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[期刊] 水产学报
[作者]
张美超 曹雅男 姚斌 白东清 周志刚
将N-乙酰高丝氨酸内酯酶基因(aiiO-AIO6)插入表达载体pET28a构建了原核表达载体pET28a/aiiO-AIO6。转化大肠杆菌后筛选具有活性的重组子并对纯化的目的蛋白AiiO-AIO6的酶学性质进行了研究,同时研究了纯化的酶液对嗜水气单胞菌ATCC7966溶血素(Hemolysin,Hem)、细胞肠毒素(Cytotonic enterotoxin,Ast)、胞外蛋白酶(Extracellular protease,Ep)、丝氨酸蛋白酶(Serine protease,Sp)及磷脂酶Pho(Phospholipase A1,Pho)等5个毒力因子表达的影响。结果表明,pET28a/a...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
马向东 陆承平 陈怀青 凌红丽
用含不同浓度铁离子的培养基培养嗜水气单胞菌Ｊ－１株，３６ｈ时检测细菌含量以及毒素、蛋白酶、载铁体的表达量。发现菌液的浓度随着Ｆｅ２＋浓度的升高而升高，而毒力因子的表达量则相反，当Ｆｅ２＋的加入浓度为０时，毒素、蛋白酶、载铁体的表达量达最大值。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳及免疫转印分析细菌的外膜蛋白（ＯＭＰ），嗜水气单胞菌Ｊ－１株在表达载铁体的同时多表达一条ＯＭＰ，其相对分子质量为７１．７×１０３，应为载铁体的受体。此时，经ＥＬＩＳＡ检测细菌菌体及抽取物Ｓ蛋白为阴性；经超薄切片电镜观察，菌体无Ｓ层结构。随着铁离子浓度的降低，Ｊ－１株毒素、蛋白酶及载铁体的表达增多，菌体Ｓ蛋白消失，并产生相应的ＯＭＰ条带...
关键词：
嗜水气单胞菌 铁 毒素 蛋白酶 载铁体
[期刊] 水产学报
[作者]
何夙旭 王全民 黄路 周志刚
为探讨芽孢杆菌潜在的淬灭靶点，本研究通过芽孢杆菌Ｒ１与嗜水气单胞菌ＮＪ－１共培养，并对ＮＪ－１生物量、信号分子产生量、毒力因子基因和群体感应（ＱＳ）关键调控基因表达量进行检测。结果显示：１ＮＪ－１单独培养时，信号分子ＢＨＬ和ＨＨＬ的产量与ＮＪ－１生长趋势一致，在２７ Ｈ时达到峰值并启动Ｌｕｘ Ｒ表达，进而调控毒力因子金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、肠毒素、气溶素和血溶素等表达，其在２７～３０ Ｈ时呈现峰值表达，通路ＱＳｅ Ｂ在２７～３０ Ｈ启动表达，４８ Ｈ时达到峰值，而种间调控Ｌｕｘ Ｓ基因表达一直处于低水平状态；２与芽孢杆菌Ｒ１共培养时，仅痕量ＡＨＬＳ信号分子被检出，毒力因子相关基因表达量均显著．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
龚霞 陆承平 姚火春
通过水生动物源性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)强毒株J-1株与弱毒株MR-1株抑制差减杂交得到gneJ差减片段,该片段与创伤弧菌(Vibrio vulnificus)和人源嗜水气单胞菌的UDP-乙酰葡萄糖胺-4差向异构酶基因有较高的同源性。扩增完整的gneJ基因,进行分布检测并将其克隆至质粒pET32a(+),在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中进行异源表达,SDS-PAGE结果显示,重组表达蛋白的分子量约59.7kD,与理论推测值基本相同。酶活性分析表明,该重组蛋白可将UDP-乙酰葡萄糖胺转化为UDP-乙酰半乳糖胺,确证gneJ基因编码蛋白...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
陈江凤 王广军 郁二蒙
为探讨碳酸氢钠对嗜水气单胞菌毒力基因表达的影响,利用荧光定量PCR技术,以未添加碳酸氢钠的嗜水气单胞菌为对照组,添加0.024、0.048、0.072、0.096和0.120 mol/L碳酸氢钠的嗜水气单胞菌为实验组,对嗜水气单胞菌的3个主要毒力基因——溶血素基因(AHH-1)、气溶素基因(Aer A)和弹性蛋白酶基因(ahyB)进行相对表达分析。结果表明,5个实验组嗜水气单胞菌的AHH-1、AerA和ahyB表达量均显著低于对照组。且随着碳酸氢钠浓度的增加,基因表达呈逐渐下调趋势。人工感染结果表明,添加
[期刊] 中国水产科学
[作者]
朱璐丹 陈凯 习丙文 谢骏
为探讨中草药单体秦皮素对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)生长和毒力的影响,实验测定了秦皮素对嗜水气单胞菌最低抑菌浓度(MIC)、生长曲线、生物膜以及脂肪酶活性、运动性、蛋白酶活性和溶血性等毒力相关因子的影响。结果表明,秦皮素对嗜水气单胞菌具有明显的抑制效果, MIC为128μg/mL;秦皮素浓度大于16μg/mL时,对嗜水气单胞菌的生物膜形成有显著促进作用(P 0.05),但能降低嗜水气单胞菌蛋白酶活性(P<0.05)。秦皮素对嗜水气单胞菌有一定的抑菌作用,但期望通过低浓度秦皮素实现对嗜水气单胞菌的防治仍有待进一步研究。
关键词：
秦皮素 嗜水气单胞菌 抑菌作用 毒力
[期刊] 水产学报
[作者]
汪瑶 董雨豪 刘锦 王楠楠 陆承平 刘永杰
为研究嗜水气单胞菌中国流行菌株NJ-35的AraC家族转录调控因子AetY(U876_01475)的功能,本实验采用同源重组技术构建了该基因的缺失株ΔaetY及互补株CΔaetY,并对野生株、缺失株及互补株生物被膜形成能力、自凝集活性、对恩诺沙星的耐药性和对斑马鱼的致病力进行检测。结果显示,与野生株相比,ΔaetY生物被膜形成能力、自凝集活性、对恩诺沙星的最小抑菌浓度(MIC)均显著降低,对斑马鱼致病力明显降低,半数致死量(LD_(50))增加400余倍。CΔaetY各项指标均恢复至野生株水平。本研究首次针对嗜水气单胞菌AraC家族成员进行了基因功能分析,为进一步探究该菌的致病机理提供参考。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘雨果 潘厚军 陈偿 石存斌 吴淑勤
应用荧光定量PCR技术,研究了嗜水气单胞菌疫苗浸泡免疫后,鳜(Siniperca chuatsi)鳃、皮肤、脾脏和头肾中IgM基因表达量变化,同时应用ELISA检测皮肤黏液和血清中抗体滴度变化。结果显示:最早检测到IgMmRNA转录水平上调的是皮肤和鳃(第4天),而脾脏和头肾在第7天才达到高峰。IgM基因在头肾和脾脏中表达量较高(高峰值分别达到16.3和23.8),皮肤和鳃中的表达量较小(高峰值分别为4.3和8.6)。抗体效价方面,皮肤黏液中抗体滴度峰值出现时间较早(第7天),但抗体从开始形成到消失持续时间较短(28 d);血清中抗体滴度峰值出现时间较迟(第21天),但持续较长(42 d)。结...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
牛志伟 吕小丽 黄钧 韩书煜 黎姗梅 梁静真 韦慕兰 邓小红
通过借鉴Meta分析法分析中国知网数据库(CNKI)中有关鱼源、鳖源嗜水气单胞菌的7种毒力基因的相关研究数据,探讨鱼源、鳖源嗜水气单胞菌毒力基因的分布特点及为研制嗜水气单胞菌多价DNA疫苗提供候选基因。分析结果表明:嗜水气单胞菌毒力基因的分布受养殖对象的种类和生长环境影响;南方和北方地区鱼源嗜水气单胞菌以毒力基因astA、altA、aerA和hlyA分布较为广泛,南方地区鳖源嗜水气单胞菌毒力基因hlyA、actA和aerA分布均较为广泛,可分别作为制备鱼源和鳖源嗜水气单胞菌多价DNA疫苗候选基因。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘佳佳 吴志新 石焱 姚卓凤 李景 彭小云 陈孝煊
在饲料中添加0.2%甘露寡糖(Mannan oligosaccharide,(MOS)),饲养草鱼(Ctenopharyngodon idellus)28 d后,草鱼经腹腔注射3.2×106cell/mL的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)0.1 mL,在注射嗜水气单胞菌48 h、72 h和96 h后,分别取草鱼头肾、脾脏和肝脏,利用荧光定量PCR分析甘露寡糖对草鱼感染嗜水气单胞菌后各组织中IL-1β和IL-10的表达影响。结果显示,在草鱼头肾中,MOS/I(0.2%甘露寡糖+注射Ah)组IL-1β的表达在注射嗜水气单胞菌后48 h和72 h显著高于CON/I(基础...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘杰 黄艳华 黄钧 胡大胜 梁静真 彭亚 龙苏 牛志伟 韩书煜 植淇业
为探明黄沙鳖(Truogx sinensis)源嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)所携带毒力基因种类对其致病力的影响,以从广西各地患病黄沙鳖中分离得到的嗜水气单胞菌为材料,通过对黄沙鳖和小鼠进行人工感染测定试验菌株的致病力,PCR检测供试菌株的hly、Aer、Alt、Act、ahal和ahp 6种毒力基因。结果表明,47株黄沙鳖源嗜水气单胞菌共包含9种毒力基因型,48.94%的菌株携带全部6种毒力基因,基因型为hly+Aer+Alt+Act+ahal+ahp+,是主要的毒力基因型;95.79%的菌株携带hly基因,均为有毒株;嗜水气单胞菌对黄沙鳖的致病力是多个毒力基因共同...
关键词：
黄沙鳖 嗜水气单胞菌 毒力基因 致病力
[期刊] 水产学报
[作者]
姜洲 薛亚果 张猛 朱雷 王磊 李学军 董传举
为解析鲤Slc15a2在嗜水气单胞菌侵染过程中对免疫应答机制的影响，本实验通过制备鼠源Slc15a2-1和Slc15a2-2多克隆抗体后，采用酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）检测嗜水气单胞菌感染后鲤血清中Slc15a2-1和Slc15a2-2蛋白表达变化发现，①感染后2个拷贝的最高蛋白表达水平与正常组相比，分别增加了4.81和2.48倍；且Slc15a2-2的表达量与Slc15a2-1相比从0 ～ 48 h一直处于较高表达水平。②从整体方面来看，在Slc15a2的2个拷贝之间具有相似的表达趋势，均为先升高后降低再升高再降低；但Slc15a2-1在3 h达到第1个表达高峰，而Slc15a2-2则在6 h达到第1个表达高峰。3、6 ～ 24h的4个时期中，Slc15a2-1和Slc15a2-2蛋白表达呈现互补的表达趋势，即在同一时期一个拷贝的表达量显著下降，另一个拷贝的表达量显著升高，但总体维持较高表达水平。结果表明，本实验制备的鼠源Slc15a2-1和Slc15a2-2多克隆抗体具有较高的亲和力和特异性，当鲤受到嗜水气单胞菌侵染后，2个拷贝之间整体具有相似的表达趋势说明可能具有相似的基因功能；Slc15a2-1虽在3 h时率先做出低表达量响应，但与Slc15a2-1相比，Slc15a2-2在0 ～ 48 h之间具有显著的高表达量，可能是作为该基因拷贝中的主效基因，并且6 ～ 24 h时，2个拷贝就一直呈现互补的表达方式，共同表达量维持在高水平，面对病原侵害时能做有效响应。本研究可为深入了解鲤Slc15a2的免疫防御机制提供一定的研究基础。
关键词：
鲤 Slc15a2 抗体 嗜水气单胞菌
[期刊] 水产学报
[作者]
龚晖 林天龙 俞伏松 董传甫 陈日升 杨金先 陈振海
应用PCR技术,从1株鳗源嗜水气单胞菌ML316中扩增得到β 溶血素基因AHL316HEM,将AHL316HEM克隆到pGEM TEasyVector,经分析验证后重组到pcDNA3.0中,构建了重组质粒PDLH。转化重组质粒PDLH的大肠杆菌(Escherichiacoli)DH5α能在血琼脂培养皿中形成明显的β 溶血斑,重组菌纯化的胞外产物溶血价为1.28×104HU·mg-1,同时重组菌的胞外产物能被原始菌株的高免血清特异性地识别。结果证实,克隆到鳗源嗜水气单胞菌β 溶血素基因,重组质粒PDLH能够表达具有天然生物学活性的β 溶血素,为构建嗜水气单胞菌核酸疫苗奠定了基础。
关键词：
嗜水气单胞菌 β-溶血素基因 克隆 表达
[期刊] 水产学报
[作者]
姜洲 薛亚果 张猛 朱雷 王磊 李学军 董传举
为解析鲤Slc15a2在嗜水气单胞菌侵染过程中对免疫应答机制的影响，本实验通过制备鼠源Slc15a2-1和Slc15a2-2多克隆抗体后，采用酶联免疫吸附剂测定法（ELISA）检测嗜水气单胞菌感染后鲤血清中Slc15a2-1和Slc15a2-2蛋白表达变化发现，①感染后2个拷贝的最高蛋白表达水平与正常组相比，分别增加了4.81和2.48倍；且Slc15a2-2的表达量与Slc15a2-1相比从0 ～ 48 h一直处于较高表达水平。②从整体方面来看，在Slc15a2的2个拷贝之间具有相似的表达趋势，均为先升高后降低再升高再降低；但Slc15a2-1在3 h达到第1个表达高峰，而Slc15a2-2则在6 h达到第1个表达高峰。3、6 ～ 24h的4个时期中，Slc15a2-1和Slc15a2-2蛋白表达呈现互补的表达趋势，即在同一时期一个拷贝的表达量显著下降，另一个拷贝的表达量显著升高，但总体维持较高表达水平。结果表明，本实验制备的鼠源Slc15a2-1和Slc15a2-2多克隆抗体具有较高的亲和力和特异性，当鲤受到嗜水气单胞菌侵染后，2个拷贝之间整体具有相似的表达趋势说明可能具有相似的基因功能；Slc15a2-1虽在3 h时率先做出低表达量响应，但与Slc15a2-1相比，Slc15a2-2在0 ～ 48 h之间具有显著的高表达量，可能是作为该基因拷贝中的主效基因，并且6 ～ 24 h时，2个拷贝就一直呈现互补的表达方式，共同表达量维持在高水平，面对病原侵害时能做有效响应。本研究可为深入了解鲤Slc15a2的免疫防御机制提供一定的研究基础。
关键词：
鲤 Slc15a2 抗体 嗜水气单胞菌
[期刊] 西南农业学报
[作者]
邓小红 梁静真 黎姗梅 吕小丽 韦慕兰 韩书煜 蒙兰丽 黄钧 蒋经运
【目的】对广西全州县飞机坪鱼种场患病禾花鲤进行病原菌的分离鉴定,并对其致病性、耐药特性及6种毒力基因进行检测,为细菌引起的禾花鲤疾病及防控技术研究提供理论参考。【方法】从患病禾花鲤的肝脏、心脏和肾脏等部位取样分离细菌,人工感染确定菌株的致病性,API生化鉴定和16S rRNA分子鉴定相结合进行细菌鉴定,细菌的耐药特性试验为K-B纸片扩散法,毒力基因以PCR扩增法检测。【结果】从患病禾花鲤中分离到2株致病力很强的病原菌株TH1和TH3,对健康禾花鲤的致死率均为100.00%;经生化和分子鉴定,2株分离菌株均
关键词：
禾花鲤 嗜水气单胞菌 耐药性 毒力基因
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