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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 王秋影  廖美德  王刘庆  李俊彬  林志峰  陈志强  
【目的】对淡紫拟青霉PL-HN-16角蛋白酶的酶学特性进行初步研究。【方法】以鸡毛(黄色和黑色)、鹅毛、猪毛角蛋白为发酵底物,并作为培养基中的惟一氮源,观测发酵液的变化及培养液中的角蛋白酶活性,同时以鹅毛为发酵底物,对淡紫拟青霉角蛋白酶粗酶的最适作用温度和pH进行了初步研究。【结果】PL-HN-16对鸡毛、鹅毛、猪毛均能降解,PL-HN-16角蛋白粗酶最适作用温度为40℃、最适pH为8.0。【结论】在最佳作用温度与pH条件下,PL-HN-16角蛋白酶活性为41U/mL,PL-HN-16对不同发酵底物的降解活性不尽相同。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 舒伟学  马怡茗  李晓霞  张晋龙  柯欣  颜霞  颜华  贾良辉  
【目的】筛选具有高效角蛋白水解活性的微生物,为提高废弃羽毛中角蛋白资源的利用奠定基础。【方法】采用梯度稀释法,以羽毛作为惟一碳氮源对土样中的产角蛋白酶菌株进行筛选,筛选可高效降解羽毛的细菌。通过菌株的形态、生理生化特性以及16S rDNA序列分析,对菌株进行分类鉴定,并探讨其最适发酵条件。利用硫酸二乙酯(DES)和亚硝基胍(NTG)对目的菌株进行诱变,确定最适诱变条件,并进行原生质体融合,通过基因组改组选育角蛋白酶高产菌株。【结果】分离筛选到1株具有较强羽毛降解能力的菌株,该菌落圆形凸出,革兰氏染色呈阳性
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 许佳惠  尹雅洁  李欣悦  柳凯  梁运祥  赵述淼  胡远亮  
将Brevibacillus brevis US575角蛋白酶基因kerUS进行密码子优化,并在毕赤酵母GS115中表达,以提高角蛋白酶产量。结果表明:优化的基因可在毕赤酵母中成功表达,重组角蛋白酶的分子质量约30 ku,最佳反应条件为pH 9.5和60℃,1 mmol/L的Mn~(2+)、Ba~(2+)对角蛋白酶活性有促进作用。此外,重组角蛋白酶易降解干酪素和β角蛋白(羽毛粉),酶促反应最大速度v_(max)=0.019 g/(L·min),K_m=4.64 g/L,比活力=440 U/mg。研究获得的产角蛋白酶重组毕赤酵母具有较好的应用前景。
[期刊] 西南农业学报  [作者] 柯野  杨家臣  屈奇奇  袁小枚  黄镜如  
【目的】解析Streptomyces sp. DJ菌株编码的3种角蛋白酶的氨基酸序列、二级结构、三级结构及其功能的关系。【方法】基于DJ菌株全基因组测序结果,利用Bio-edit、DNAMAN、Discovery Studio2.5等软件、https://swissmodel.expasy.org/等网站对其3种角蛋白酶的序列和结构进行了分析和预测。【结果】DJ菌株胞外分泌3种角蛋白酶(K1、K2和K3)均属于S8家族的丝氨酸蛋白酶,信号肽、前导肽和成熟肽在氨基酸残基的组成、极性和长度等方面较一致。3种酶均能以5WSL.1.A为模板进行同源建模,每种酶的3-D结构中均含有6个α螺旋、2个3_(10 )α螺旋和15个β折叠的二级结构;其中K1酶含有2个二硫键,1Ca和2Ca位点,K2和K3各有1个二硫键,1Ca位点;3种酶的Pro270残基位于loop环,而仅有K2的Pro242残基位于loop环中。3种酶底物结合区域主要由疏水性残基构成,偏向于疏水性强的底物。3种酶的底物结合区域比较而言,S1和S2对底物特异性起关键作用;由于3种酶的S1和S2中重要位点残基的不保守性,使其底物特异性具有差异。【结论】DJ菌株中3种角蛋白酶在氨基酸、二硫键、脯氨酸和钙结合等的不同致使酶稳定性的不同;并且由于其表面电荷分布、底物结合区域的差异构成对羽毛水解位点的互补性,这可能是DJ菌株高效降解羽毛的重要原因。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 王艳娜  汪来发  朴春根  张哲峰  
研究了淡紫拟青霉的不同田间分离菌株单孢子后代的异核现象。结果表明,来源于福建、江苏、安徽的4个菌株(19,20,459,641)的单孢子培养后代,在PPDA+1%活性炭的培养基上进行配接试验,仅在19和459 2个菌株间能形成异核体,其频率为12.25%;在配接试验中,2个亲和菌落交界处长出致密的菌丝簇组成的实线,可推测为异核体。从来自菌丝簇线的每个单菌丝尖端培养物中分离出30个以上的单孢子,将其分别移接到PDA平板上,将来源于单孢子的菌落与2个亲本菌落进行比较,有3个菌丝尖端培养物(459-8×19-2,459-7×19-10,459-6×19-1)重现了两亲本类型或出现了新的菌落类型,异核...
[期刊] 西南农业学报  [作者] 朱友峰  岳寿松  宋爱荣  游银伟  尤升波  王翠萍  
利用硫酸铵分级沉淀和交联葡聚糖G-100凝胶柱纯化了高效降解羽毛的嗜麦芽窄食单胞菌YHYJ-1所产角蛋白酶,纯化的角蛋白酶,经SDS-PAGE蛋白电泳分析,分子量为48.3 kda。结果表明,该酶最适反应温度和最适pH值分别为50℃和9.0,30~40℃具有较好的温度稳定性,60℃酶活下降很快;在pH 7.0~9.5的范围内具有较好的稳定性。金属离子Ni2+、Zn2+对角蛋白酶具有明显抑制作用,Cu2+、Fe2+、Fe3+能完全抑制酶活;1%巯基乙醇对酶具有明显激活作用。EDTA和PMSF对该角蛋白酶几乎完全抑制,可判定该酶是丝氨酸金属蛋白酶,是一种新的蛋白酶。
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 肖炎农  王明祖  王道本  潘志学  
采用摇瓶试验,研究了淡紫拟青霉几丁质酶的形成条件。在马铃薯煎汁、玉米粉、黄豆粉3种天然基质中,以马铃薯煎汁的产酶效果最好。蔗糖、果糖、山梨糖和可溶性淀粉等碳源的添加能增加酶的产量。在氮源方面,酵母膏、蛋白胨、尿素、精氨酸等能促进酶的形成。几丁质酶可为外源几丁质所诱导,当培养液中含有0.2%的粉状几丁质时,酶的产量显著上升。淡紫拟青霉形成几丁质酶的适宜培养基初始pH为6.0~6.5,培养时间以6~8d为佳。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 夏汉祥  廖美德  周靖  徐汉虹  
【目的】研究淡紫拟青霉PL-HN-16对植物生长的促进作用,以期能发现一种新的类植物生长素。【方法】以菜心种子为试验材料,用乙醚萃取PL-HN-16发酵液,对发酵液和萃取液分别进行生物活性测定;同时用硫酸铵分级沉淀发酵液中的蛋白,SDS-PAGE法分析有活性的蛋白组分。【结果】淡紫拟青霉发酵液32倍稀释处理对菜心种子生长有显著促进作用;经乙醚萃取后的发酵液依然有活性,乙醚萃取液则对菜心种子生长有显著抑制作用;45%和60%硫酸铵饱和度沉淀的蛋白对菜心种子的生长具有明显的促进作用。经SDS-PAGE分析,目的蛋白分子质量在28~45 ku,推测对植物生长具有主要活性作用的蛋白分子质量约为36 k...
[期刊] 华北农学报  [作者] 杨婷  廖美德  贺玉广  刘偲嘉  
为明确淡紫拟青霉PL-HN-16促进植物生长的活性因子。采用SaLkowSki比色法、胚芽鞘法和高效液相色谱(HPLC)分析培养物中生长素(iaa);离子柱层析和生物活性跟踪法,明确其促植物生长活性因子。SaLkowSki比色、小麦胚芽鞘试验和HPLC试验结果表明:PL-HN-16不产生iaa;柱层析和活性跟踪结果表明,其促生长活性因子为分子量约14 k Da的蛋白,当蛋白浓度低于0.10μg/m L时,促生长作用呈明显剂量相关性,对菜心生长促进率达13.15%,高于0.10μg/m L抑制菜心生长。PL-HN-16促植物生长因子为分子量约14 k Da的蛋白,有关植物外源激素样功能蛋白研究鲜...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 于安澜  王力  陈子末  雷明滔  陶青燕  王岩  
本研究评价了利用羽毛粉作为大黄鱼(Larimichthyscrocea)饲料鱼粉替代蛋白源的潜力,并探讨了角蛋白酶(DP-100)和γ射线辐照对替代效果的影响。采用双因素实验设计,基础饲料BD鱼粉含量为35%,饲料I0E0利用水解羽毛粉替代BD中30%的鱼粉。在饲料I0E0中,添加1%DP-100 (饲料I0E1),或用γ射线辐照羽毛粉替代水解羽毛粉(饲料I1E0),或同时添加1%DP-100和用γ射线辐照羽毛粉替代水解羽毛粉(饲料I1E1)。在1 m×1 m×2 m的实验网箱中进行10周饲养实验。实验鱼初始体重为(19.7±0.2) g (x±SD, n=15),放养密度为每口网箱40尾鱼。实验结果表明,添加1%DP-100显著影响实验结束时鱼体重(FBW)、增重(WG)和摄食量(FI)(P0.05)。添加DP-100、用辐照羽毛粉替代水解羽毛粉以及二者交互作用对饲料系数(FCR)、饲料贮积效率(氮:NRE;磷:PRE;能量:ERE)、肥满度、肝体比(HSI)、脏体比(VSI)、全鱼组成、单位鱼产量鱼粉消耗量(RCP)以及养殖废物(氮和磷)排放量无显著影响(P>0.05)。添加DP-100的E1组(I0E1和I1E1)鱼的FI、FBW和WG高于未添加DP-100的E0组(I0E0和I1E0)(P<0.05)。摄食饲料BD的鱼的WG高于摄食饲料I0E0和I1E0的鱼(P0.05);摄食饲料I0E0、I1E0、I0E1和I1E1的鱼RCP低于摄食饲料BD的鱼(P0.05)。上述结果表明添加DP-100有利于改善大黄鱼对饲料中羽毛粉的利用,而γ射线辐照处理未明显改善水解羽毛粉作为鱼粉替代蛋白源的效果。在添加1%DP-100的前提下,通过添加8.5%的水解羽毛粉可将大黄鱼饲料鱼粉含量降低至24.5%。
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 龙良启  白东清  汤保贵  熊波  
以酪蛋白为底物测定了中华鳖胰脏、胃、肠等组织蛋白酶活性、最适pH和最适底物浓度。结果表明:胃、胰组织蛋白酶活性显著高于肠组织蛋白酶活性,且胃>胰>前肠>中肠>后肠;胃、胰和肠组织蛋白酶最适pH分别为2.2、6.2、7.6;胃、前肠组织蛋白酶最适底物浓度分别为1.2%、0.8%。
[期刊] 水产学报  [作者] 王海英  薛长湖  孙谧  王跃军  王清印  
以大菱鲆肠道为材料,对大菱鲆消化生理中起重要作用的肠蛋白酶的分离纯化条件和理化性质进行了研究。经Tris-HCl缓冲液抽提,硫酸铵分级分离,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析分离纯化,获得大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ的电泳纯制品,并对该酶的性质进行了研究。结果显示:纯酶的分子量约为58kD。纯酶最适反应pH为9.0,最适反应温度50℃;pH稳定范围6.0~11.0,30℃以下酶活性稳定;Mn2+可激活大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ,Cu2+、Zn2+、Ag+、Fe3+则对酶活性有抑制作用;巯基蛋白酶抑制剂显著抑制大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ的活性,金属蛋白酶抑制剂...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 林曙  李碧波  
为了提供毛霉在工业生产中的一些基本参考数据,在不同的培养时间段对毛霉产酸、中、碱性蛋白酶的酶活性进行了测定,研究了培养基含水量和“扣瓶”处理等培养因素对产酶活力的影响,并对所产蛋白酶的耐热性进行了研究.结果表明:毛霉所产蛋白酶以碱性蛋白酶为主,在 28 ℃培养 96 h 产酶活力最高,培养基含水量以 54.7%合适,多次“扣瓶”对所产酶活有负面影响,蛋白酶在温度高于 60 ℃时容易失活.
[期刊] 沈阳农业大学学报  [作者] 李冰峰  权静  顾浩  王益明  
为探讨均四甲苯的微生物处理方法,研究了本实验室筛选的蛋白酶生产菌J6对均四甲苯的降解特性。将J6接入装有50mL发酵液的250mL摇瓶中,发酵液中均四甲苯含量为50g.L-1。将摇瓶置于30℃,180r.min-1的摇床中培养,分析均四甲苯对微生物生长进程的影响,以及微生物生长过程中均四甲苯的含量变化。结果表明:该菌在含有均四甲苯的培养基中能稳定生长,且比不含均四甲苯的培养基具有更长时间的稳定生长期(在实验室条件下长达200h);对发酵液的分析表明,该菌在发酵11h后,发酵液中均四甲苯的含量迅速降至0.746g.L-1,24h内降解率达91.6%。可见,J6菌能有效降解均四甲苯,有望将该菌用于...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 刘庆慧  黄倢  宋晓玲  刘莉  
从感染白斑综合症病毒(Whitespotsyndromevirus,WSSV)的对虾中提取和纯化WSSV,对其蛋白酶活力进行分析。结果表明,WSSV蛋白酶具广泛的pH稳定性,当pH达7.5时,蛋白酶活性最大;pH高于10 0时,酶活力很低,其蛋白酶偏碱性。丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF)对酶活性有抑制作用。Ca2+、Mn2+、Fe2+和Cu2+可降低WSSV蛋白酶活性,但Mg2+有轻微的激活作用。胰蛋白酶抑制剂在浓度为12.5~25.0mg/L时,对WSSV蛋白酶活性无影响。Leupeptin使蛋白酶活性降低12.29%。Chymostatin在质量浓度为12.5~25.0mg/L时...
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