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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
魏庆信 樊俊华 陈东宝 李绍章 胡宏宇 华文君 王翀
以湖北白猪为实验材料,显微注射OMT/PGH基因(绵羊启动子和猪生长激素的融合基因)于1125枚1～4细胞期的早期胚胎核内,共产仔167头,产仔率14.8%。Dot(斑点杂交)和Southern blot(印迹转膜杂交)检测,29头阳性,阳性率17.9%。通过传代进行转基因的遗传分析。G_0×G_0的配种组合,产仔63头,其中阳性20头,阳性率31.7%;G_0×非转基因猪的组合,产仔66头,其中阳性10头,阳性率15.2%。对11头G_0猪血清用放射免疫法测定的结果,其生长激素的浓度相当于对照组的2.03～6.70倍。16头G_0猪180日龄的生长速度比同窝对照提高11.8%;11头G_1猪...
关键词：
OMT/PGH基因 整合 表达 遗传 猪
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
梁永红 邓昌彦 熊远著
以人源小卫星探针３３．１５分析了通城猪和湖北白猪Ⅲ系的ＤＮＡ指纹图谱。结果表明，通城猪平均１０．５８条带，湖北白猪Ⅲ系平均１６．５条带。ＤＮＡ指纹图谱相似系数通城猪为０．７９７，湖北白猪Ⅲ系为０．７２３。湖北白猪Ⅲ系２条特征带为２．７ｋｂ和４．２ｋｂ。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
梅书棋 胡华 李勇 孙华
利用湖北Ⅵ系继选育群１９９０～１９９７年生长和胴体性能测定资料，对湖北白猪生长及胴体性状的遗传参数进行了估计。结果表明：遗传力的估计范围内，生长性状各组分间表现为较强的相关关系（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）胴体性状各组分间表现为中到低的相关关系。通过相关关系分析得出生长性状应注重和６月龄重的选择，胴体性状表现为多基因或基因组控制且之间的交互作用大，应采取综合性状选择。
[期刊] 水产学报
[作者]
姜鹏 白俊杰 简清
为了评估转红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)基因唐鱼新品系的稳定性,研究了RFP基因在不同世代转基因唐鱼中的遗传和表达情况。荧光显微镜下观察显示,RFP基因在F6和F10代所检测的组织器官中均有表达,并且两个世代间相同组织部位的表达水平相似。F6和F10代个体分别配对繁殖实验表明,RFP基因在转基因唐鱼后代中的遗传仍然符合孟德尔分离规律,而且培育出的转基因个体表型特征无显著差异。利用PCR技术在F2、F6和F10代转基因唐鱼基因组中扩增外源性肌球蛋白轻链2启动子、RFP基因编码区和整合位点上下游侧翼区域(片段总长度为4 883 bp),测序结果显示,3个世代...
关键词：
唐鱼 红色荧光蛋白 基因 表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
姚延珠 吴明明 孙金海
旨在构建可高效表达ｐＧＨ基因和ＩＧＦ－Ⅰ基因的双基因共表达载体，制备转双基因（ｐＧＨ＋ＩＧＦ－Ⅰ）猪，以期探索ｐＧＨ基因和ＩＧＦ－Ⅰ基因对猪生长发育的影响，为节粮型高瘦肉率新品种猪的培育奠定理论基础。从长白猪耳样中提取总ＲＮＡ，经反转录ＲＴ－ｐＣＲ获得ｐＧＨ基因不含终止密码子的编码序列和ＩＧＦ－Ⅰ基因完整的编码序列，经酶切连接克隆至ｐＣ ＤＮＡ３．１（＋）真核表达载体上，构建ｐＣ ＤＮＡ３．１（＋）－ｐＧＨ－ＩＧＦ－Ⅰ双基因共表达载体。将其转染ｐＫ１５细胞，Ｑ－ｐＣＲ检测２个目的基因在ｐＫ１５细胞中的表达情况。将构建的双基因共表达载体用纳米材料包裹后转染长白猪精子，采用精子载体法制备转双基因猪．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
闫喜中 张锐 孟志刚 孙国清 周涛 郭三堆
采用花粉管通道法将含有Bt杀虫基因的pG4AB质粒导入受体棉花中23中,通过卡那霉素筛选,Bt免疫检测条检测,PCR扩增对转基因抗虫棉的各个自交世代进行跟踪研究。结果表明,具有卡那霉素抗性的单株能扩增出Bt基因,而且均有Bt杀虫蛋白表达。Bt基因与npt Ⅱ基因均整合进了棉花基因组中,相互之间紧密连锁遗传,均稳定表达,因此报告基因npt Ⅱ可用于研究Bt基因的遗传情况。
关键词：
Bt基因 npt Ⅱ基因 遗传 表达
[期刊] 西南农业学报
[作者]
叶春秀 赵增强 张国丽 于航 庄振刚 谢宗铭
【目的】本文研究了蛋白激酶类基因在甜瓜白粉病抗性中的抗性机理。【方法】以不同抗性的甜瓜为材料,根据植物蛋白激酶类基的同源序列设计引物,采用RT-PCR方法获得该基因的中间部分序列,通过RACE法获得c DNA完整序列,将其命名为CmPKC。【结果】该基因全长约为2914 bp,开放阅读框为2493 bp,编码831个氨基酸。蛋白序列进化分析表明,CmPKC蛋白与香瓜蛋白激酶同源性最高。实时荧光定量PCR分析表明在不同抗性材料上相对表达量变化趋势不同,在抗性材料上表达丰度出现的时间较感病材料早,且在不同材料上相对表达量变化趋势与已报道的一个甜瓜感病相关MLO家族基因一致,推测所获得的基因也可能与感病相关,且属于早期应答基因;转基因烟草鉴定初步表明该基因可能还参与生长发育过程,具有促进开花的功能。【结论】将为更加深入探索其功能及在白粉病抗性通路中及生长发育过程中所起的作用奠定基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨煜 郭晓 郭宝太 杨晓慧 单伟伟 金黎平 马伟清 李广存
以高抗青枯病二倍体马铃薯基因型ED13为材料,克隆了蛋白激酶基因StPki。以StPki基因特异区段为靶标,成功构建了该基因的RNA干扰植物表达载体pCHF1-StPki。利用重组农杆菌株LBA4404(pCHF1-StPki)感染转化ED13茎段外植体,获得了抗庆大霉素的再生植株。利用CaMV35S启动子特异引物对再生植株进行PCR检测,结果表明获得了转基因植株。利用StPki基因的特异引物对转基因植株进行半定量RT-PCR分析,结果显示该基因的转录受到了抑制。马铃薯抗病基因型ED13已被成功转化,且表现出了对StPki基因的RNA干扰活性。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
曹贝贝 兰培英 韩丽 刘玲玲 韦学雷 胡慧
【目的】研究猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）ＨＮ－２０１２株ＯＲＦ３ａ和ＯＲＦ３ｂ基因的遗传变异情况。【方法】根据ＧＥＮｂａＮｋ公布的猪传染性胃肠炎病毒ＯＲＦ３ａ和ＯＲＦ３ｂ基因序列，分别设计合成１对特异性引物，通过ＲＴＰＣＲ从猪传染性胃肠炎病毒ＨＮ－２０１２株的ＣＤＮａ中扩增ＯＲＦ３ａ和ＯＲＦ３ｂ基因，经克隆测序后，将其基因序列与ＮＣｂＩ中不同来源的ＴＧＥＶ毒株的相应序列进行同源性分析，构建系统进化树并进行遗传变异分析，然后将ＯＲＦ３ａ和ＯＲＦ３ｂ基因亚克隆至真核表达载体，构建ＰＣａＧＧＳ－ＯＲＦ３ａ－ＦｌａＧ和ＰＣａＧＧＳ－ＯＲＦ３ｂ－ＦｌａＧ载体，转染２９３Ｔ细胞进行表达，利用ＦｌａＧ标签．．．
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
姚雪倩 郑玉成 王鹏杰 林浥 郑知临 陈桂信 叶乃兴
从金观音—铁观音和金观音—黄旦差减文库中获得差异基因并进行功能分类;采用荧光定量PCR技术检测金观音与其亲本间差异基因表达量的变化,分析差异基因的表达模式,同时检测具有超高亲表达和低于双亲表达模式的基因在其他两个F_1黄观音和金玫瑰上表达量的差异.结果表明:差异基因包含参与生长发育、逆境胁迫和次生代谢等9类功能;与生长发育、逆境胁迫和次生代谢有关的基因在金观音及其亲本中均有表达,依据表达量的差异可分为5种表达模式;根据3个F_1品种与其共同父母本荧光定量表达量的差异,可将F_1品种的表达分为均超过双亲(杂种优势)、低于双亲(杂种劣势)、部分超过双亲和部分低于双亲(兼具杂种优、劣势)3种类型.
[期刊] 中国农业科学
[作者]
殷金凤 倪蓉 王庆增 孙伟 丁家桐 张有法 陈玲 吴文忠 周洪
【目的】研究BMP7基因对湖羊不同花纹形成的影响及其与毛囊性状的发育可能存在的调控机制。【方法】利用PCR-SSCP方法在205个样本中检测BMP7基因外显子1、2、3的单核苷酸多态性;通过组织学方法和显微观察法对湖羊皮肤毛囊进行组织学观察,对不同花纹皮肤组织中初级毛囊直径、次级毛囊直径、初级毛囊数、次级毛囊数进行统计分析;利用荧光定量PCR技术检测BMP7基因在大花、中花、小花间的相对表达量,用SPSS17.0软件进行差异显著性分析,探讨BMP7基因对湖羊不同花纹形成及其毛囊性状可能存在的调控机制。【结果】PCR-SSCP方法检测BMP7基因外显子1、2、3的单核苷酸多态性,结果均未发现多态...
关键词：
湖羊 BMP7 多态性 毛囊
[期刊] 西南农业学报
[作者]
韩海燕 李定琴 黄兴奇 余腾琼 殷富有 张敦宇 付坚 程在全
稻瘟病是水稻上最重要的病害之一。本研究所用Pi-ta+基因是一个来自景洪直立型紫秆普通野生稻的基因,该基因属于稀有的抗稻瘟病Pi-ta+等位基因,具有抗稻瘟病的能力;几丁质酶是一种以几丁质为底物的水解酶,它可以降解病原真菌细胞壁中的几丁质,破坏细胞新物质的沉积使病原体死亡。为获得抗稻瘟病的水稻新材料和进一步培育聚合多个抗稻瘟病基因的转基因水稻新品种,本研究采用一种新的方法构建了Pi-ta+和Bchi的双价表达载体pCAMBIA1300-Pi-ta+-Bchi,通过农杆菌介导法转入栽培稻品种云资粳41中,经过一定浓度的甘露糖筛选培养,分化得到的再生苗经氯酚红显色法和PCR检测,获得11棵转基因阳...
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨凤萍 梁荣奇 陈绪清 韩立新 张晓东
采用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)在蛋白质水平上对T2～T5代小麦转基因株系高分子量谷蛋白亚基(HMW GS)的遗传表达及其分离进行了鉴定和分析。结果发现,外源1Dx5和1Dy10基因在T2代部分株系中表达;在有的株系中出现了原亚基(8亚基)的缺失或沉默和新亚基(暂定8 )的产生,因而检测出2+5+10+12,2+5+7+8 +10+12,5+7+10,2+7+10+12的多种类型。对2+5+10+12型株系进行了多代跟踪分析,发现其在T2～T5代陆续发生分离,存在于不同单株、不同单穗的子粒和同一单粒后代之间。经筛选,获得了天然不存在的亚基类型为2+5+10+12,2+10+1...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
牛富彪 王丽君 杨菁 陈玲 王洪亮 贺花 刘小林
【目的】以秦川牛糖原磷酸化酶基因PYGM为候选基因,研究其在秦川牛生长和胴体性状形成中的作用。【方法】以300头(24±2)月龄纯种秦川牛为试验材料,通过DNA测序和PCR-RFLP技术,研究PYGM基因的多态性对秦川牛个体宰前活体质量、胴体质量、体高、体斜长和屠宰率共5个性状的影响;运用RT-PCR技术分析PYGM基因在秦川牛成体和4~5月龄胎牛2个阶段的肺脏、心脏、肝脏、舌、背最长肌及脾脏6种组织中的表达情况。【结果】半定量RT-PCR检测结果显示,PYGM基因在秦川牛胎儿和成年时期的心脏、舌及背最长肌组织中的表达量均显著高于其他组织。并在该基因中筛查到了2个新的单核苷酸变异(SNP)位点...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张立 王建锋 王晓杰 康振生 韩德俊
以小麦品种西农1376为受体,利用Overlapping PCR的方式构建了防御素基因alfAFP和抗菌肽基因spCEMA融合基因的表达载体,与pAHC20共转化幼胚愈伤组织,获得转基因再生T0代植株269株,春化后移栽成活188株。对叶片基因组DNA进行目的基因和bar基因PCR扩增表明其中7株是共整合植株,共整合频率为0.1%,初步证明融合基因已成功通过共转化方式导入受体小麦品种中。影响共整合率的因素分析表明,在使用除草剂PPT对bar基因进行筛选的过程中,筛选时间的缩短并不会明显降低筛选的效率。
关键词：
小麦 转基因 融合基因 共转化
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