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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 张富新  张媛媛  党亚丽  于月英  
探讨了中性蛋白酶在海藻酸钠中的固定化技术,并对影响固定化酶的固定化率和固定化酶活性的 因素进行了研究。结果表明,固定化酶的质量受海藻酸钠浓度、固定化酶量、固定化时间以及CaCl2浓度的影响,其 最佳工艺条件为:海藻酸钠浓度3.0%,固定化酶液量与海藻酸钠体积比1:2,固定化时间2.5 h,CaCl2浓度 3.0%,由此制得的固定化酶的固定化率可达97.5%,固定化酶活性为3 600 U/g,其热稳定性、pH值稳定性均极显 著高于游离酶。
[期刊] 中国水产科学  [作者] 王海英  林洪  叶眉  薛长湖  
木瓜蛋白酶经戊二醛固定于自制的甲壳质上制成固定化木瓜蛋白酶 ,其水解甲壳胺的最佳条件是 :4 5℃ ,pH 4 .0的 1%的甲壳胺溶液 (醋酸缓冲液配置 ) ,酶 /底物比 1∶3.5 (质量比 )。震荡反应 2 4h后 ,用超滤器分离不同分子量的甲壳胺低聚糖产物 ,结果产物中分子量小于 10 0 0 0的甲壳胺低聚糖得率约为 4 5 .5 5 % ,分子量小于 5 0 0 0的约为 34 .0 % ,优于游离木瓜蛋白酶水解甲壳胺的效果。此固定化酶可反复使用至少 10次以上 ,总反应时间达 192h ,提高了酶的使用效率和酶解效果。
[期刊] 中国农业科学  [作者] 李宁  刘红芝  刘丽  王强  
【目的】为了充分利用花生榨油之后的副产物,提高产品附加值,建立花生短肽制备工艺,研发功能性花生短肽产品。【方法】通过比较酶种类、底物浓度、酶解温度、酶解时间对水解度与短肽得率的影响,采用二次回归正交旋转组合设计优化分步酶解制备花生短肽的最佳工艺。【结果】中性蛋白酶分步酶解花生分离蛋白制备短肽的最佳工艺参数为:Neutrase水解花生分离蛋白2.04 h后加入Protamex继续酶解1.96 h,Neutrase添加量为5 200 U·g-1底物,Protamex添加量为422.32 U·g-1底物,水解温度44.83℃,底物浓度8%,在此条件下,短肽得率为83.93%,水解度为38.25%,花...
[期刊] 海洋水产研究  [作者] 王海英  孙谧  王颖  
以壳聚糖为固定化载体,采用吸附交联法,以戊二醛为交联剂,对海洋低温碱性蛋白酶YS-80-122进行固定化。通过单因素和正交试验优化得到最佳固定化条件为pH7·0,戊二醛终浓度0·2%,吸附时间50min,酶载体比例40mg/g,交联时间16h,交联温度10℃,固定化酶酶活回收可达47·52%。固定化酶和游离酶的最适作用温度均为30℃,最适作用pH分别为9·0和10·0,相比游离酶,固定化酶可在更宽的温度和pH范围内发挥高活性,且其温度和pH稳定性得到显著提高。室温下经冷冻干燥的固定化酶贮存90d后活性基本保持不变,贮藏半衰期约为190d。以酪蛋白为底物,重复使用7次后酶活仍保留有79·2%,操...
[期刊] 海洋渔业  [作者] 胡昂  段蕊  刘志东  林娜  张俊杰  李磊  蒋玫  
采用响应面法优化中性蛋白酶酶解海湾扇贝(Argopecten irradias)副产物蛋白制备抗氧化酶解物工艺。以DPPH自由基清除率和还原能力为响应值,在底物浓度、温度、时间、酶与底物比4个单因素实验基础上,优化确定3个显著性因素。获得实验条件下最佳制备工艺为:底物浓度25 mg·mL~(-1)、温度50℃、时间3.8 h、酶与底物比1.5%。在此条件下,实验验证酶解海湾扇贝副产物蛋白制备抗氧化酶解物的DPPH清除率为81.93%(预测值为83.19%),还原能力为58.12%(预测值为58.92%),DPPH自由基清除率和还原能力的IC_(50)值分别为0.264 mg·mL~(-1)和3.136 mg·mL~(-1),且表现出较强的抗氧化活性。研究表明,优化后的回归模型用于预测中性蛋白酶酶解海湾扇贝副产物蛋白制备抗氧化酶解物是可行的。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 何平  黄家乐  史清翠  巫光宏  初志战  黄卓烈  
【目的】探寻疏水参数(logP)不同的有机溶剂对木瓜蛋白酶及其固定化酶活性的影响。【方法】制备固定化木瓜蛋白酶,在疏水参数不同(logP=-1.30,-1.10,-0.76,-0.33,-0.24,0.28,0.49,0.68,0.80,1.31,1.80,2.0,2.5,3.5和5.0)的15种有机溶剂及其不同体积分数(φ=5%,10%,15%,20%,25%,30%,35%,40%,50%,60%和70%)的溶液中,测定木瓜蛋白酶及其固定化酶的活性,以不含相应有机溶剂的0.1 mol/L pH 7.2磷酸缓冲液或Tris-盐酸缓冲液为对照,分析不同有机溶剂及其体积分数对酶活性的影响。【结果...
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 马子宾  郑鸿飞  刘均忠  郝建华  孙谧  
通过生理生化、分子生物学、单因子优化等方法研究了来自南海海域一株产中性蛋白酶菌株S-3685,并对其在250 ml摇瓶中的培养条件进行了优化。结果显示,该菌株初步确定为芽孢杆菌属(Bacillus),发酵培养的最佳碳、氮源分别为葡萄糖10 g/L和豆面10 g/L,牛肉膏5 g/L,酵母膏5 g/L。无机盐Mg SO4·7H2O、Na2CO3、KH2PO4最佳浓度分别为0.2 g/L、2.0 g/L、1.0 g/L;菌株在培养基起始p H=7.0、4%接种量、15 ml/250 ml(v/v)装液量和30℃的条件下,发酵72 h获得较高的酶产量。在最佳培养条件下产酶量为4250 U/ml,是优...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 许萍  薛长湖  张香治  赵雪  李兆杰  
采用3942中性蛋白酶酶解中国毛虾(Aceteschinensis)蛋白,制备具有抑制血管紧张素转移酶(ACE)活性的多肽。采取正交实验研究料水比、酶量、反应温度、反应时间4个因素对酶解中国毛虾蛋白产物的ACE抑制活性的影响。结果显示,在料水比1∶3(体积比),酶量0.5%,温度45℃,时间8h的水解条件下得到的酶解产物F7的ACE抑制活性最高,其抑制率达到92.86%。用层析柱SephadexG25、SPSephadexC50对F7进行分离纯化,选取ACE抑制活性最高的峰进一步用反相高压液相色谱进行纯化,得到单一组分FⅠ。经飞行时间质谱和碰撞诱导裂解分析确定,FⅠ为新型的ACE抑制肽SerP...
[期刊] 农业现代化研究  [作者] 江波  米书梅  阮征  邓近平  黄亚霖  印遇龙  
糖苷酶在水解/合成生产功能性食品配料(含低聚糖)方面扮演着重要角色。为提高糖苷酶的重复利用率与稳定性,本文对影响海藻酸钠固定化β-呋喃果糖苷酶(β-fructofuranosidase,ffase)工艺的因素进行分析,利用响应面法对固定化酶工艺进行优化,最后对所得固定化酶的稳定性进行评价。结果表明:影响海藻酸钠固定化ffase工艺的关键因素及最佳条件为4 g/L海藻酸钠、固定42 min、交联温度26℃,酶活回收率为60.95%;在此条件下与游离酶相比,4℃下保存12 d后,酶活力依然有60%以上,具有良好的储存稳定性;在温度低于70℃范围内有良好的热稳定性。连续使用5次后,其固定酶活仍保持初...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 李骅  姜灿烂  丁大虎  杨倩  蔡天明  
[目的]采用联合固定化微生物技术对降解菌Pseudomonas taiwanensis LH-3进行固定,以期为稳定高效降解2-羟基-1,4-萘醌提供理论依据。[方法]通过往20 g·L~(-1)海藻酸钠(sa)中添加2.5 g·L~(-1)生物炭(biocHar,马尾松树干700℃高温缺氧热解所得),同时以0.2%接种量接入2-羟基-1,4-萘醌降解菌LH-3,制成联合固定化菌(sa+biocHar+bacteria),并考察其结构性能;通过与不添加生物炭的海藻酸钠+菌(sa+bacteria)等4种对照处理进行比较,研究联合固定化菌对2-羟基-1,4-萘醌的降解特性;通过与海藻酸钠+菌处理...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 白玮  张锐  郭三堆  
【目的】为开发抗病基因和生物农药新资源,纯化鉴定枯草芽孢杆菌B111分泌的抗棉花黄萎病菌蛋白质,克隆其编码基因,并分析在毕赤酵母中的表达特性。【方法】通过超滤浓缩、90%硫酸铵沉淀、葡聚糖凝胶QAE-A50强阴离子交换柱洗脱及冻干等步骤,分离纯化抗菌蛋白。采用联机反相毛细管柱液相色谱电喷雾串联质谱,鉴定抗菌蛋白种类。克隆包含前导区序列在内的抗菌蛋白基因序列,构建表达载体pPIC9K-PT,转化毕赤酵母GS115。转化子经PCR鉴定,甲醇诱导表达产物经中性蛋白酶活性和抗菌活性检测验证功能。【结果】纯化鉴定了一个来源于枯草芽孢杆菌B111的抗菌中性蛋白酶BS2。克隆了包含前导区序列在内的抗菌蛋白基...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 刘庆慧  黄倢  宋晓玲  刘莉  
从感染白斑综合症病毒(Whitespotsyndromevirus,WSSV)的对虾中提取和纯化WSSV,对其蛋白酶活力进行分析。结果表明,WSSV蛋白酶具广泛的pH稳定性,当pH达7.5时,蛋白酶活性最大;pH高于10 0时,酶活力很低,其蛋白酶偏碱性。丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟(PMSF)对酶活性有抑制作用。Ca2+、Mn2+、Fe2+和Cu2+可降低WSSV蛋白酶活性,但Mg2+有轻微的激活作用。胰蛋白酶抑制剂在浓度为12.5~25.0mg/L时,对WSSV蛋白酶活性无影响。Leupeptin使蛋白酶活性降低12.29%。Chymostatin在质量浓度为12.5~25.0mg/L时...
[期刊] 水产学报  [作者] 黄峰  严安生  汪小东  
鲢、鳙胰蛋白酶的研究黄峰,严安生,汪小东(华中农业大学,武汉430070)关键词鲢,鳙,胰蛋白酶STUDIESINTRYPSININSILVERCARPANDBIGHEADCARP¥HuangFeng;YanAnshengandWangXiaodon...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 林仕梅  王友慧  罗莉  叶元土  李涛  
以嘉陵江野生大鳍(Mystusmacropterus)为材料,对其蛋白酶的酶活力影响因素、酶解动力学、体外消化率进行综合研究。结果表明,(1)大鳍胃、肠、肝胰脏的蛋白酶最适温度分别为36、40、40℃,最适pH分别为2 2、7 0、7 0,温度对胃、肠蛋白酶的影响大于肝胰脏,pH对胃蛋白酶的影响大于肠和肝胰脏;(2)肠蛋白酶的酶解能力最强,对鱼粉和豆粕酶解产生氨基酸,速度分别为52 288mg/h和33 352mg/h,胃、肝胰脏蛋白酶的酶解能力差异不显著,对鱼粉和豆粕酶解产生氨基酸,速度分别为24 328mg/h、25 275mg/h和19 843mg/h、17 535mg/h;(3)大...
[期刊] 水产学报  [作者] 王海英  薛长湖  孙谧  王跃军  王清印  
以大菱鲆肠道为材料,对大菱鲆消化生理中起重要作用的肠蛋白酶的分离纯化条件和理化性质进行了研究。经Tris-HCl缓冲液抽提,硫酸铵分级分离,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析分离纯化,获得大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ的电泳纯制品,并对该酶的性质进行了研究。结果显示:纯酶的分子量约为58kD。纯酶最适反应pH为9.0,最适反应温度50℃;pH稳定范围6.0~11.0,30℃以下酶活性稳定;Mn2+可激活大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ,Cu2+、Zn2+、Ag+、Fe3+则对酶活性有抑制作用;巯基蛋白酶抑制剂显著抑制大菱鲆肠蛋白酶Ⅰ的活性,金属蛋白酶抑制剂...
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