为阳性的质粒和ＰＧＬ３－ＢａＳｉｃ载体分别用限制性内切酶ＭＬ．．．
关键词：
山羊 PRNP基因 启动子 转录活性
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李硕 郝斐 吴海青 毕兆伟 张志鹏 刘东军 仓明
【目的】肌细胞生成素(myogenin,MyoG)是生肌调节因子(MRFs)基因家族中唯一能在骨骼肌细胞发育与生长过程中均可表达的调控因子,在肌肉细胞分化过程中起着中心调控的作用,它正调控着骨骼肌卫星细胞向成熟肌细胞分化的过程,是唯一不可代替的生肌调节因子。MyoG基因在复制、扩增、基因激活、转录、翻译等多级水平上对肌肉发育进行调控。基因转录的起始阶段是机体生长发育因子进行调控的开端,而此阶段调控的实质是通过启动子和上游调控序列的相互作用,调控目的基因的表达。因此克隆MyoG基因的启动子,探讨启动子区域的启动活性,有助于从理论上揭示MyoG基因表达的关键调控位点,同时也有利于揭示肌肉发育调控的...
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘永斌 何小龙 王峰 荣威恒 田春英 达赖
采用PCR-SSCP技术对蒙古羊BMP15基因外显子1位点的单核苷酸多态性(SNP)进行了检测,并对其与产羔性能关系进行了分析。结果表明,在所检测的116个蒙古羊个体中,BMP15基因在该位点均呈现多态性,具有++、A+和AA 3种基因型。测序分析表明,该段DNA序列中存在3个碱基的缺失,即编码区第28,29,30位碱基缺失,这个突变使野生型(++)氨基酸序列上相应的10号氨基酸残基亮氨酸(L)缺失,变成了突变基因型(AA),形成B1突变体;群体遗传学分析表明,B1突变在双羔系中的发生频率高于单羔系中发生的频率,χ2适合性检验结果表明,两品系在该位点具有中度多态性并处于Hardy-Weinbe...
关键词：
蒙古羊 BMP15基因 多态性 产羔数
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李晓林 牛志刚 陈莹 塔纳普·别克 夏江涛 魏玉刚 史洪才 贾斌
【目的】阿勒泰羊是新疆北部地区重要的产多羔绵羊品种,但一直未找到影响其高繁殖力的主效基因。以影响排卵数的BMP15基因作为候选基因,从分子水平上对阿勒泰的多胎机制进行研究。【方法】以PCR直接测序法获得SNP位点,分析突变位点的特性,并通过大规模的群体检测统计推断其遗传效应。【结果】阿勒泰羊在BMP15基因的内含子667 bp和外显子2的755 bp处发生突变,2个位点均只有2种基因型,且纯合子为优势基因。与产羔数关联分析发现仅外显子2的755 bp处位点2种基因型差异显著,经群体验证得到同样结果,TC型
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王秋实 汪琴 韦伟 张鑫宝 夏梦圆 张立凡 陈杰
【研究目的】本实验旨在研究酰基辅酶A合成酶家族成员2（ACSF2）基因启动子区突变c.-751 A>C与扬州鹅产蛋性能的相关性，并分析该突变位点对基因表达的调控作用。【方法】本研究利用等位基因特异PCR（AS-PCR）在343个扬州鹅个体中对c.-751 A>C位点进行基因型分析，并与产蛋性能关联分析；利用荧光定量PCR（qPCR）和荧光素酶表达载体检测AA型和CC型启动子活性差异；通过ACSF2过表达实验分析该基因对颗粒细胞能量代谢途径及鹅产蛋性能的影响。【结果】AA基因型个体产蛋性能显著优于CC基因型个体（P<0.05），与AC基因型个体的产蛋性能没有显著差异；qPCR结果表明AA基因型个体卵巢组织中ACSF2基因mRNA表达量显著低于CC基因型个体（P<0.01）；荧光素酶表达载体的转录活性检测结果同样表明AA型启动子活性显著低于CC型。在扬州鹅卵泡颗粒细胞中过表达ACSF2基因，参与能量代谢的基因表达发生显著变化，ATP浓度显著升高（PC变异能够改变该基因的表达水平，通过改变颗粒细胞能量代谢进而影响扬州鹅的产蛋量。该突变位点可作为扬州鹅产蛋性能选育的分子标记。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
裴文宇 云杰 荣恩光 杨华 王志鹏 王守志 李辉 王宁
【目的】通过开展绵羊Dlx3基因启动子结构、活性、多态性及其与羊毛品质性状的关联等分析,揭示Dlx3基因在绵羊毛囊发育中的作用及其作用机制。【方法】采用PCR扩增Dlx3基因起始密码子上游1.5 kb区域,利用荧光素酶报告基因技术分析Dlx3基因启动子活性,采用测序方法寻找Dlx3基因启动子区SNP,并利用PCR-RFLP技术进行SNP分型。【结果】①Dlx3基因启动子近端序列的保守性较高,该区域内人、鼠及绵羊都具有23个保守的转录因子结合位点和一个CpG岛,而启动子的远端序列的保守性较低;②Dlx3基因的启动子在绵羊胚胎成纤维细胞中具有启动子活性;③Dlx3基因启动子的-1 551—-1 1...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王继雪 孙延鸣
【目的】为扩增巴什拜羊的肺表面活性物质相关蛋白A(Pulmonary surfactant-associated protein A,SP-A)基因cDNA全长序列并对该序列进行分析。【方法】根据已报道的GenBank中绵羊SP-A基因的开放阅读框序列来设计RACE引物,后用RACE法对巴什拜羊SP-A基因的3’端和5’端序列进行扩增,经华大公司测序和DNAMAN软件拼接最终得到巴什拜羊的SP-A基因cDNA序列全长。【结果】克隆得到SP-A基因的cDNA其全长为1962 bp,其开放阅读框序列长度为789 bp,编码的氨基酸数量为262,经DNASTAR软件分析其蛋白的分子量为27.53 kDa,等电点4.949。分析系统进化树后发现巴什拜羊与绵羊氨基酸的序列同源性最高。【结论】本研究结果可为后续更加深入研究新疆巴什拜羊SP-A基因的功能奠定基础。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张爱玲 孙显月 张哲 李加琪 张豪
通过双荧光素酶报告基因载体系统检测猪抗酶１（ＡＺ１）基因启动子转录活性，分析蓝塘和长白猪群体ＡＺ１基因启动子ＳＮＰ及单倍型，在此基础上比较不同单倍型转录活性。结果表明：－４５３／＋７９为核心启动子区；在２个群体中检测到ＡＺ１基因启动子８个ＳＮＰＳ，分别为－７１３ Ｔ＞Ｃ、－５８４ Ａ＞Ｃ、－４７６ Ｇ＞Ａ、－３６５ Ｔ＞Ｃ、－３４８ Ｃ＞Ｔ、－２９４ Ｇ＞Ｃ、－２８８ Ｔ＞Ｇ和－２３４ Ｔ＞Ｃ，蓝塘猪群体具有更丰富的单核苷酸多态性，而长白猪群体仅在－２８８座位存在ＧＧ和ＧＴ ２种基因型，其他７个ＳＮＰＳ均为纯合状态；蓝塘猪群体ＬＴＨ１单倍型（ＴＡＧＣＣＧＴＣ，－７１３／－２３４）频率为０．５２．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
邰志鹏 徐异桓 张电光 谭肖英
为研究黄颡鱼bmp2a与bmp4基因的功能及其相关转录因子的调控网络,采用RLM-5′RACE方法确定bmp2a与bmp4基因的转录起始位点,通过hiTAIL-PCR方法克隆bmp2a与bmp4基因启动子序列并运用生物信息学方法预测启动子序列上的关键转录因子结合位点。结果显示,bmp2a与bmp4基因的转录起始位点分别位于bmp2a与bmp4基因编码区上游的391bp与351bp处。克隆bmp2a与bmp4的1 830bp、1 962bp启动子序列,在启动子序列的基础上预测出AP1、SP1、E-box、GATA1、CREB、PPARγ、SOX5、SOX6和SOX9等转录因子的结合位点,提示这些转录因子对bmp2a与bmp4基因的转录调控发挥潜在的重要作用。
关键词：
黄颡鱼 骨形态形成蛋白 启动子 转录因子
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘永斌 荣威恒 王峰 何小龙 田春英
BMP15基因主要在哺乳动物卵巢中表达,对卵泡的发育和分化起重要作用。根据其他物种BMP15基因的保守序列设计特异性引物,扩增蒙古羊的全长DNA序列。从蒙古羊的血液中提取总DNA,采用PCR技术扩增出蒙古羊BMP15DNA序列。将此片段克隆到PMD18-T载体中,经菌落PCR鉴定和DNA序列测定分析验证,证实所克隆序列BMP15为骨形态发生蛋白,符合骨形态发生蛋白基因的特征。序列分析表明,该DNA包含两个外显子序列和一个内含子序列以及两端的非翻译序列,全长6 642 bp,编码393个氨基酸,蒙古羊与牛的同源性最高(98.6%),与猪的同源性为90.5%。
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