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[期刊] 水产学报
[作者]
祝艳霞 母昌考 王春琳
为研究在环境因素变化后，菲律宾蛤仔Ｉ型溶菌酶参与免疫应答反应的变化模式，实验采用ｃ ＤＮＡ末端快速扩增技术，从菲律宾蛤仔体内克隆获得了一种Ｉ型溶菌酶基因的全长ｃ ＤＮＡ序列（命名为ＲｐＩ ＬＹＺ－２），该序列开放阅读框（ＯＲＦ）为４７１ ｂｐ，编码１５６个氨基酸。ＲｐＩ ＬＹＺ－２基因在所检测组织中均有表达，其中在外套膜中表达量最高，在肌肉组织中表达量最低。采用荧光定量ｐｃＲ法，研究了不同温度［（２９±１）、（２１±１）和（１３±１）°ｃ］、盐度（３２、２２和１２）及鳗弧菌刺激对菲律宾蛤仔Ｉ型溶菌酶基因表达的影响。结果显示，在温度２１°ｃ和盐度２２胁迫处理后，ＲｐＩ ＬＹＺ－１基因的表达量呈现．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
魏倩玉 母昌考 王春琳
为研究病原微生物刺激后,菲律宾蛤仔I型溶菌酶的免疫应答反应,实验采用重组表达技术,从菲律宾蛤仔中得到2种I型溶菌酶的重组蛋白rVpILYZ-1和rVpILYZ-2,发现其均具有较为广谱的抑菌活性;其中,rVpILYZ-1对副溶血弧菌、灿烂弧菌和藤黄微球菌等具较强的抑菌活性,而rVpILYZ-2对副溶血弧菌抑菌活性较强,且二者均通过非酶抑菌活性和胞壁酸酶活性来发挥抑菌作用。结果显示,rVpILYZ-1最适pH和温度分别为6.5和20°C,而rVpILYZ-2最适pH和温度则分别为4.5和10°C。此外,rVpILYZ-1和rVpILYZ-2均具免疫调理活性,能够促进血细胞对病原菌的吞噬作用。研究表明,VpILYZ-1和VpILYZ-2在菲律宾蛤仔清除病原微生物的免疫应答反应中发挥重要作用。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
孟祥宇 张艳丽 霍忠明 牟政强 王化敏 闫喜武
[期刊] 中国水产科学
[作者]
潘鲁青 宫晓莉 许超群 王琳
菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)样本壳高(2.76±0.18)cm,壳长(4.11±0.22)cm;四溴联苯醚(BDE-47)梯度设置为0.25、6.25μg/L,以海水组为对照,取样测定时间为0、1、3、6、10、15和21 d。结果表明:BDE-47对菲律宾蛤仔鳃丝和消化盲囊AhR、CYP4、GST-pi和Pgp mRNA表达影响显著(P<0.05),而对照组无明显变化。在实验时间内,各处理组鳃丝和消化盲囊AhR基因表达呈峰值变化,分别于第6天、第1天时达到最大值和最小值,然后恢复至对照组水平;各处理组组织CYP4和GST-pi基因表达均呈峰值变化,分别于第3天...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
刘淇 谢沙 赵玲 曹荣 万慧一 魏玉西
以菲律宾蛤仔为原料,比较其胃蛋白酶、酸性蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解产物的抑菌活性;利用正交实验优化抑菌活性最强的酶解产物的制备工艺,并测定最优酶解条件下酶解产物的相对分子质量分布。结果表明,菲律宾蛤仔胃蛋白酶酶解产物的抑菌活性最强,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和副溶血弧菌均有一定的抑菌活性,其中对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑菌活性较高,对四联微球菌则未见明显的抑菌活性。胃蛋白酶的最优酶解工艺条件为:酶解时间2h,温度35℃,pH2.0,加酶量3000U/g,料水比1∶4;该条件下酶解产物的相对分子质量主要分布在5000以下。
关键词：
菲律宾蛤仔 酶解产物 抑菌活性
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
生安志 鞠辉明 李贵阳 李杰 莫照兰
利用ｑＰＣＲ方法，检测ＨｓＰ９０α和ＨｓＰ９０βｍ ＲＮＡ在不同月龄牙鲆（ＰＡＲＡｌｉＣＨｔＨｙｓ ｏｌｉｖＡＣｅｕｓ）不同组织的表达水平，进一步检测在不同温度刺激、鳗弧菌感染后的表达变化。结果显示，ＨｓＰ９０α和ＨｓＰ９０β在不同发育期的１３种组织（肝脏、脾脏、头肾、后肾、心、肌肉、背皮、胃、肠、鳃、腹鳍、脑和血液）中均有表达。ＨｓＰ９０β表达水平整体高于ＨｓＰ９０α；８月龄牙鲆在肝、鳃、背皮、背肌、腹鳍的ＨｓＰ９０α表达量要显著高于其他发育期（１月龄、１２月龄、２４月龄）同组织的表达量（Ｐ＜０．０５），而ＨｓＰ９０β在不同月龄牙鲆的表达量也存在差异，在肝和肠的表达量较高，在鳃、背肌和腹鳍的．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
于洁 王登杰 雷仲仁 王海鸿
【目的】鉴定烟粉虱（Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａＢａｃｉ）体内的溶菌酶基因，并对其序列特征、进化关系和表达模式进行分析，探索该基因在烟粉虱应对球孢白僵菌侵染过程中的作用，为进一步解析烟粉虱先天免疫过程提供理论依据。【方法】以第２代高通量测序的结果为依据，比对非冗余核苷酸数据库，筛选ｅ值
[期刊] 水产学报
[作者]
张继红 方建光 金显仕 梁翻鹏
在实验室内采用静水法,测定了在3、5和8℃下,菲律宾蛤仔的耗氧率和排氨率与体重的关系及其能量收支情况。实验数据显示,在实验的温度范围内,菲律宾蛤仔的耗氧率和排氨率都与体重负相关;温度对耗氧率的影响与体重有关。摄食率、生长率(净生长率、毛生长率)与温度正相关。温度对能量分配影响较大,代谢分配率、排粪分配率随温度的升高而降低,且变化极其显著(P<0.01);生长分配率随温度的升高而增大。在能量收支方程中,排粪能所占比例较大,在41.131%～60.69%之间,代谢能在23.37%～32.73%之间,生长能在6.13%～34.63%之间,排泄能所占的比例最小,低于3%。
关键词：
菲律宾蛤仔 耗氧率 排氨率 能量收支
[期刊] 中国水产科学
[作者]
范玉顶 陈妍婕 钟其旺 齐洁 张全启
本研究采用mRNA差异显示技术(mRNA differentid display,DD-PCR)分离得到20个鳗弧菌(Vibrio anguillarum)诱导前后差异表达的牙鲆(Paralichthys olivaceus)cDNA片段。通过对差异片段进行回收、再扩增、克隆、测序、序列比对以及验证分析后,得到9个阳性片段,其中2个片段与已知基因高度同源,一个与牙鲆C3补体高度同源,同源性98%,另一个与牙鲆TEGT(睾丸增强基因转录子)基因高度同源,同源性98%;其余7个为新的cDNA片段。基因表达分析表明,这9个差异片段均在处理组、对照组的不同器官和时间段差异表达,而且多数片段经鳗弧菌诱导...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
姚佳俊 李忠 梁宏伟 罗相忠 王丹 邹桂伟
为了解c型溶菌酶基因与长丰鲫(Chang Feng Carassius auratus)的抗菌效应关系,本研究利用同源克隆方法获得长丰鲫c型溶菌酶基因cDNA全长序列。结果显示:c型溶菌酶基因全长698 bp,包括5'端非翻译区60 bp,3'端非翻译区200 bp,开放阅读框438 bp,编码145个氨基酸。长丰鲫c型溶菌酶基因在肾脏组织中表达量最大,在脾脏、肠道、心脏和脑中大量表达,在肝脏和鳃中表达量相对较低,在皮肤和肌肉中几乎不表达。长丰鲫在感染迟钝爱德华氏菌、嗜水气单胞菌和金黄色葡萄球菌后,在肝脏
[期刊] 水产学报
[作者]
赵丹 周丽青 吴彪 孙秀俊 赵峰 杨爱国 刘志鸿 赵庆 张高伟 陈夕
为了有效防治细菌及其他病原微生物对魁蚶等贝类的危害,本实验研究了魁蚶各组织中溶菌酶活性对鳗弧菌侵染的响应过程,以期探讨魁蚶体内溶菌酶的免疫功能。本实验采用注射活菌的方法侵染20月龄魁蚶个体,随机选取16只个体,在每只个体的斧足处注射1 mL(约1×10~9个)鳗弧菌菌悬液作为感染组;随机选取16只个体不注射鳗弧菌作为对照组。两组魁蚶分别于洁净海水中暂养4、12、24和48 h后,每组随机取4只魁蚶个体的血液、外套膜、鳃、斧足、肝胰腺和闭壳肌等组织,采用ELISA试剂盒测定其溶菌酶含量变化。结果显示,对于鳗弧菌的侵入,魁蚶血液中溶菌酶含量由正常低值迅速增高并一直维持较高的含量,说明血液是魁蚶机体防御病原菌的主要免疫组织之一;魁蚶外套膜在无感染的情况下,对外界水环境的干扰始终保持较高的溶菌酶含量;鳃、斧足的溶菌酶含量均在注射细菌24 h之后明显高于正常值,说明外套膜、鳃、斧足作为魁蚶机体与外界接触的第一道屏障也能应对病原菌入侵,但反应较血液延迟;肝胰腺和闭壳肌的溶菌酶含量变化不明显,推测肝胰腺和闭壳肌不是魁蚶的重要免疫组织或器官。本实验结果可为魁蚶抗病选育及免疫机理方面的研究提供相关的参数。
关键词：
魁蚶 溶菌酶 鳗弧菌侵染
[期刊] 中国水产科学
[作者]
董波 李军 王海燕 薛钦昭
在静水系统中测定了实验条件下菲律宾蛤仔(Ruditapesphilippinarum)的摄食率、吸收率、耗氧率和排泄率等生理指标;研究了软体部干重、温度和饵料浓度对菲律宾蛤仔最小碳需求量(WMCR)和能量收支的影响;建立了不同温度及饵料浓度下菲律宾蛤仔的能量收支方程。结果表明:最小碳需求量随个体软体部干重的增加而增加,温度越高其增加速率越快;软体部干重对生长效率没有显著的影响。温度通过影响耗氧率而显著影响单位软体部干重的最小碳需求量。在9～22℃范围内,菲律宾蛤仔的生长余力(SFG)随温度和饵料浓度的升高而增加,在较低温度和饵料浓度下蛤仔的SFG均出现负值。在能量收支方程中摄食能随温度变化显著...
关键词：
菲律宾蛤仔 温度 饵料浓度 能量收支
[期刊] 水产学报
[作者]
钟国防 钱曦 华雪铭 周洪琪
以初重为(41.26±1.09)g的暗纹东方鲀为实验鱼,配制5种玉米蛋白粉使用量为0%、5%、10%、15%、20%的实验饲料,玉米蛋白粉对饲料中鱼粉的替代水平分别为0%、7.4%、14.8%、22.2%和29.6%。用实验饲料饲养暗纹东方鲀60d,研究玉米蛋白粉替代鱼粉对暗纹东方鲀肝胰脏、头肾和脾脏组织的溶菌酶活性及其c-型溶菌酶mRNA相对表达量的影响。结果表明,(1)暗纹东方鲀肝胰脏、头肾和脾脏的溶菌酶比活力分别为9.14、42.12和40.49U/mgprot,头肾和脾脏组织中c-型溶菌酶mRNA相对表达量分别是肝胰脏的3.76和3.24倍。(2)玉米蛋白粉替代鱼粉显著影响暗纹东方鲀溶...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
朱忠珂 王建华 汪儆 张春雷 蔡青和
为了探讨重组犬溶菌酶的活性及临床应用前景,人工合成犬溶菌酶基因,构建其原核重组表达载体pPROHTa-rcLYZ,进行原核表达并对表达产物进行活性分析。结果表明,合成的犬溶菌酶基因全长396 bp,编码132 aa;构建的表达载体pPROHTa-rcLYZ含有犬溶菌基因完整的ORF;重组犬溶菌酶的相对分子质量为16 ku;重组犬溶菌酶约占全菌总蛋白32％,纯化后占全菌可溶性蛋白的95％;重组犬溶菌酶最适pH值为6．2,最适温度为38℃,对溶壁微球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌有较强的溶菌活力,对铜绿假单胞菌、链球菌、枯草杆菌等有一定的抑制作用,对白色念珠菌无抑制作用,对人工感染的犬大肠...
关键词：
犬溶菌酶基因 犬溶菌酶 原核表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
张元臣 苏圣盈 张家祺 薛爽 王景顺
克隆东方黏虫C型溶菌酶基因MseLYS,构建MseLYS基因的原核表达载体，检测该基因在东方黏虫不同龄期和组织的表达情况，旨在为探究MseLYS基因的功能和结构提供理论参考，也为进一步研究该基因的抗菌功能和生理机制奠定基础。以东方黏虫为研究对象，通过反转录PCR(RT-PCR)和末端快速扩增技术(RACE),获得了溶菌酶基因MseLYS的全长核苷酸序列，之后将去掉信号肽的开放阅读框架(ORF)序列连接到表达载体pET-30a(+)上，并用IPTG进行了诱导表达，最后用荧光定量PCR明确了该基因的时空表达模式。序列分析表明，此基因全长729 bp, ORF全长426 bp, 5′和3′非编码区分别为75,228 bp,共编码141个氨基酸残基，其蛋白质的等电点和分子质量分别为7.72,16.13 ku。系统进化树分析结果表明，MseLYS与其他物种的C型溶菌酶聚集在一起，且与其他昆虫的氨基酸序列具有高度一致性，表明MseLYS为C型溶菌酶。SDS-PAGE电泳结果表明，MseLYS在表达菌BL21(DE3)内表达的蛋白质分子质量与预期大小一致，约20 ku,说明MseLYS在大肠杆菌中能够高效表达。龄期表达谱分析表明，MseLYS基因在东方黏虫幼虫、雄虫和雌虫不同发育阶段表达量显著不同，在末龄幼虫、蛹中表达量较高，其他发育时期表达水平较低。组织表达分析结果表明，MseLYS基因在雄虫不同组织表达量存在着显著差异，其中脂肪体和胸内表达量较高；在雌虫不同组织表达量也存在显著差异，其中触角、翅和体壁中表达量较高。综上，成功克隆了东方黏虫C型溶菌酶MseLYS基因的全长序列，构建了该基因的原核表达载体并能够高效表达蛋白质，明确了该基因在不同组织和不同龄期的表达模式。
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