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[期刊] 水产学报
[作者]
路珍 绳秀珍 唐小千 邢婧 战文斌
为探明鱼类黏膜相关淋巴组织中黏液细胞对疫苗免疫的应答特性，本研究利用组织学和组织化学技术，研究了浸泡免疫灭活迟钝爱德华氏菌前后牙鲆皮肤、鳃、前肠、中肠和后肠中黏液细胞数量和特性的时序变化。苏木精－曙红（ＨＥ）、阿尔新蓝－过碘酸雪夫氏（ＡＢ－ＰＡＳ）染色结果显示，免疫前皮肤主要分布含中性黏多糖的Ⅰ型黏液细胞以及含中性黏多糖和少量酸性黏多糖的Ⅲ型黏液细胞，鳃中可观察到Ⅰ、Ⅲ型以及含酸性黏多糖和少量中性黏多糖的Ⅳ型黏液细胞，前肠中主要分布Ⅰ型黏液细胞，中肠、后肠上皮中可观察到Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型和含酸性黏多糖的Ⅱ型黏液细胞。免疫后，牙鲆黏膜免疫相关淋巴组织中黏液细胞总量随时间呈现先增多后减少趋势，后肠在第５．．．
关键词：
牙鲆 黏液细胞 组织学 组织化学
[期刊] 中国水产科学
[作者]
罗霞 潘厚军 巩华 刘瑞明 石存斌 吴淑勤
应用间接ELISA方法,研究经嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)疫苗浸泡免疫后鳜(Siniperca chuatsi)皮肤黏液中抗体消长规律,以揭示鳜局部黏膜免疫在免疫保护中的作用及浸泡免疫的保护效果。结果表明,鳜皮肤黏液中抗体滴度在免疫后第7天达到峰值211,抗体从开始形成到消失持续21 d;添加佐剂(IMS1312、葡聚糖、莨菪碱、食盐)可以提高鳜皮肤黏液及血清中抗体滴度和相对免疫保护率,其中添加IMS1312组免疫保护率最高,达77.8%,免疫保护与抗体滴度成正相关(R2=0.79,P<0.05);以溶菌酶为代表的非特异性免疫在免疫后1周内即抗体未形成时,对鱼体起主...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
宋晓青 邢婧 战文斌
制备鳗弧菌(Vibrio anguillarum)全菌灭活疫苗,采用腹腔注射和浸泡两种方式分别免疫牙鲆(Paralichthys olivaceus),于免疫后0 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h、7 d、14 d分别取牙鲆脾、头肾、鳃3种组织,提取mRNA,应用实时荧光定量PCR法检测3种组织中白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)α、主要组织相容性复合体(MHC)MCHⅠ、MHCⅡ、T细胞表面受体CD4、T细胞表面受体CD8、免疫球蛋白(Ig)M 7种免疫相关基因的表达。结果显示,两种方式免疫后各基因表达量均出现显著上调。注射组3种组织中,IL-1...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
段丽华 冯建军 郭松林 陈义航 阮彩章
构建迟钝爱德华氏菌外膜蛋白重组表达载体后，表达纯化获得分子质量约５３ｋｕ的外膜蛋白。将１００尾日本鳗鲡均分为２组，分别腹腔注射牛血清白蛋白（ＢＳＡ，０．５ｍｇ／ｍＬ）和迟钝爱德华氏菌外膜蛋白（Ｏｍｐ，０．５ｍｇ／ｍＬ）０．２ｍＬ／尾。于免疫后第７、１４和２８天采集鳗鲡血液、粘液、肝脏和肾脏，测定各时间点的补体活性、溶菌酶活性、全血细胞转化水平和血清抗体效价。结果发现，外膜蛋白组鳗鲡的补体活性于免疫后第７天极显著高于对照组；其抗体效价于第１４天和第２８天显著或极显著高于对照组。免疫后第２８天以迟钝爱德华氏菌、嗜水气单胞菌和创伤弧菌（１．０×１０７ ｃｆｕ）腹腔注射感染鳗鲡。结果发现，外膜蛋白组鳗．．．
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
高冬梅 李健 王群
制备鳗弧菌福尔马林灭活的全细胞疫苗 ,腹腔注射接种牙鲆 ,50d后进行第 2次免疫。利用自制的兔抗鱼血清的抗血清通过ELISA实验检测了受免鱼特异性免疫应答水平 ,并通过攻毒实验 ,测定了疫苗对牙鲆的免疫保护率。结果表明 ,各免疫组血清抗体效价的最高值分别达 1∶51 2、1∶2 0 4 8、1∶1 0 2 4 ;各组受免鱼对人工攻毒均具有保护作用。用鳗弧菌攻毒后 ,免疫保护率分别达81 2 5%、87 50 %、93 75% ,而且发现受免鱼对副溶血弧菌 (Vibrioparahaemolyticus)也表现了一定的交叉保护性 ,免疫保护率分别为 46.1 5%、53.85 %、53.85...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
秦蕾 王印庚 张晓君
采用光学显微镜和电子显微镜技术分别对患迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)病的大菱鲆(Scophthalmus maximus)的病理学变化进行了研究。结果发现,迟钝爱德华氏菌可引起大菱鲆肾脏、脾脏、肝脏、心脏、肠和鳃等多个器官组织发生不同程度的病变,其中以肾脏病理变化最为显著,主要表现为造血组织局部坏死、单核巨噬细胞显著增生和肉芽肿形成。肝脏发生脂肪变性,血窦扩张充满单核巨噬细胞,严重者发生局部坏死;脾脏单核巨噬细胞增生显著,脾实质出现多处局部坏死;心肌纤维变性,肌纤维间有单核巨噬细胞浸润,病变严重者形成局部坏死灶。此外,在病鱼的肠和鳃内也发现大量单核巨噬细胞浸润的现象。研...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘云 姜国良 张士璀 姜明 连建华
对牙鲆 (Paralichthysolivaceus )头肾印迹片、光镜片和电镜片的观察发现 ,其头肾主要集中于肾脏前部 2个分叉部分。组织学研究证明 ,头肾是由基质组织网络着不同发育阶段的血细胞构成 ,具无肾小球等分泌结构。进一步超微观察表明 ,基质是由网状细胞和成纤维细胞等组成 ,各种免疫细胞由淋巴细胞、单核细胞、颗粒细胞 (Ⅰ型和Ⅱ型 )以及巨噬细胞等组成。头肾中免疫细胞丰富 ,其中淋巴细胞占 36 .6 % ,单核细胞占 31.0 % ,颗粒细胞占 19.7%。说明牙鲆的头肾免疫细胞种类比较丰富 ,是免疫细胞的主要生发中心 ,在鱼体免疫防御系统中占有相当重要的地位。同时对特殊颗粒细胞的...
关键词：
牙鲆 头肾 免疫细胞
[期刊] 中国水产科学
[作者]
孙何军 陈松林 郑卫卫 马佳璐 王文文 田永胜 邓寒 陈红林 高进
牙鲆(Paralichthys olivaceus)养殖病害日益严重,迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)是牙鲆养殖中的主要致病菌,带来了极大的经济损失,为了培育出对该病抵抗能力强的牙鲆新品种,2014年4–6月间,利用我们长期以来建立和筛选出来的牙鲆抗病群体和家系的亲鱼,通过杂交,自交,雌核发育建立47个家系,9–10月间,对其中39个家系进行感染实验,先用少量鱼进行预实验摸索出半致死浓度,然后再进行正式感染实验,感染数量为每个家系80尾。各家系的存活率范围为1.19%~51.19%,最终平均存活率为20.29%,认为存活率高于30%的7个家系为抗病力强家系,存活率在20....
关键词：
牙鲆 迟缓爱德华氏菌 抗病性 家系筛选
[期刊] 水产学报
[作者]
时云朵 任燕 张德锋 付小哲 林强 李宁求 石存斌 吴淑勤
为研究山莨菪碱作为佐剂在细菌灭活疫苗浸泡免疫中的作用,将山莨菪碱和嗜水气单胞菌全菌灭活疫苗联合浸泡免疫异育银鲫,首次浸泡免疫7 d后加强免疫1次。通过实时荧光定量PCR检测第2、4、7、11、14和21天脾脏中Ig M、IL-1β、C3、C-凝集素以及溶菌酶的mRNA表达量,并在第21天进行同源菌株活菌攻击实验。结果显示,山莨菪碱组第4天Ig M和IL-1β的表达量达到最高值,分别为28.3和332.7;而无佐剂疫苗组第11天Ig M和IL-1β达到最高值,分别为56.1和791.8。山莨菪碱组的补体C3、C-凝集素以及溶菌酶的表达量都显著高于无佐剂组和对照组,且表达持续时间长。活菌攻击实验表...
[期刊] 水产学报
[作者]
许国晶 绳秀珍 唐小千 邢婧 战文斌
采用饱和硫酸铵分步盐析结合Sephacryl S-300凝胶过滤层析及DEAE Sepharose离子层析法,对牙鲆皮肤黏液中的免疫球蛋白(Ig)进行了分离纯化,并通过SDS-PAGE及Western-blotting技术对纯化蛋白的部分特性进行了分析。结果表明,30%、50%饱和硫酸铵分步盐析可以去除牙鲆黏液中除Ig外的很多杂蛋白,得到粗提黏液Ig;再经Sephacryl S-300纯化,Ig纯度较高,其中含有72和26 ku的条带;DEAE Sepharose层析法可进一步纯化Sephacryl S-300柱层析的产物,所提取黏液Ig经SDS-PAGE检测,只含有72和26 ku两个条带,...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王燕 张晓华 吕俊超 徐子男 陈吉祥 韩茵
2006年9月山东胶南某养殖场大菱鲆(Scophthalmus maximus)发生病害,从患病大菱鲆脾脏分离出优势菌株WY28,人工感染试验证实WY28菌株对大菱鲆和斑马鱼(Danio rerio)有较强的致病性,其对大菱鲆和斑马鱼的半数致死剂量(LD50)分别为39cfu/g(BW)(3.3×102cfu/ind)和2.1×104cfu/g(BW)(6.4×103cfu/ind)。综合该菌在形态与生理生化特征及16SrDNA同源性等方面的实验结果,确定WY28菌株为迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)。该菌对先锋霉素V、庆大霉素、氟哌酸、痢特灵等抗生素敏感。WY28菌株经...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
曹丹丹 刘金相 王志刚 张全启 齐洁 王旭波 于海洋
本研究利用实验室已建牙鲆(Paralichthys olivaceus)转录组数据库预测得到牙鲆NOD2基因(PoNOD2),并利用PCR技术进行序列验证。同时,设计迟缓爱德华氏菌注射感染牙鲆成鱼和体外免疫刺激牙鲆鳃细胞系实验,探究PoNOD2基因在抗菌免疫反应中的作用。PoNOD2基因的开放阅读框长度为2964 bp,编码988个氨基酸。PoNOD2蛋白有3种保守结构域,包括C-末端LRR,中心NACHT和N-末端CARD结构域。实时荧光定量PCR结果显示,在所检测牙鲆组织中,迟缓爱德华氏菌的侵染能显著上调PoNOD2的表达。体外免疫刺激牙鲆鳃细胞系实验显示,在PGN、PolyⅠ:C和迟缓爱德华氏菌刺激下,PoNOD2表达上调。亚细胞定位显示,PoNOD2蛋白定位于牙鲆鳃细胞的细胞质中。在迟缓爱德华氏菌侵染牙鲆鳃细胞过程中,PoNOD2基因的过表达能够抑制细菌生长,并引起IL-1β、IL-6和IL-8等炎性细胞因子的表达上调。结果表明,PoNOD2在抑制迟缓爱德华氏菌生长以及调节牙鲆对病原菌的免疫应答中发挥重要作用。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
周丽 战文斌 宋微波 俞开康
对引起牙鲆体表溃烂的病原纤毛虫—指状拟舟虫诱导牙鲆免疫反应产生的免疫球蛋白IgM进行分析 ,结果表明 ,病原纤毛虫免疫注射牙鲆 ,可诱导牙鲆发生特异性免疫反应 ,产生抗体。牙鲆抗指状拟舟虫血清的凝集试验 ,发现纤毛虫停止游动并发生虫体聚集 ;抗血清经与标准分子量和鼠IgM单克隆抗体以及对照血清的SDS -PAGE电泳比较分析证明 ,牙鲆抗指状拟舟虫血清免疫球蛋白IgM重链分子量为 710 0 0 ,轻链分子量为 2 30 0 0 ;IgM为四聚体 ,分子量为 752 0 0 0。
关键词：
牙鲆 指状拟舟虫 纤毛虫 免疫球蛋白
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈昌福 李静 杨广 俞云聪
用酚灭活的柱状嗜纤维菌（Ｐ－ＣＣ）疫苗，菌体脂多糖（ＬＰＳ）以及将Ｐ－ＣＣ和ＬＰＳ混合后作为抗原，分别浸泡翘嘴鳜使免疫，并检测了受免鱼体的免疫保护力。结果表明，经３种疫苗浸泡接种后的鱼体血清中凝集抗体效价与对照组鱼没有显著差别（Ｐ＞０．０５）；而经活菌攻毒后的存活率，则是免疫组显著地高于对照组（Ｐ＜０．０５），以ＬＰＳ免疫组的免疫保护力（７１．９％）最强。
关键词：
浸泡接种,翘嘴鳜,细菌性烂鳃病
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王静凤 刘扬 赵芹 逄龙 薛长湖
采用链霉亲合素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)免疫细胞化学染色技术,利用兔抗哺乳动物生长抑素血清对牙鲆(Paralichthys olivaceus)消化道(包括食道、胃、幽门垂、肠道全长及肛门)、肝胰脏、肾脏、脾脏以及生殖腺等器官的生长抑素(SS)分泌细胞进行定位和鉴别。结果表明,生长抑素分泌细胞仅存在于胃和胰岛中,其他检测部位均未见分布。在胃中,生长抑素分泌细胞主要散在分布于胃黏膜上皮、胃小凹底部上皮和胃腺的颈部周围。在胃的不同部位,生长抑素分泌细胞的分布密度存有差异,以胃体部数量最多,贲门部次之,幽门部最少。参照消化道内分泌细胞与胃肠腔或腺腔有无直接联系,以及基部有无胞质突起的分类...
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