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[期刊] 海洋渔业
[作者]
陈张帆 程鹏 胡谋 王洁 张婷婷 黄红涛 杜合军 陈松林
为了解抗冻剂对施氏鲟(Acipenser schrenckii)精子冷冻保存效果的影响及其冷冻损伤机理，比较了添加不同浓度海藻糖和蔗糖作为冷冻保护剂的精子稀释液处理后施氏鲟精子冷冻复苏的活力、快速运动时间和寿命。结果表明，添加60 mmol·L~(-1)海藻糖1.0 mmol·L~(-1)氯化钾的稀释液处理后，精子冻后快速运动时间和寿命与鲜精相比无显著差异(P>0.05);且活力较其他处理组有所提高，达到(26.67±3.32)%,但仍显著低于鲜精(P<0.05)。利用透射电镜和扫描电镜对施氏鲟精子超低温冷冻保存前后的超微结构进行观察，并对其能量代谢酶和抗氧化酶活进行测定和比较，结果表明，低温冻存造成施氏鲟精子的膜系统和细胞器(主要为线粒体和轴丝)损伤；能量代谢酶[总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)]和抗氧化酶[过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)]活性均显著下降(P<0.05),而抗氧化酶谷胱甘肽还原酶(GR)活性显著上升(P<0.05),表明冷冻精子的生理功能损伤、内环境稳定性下降，能量供给系统被破坏。未添加抗冻剂组精子的总ATP酶、CK、CAT、SOD及GR酶活性相比添加抗冻剂组有显著差异，说明含有海藻糖的抗冻剂可对冷冻精子起到一定的保护作用。研究结果可为后期进一步优化施氏鲟抗冻剂的配方提供理论基础与研究思路。
[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄晓荣 张涛 冯广朋 赵峰 刘鉴毅 王妤 章龙珍 庄平
选取６ ｉｎｄ健康的雄性俄罗斯鲟（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒ ｇｕｅｌｄｅｎｓｔＡｅｄｔｉ），经人工催产后获得成熟的精子，研究超低温冷冻（－１９６℃）对俄罗斯鲟精子顶体酶活性及ｄｎＡ损伤影响。结果显示：俄罗斯鲟鲜精中顶体酶的平均活性为（３６．１８±２．５４）μｉｕ·１０－６，经过超低温冷冻后，精子顶体酶活性显著降低，添加抗冻保护液精子中顶体酶活性降至（２１．５５±０．７９）μｉｕ·１０－６，未添加抗冻保护液精子中顶体酶活性降至（９．５８±１．０８）μｉｕ·１０－６，且三者间有显著性差异（ｐ＜０．０５）。单细胞凝胶电泳结果表明，俄罗斯鲟鲜精彗星率为（３７．３３±７．７７）％，添加抗冻剂后冻精的彗星率为（．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张树山 李青旺 李刚 陈晓宇 胡建宏 韩增胜 王立强
比较了在冷冻保存液中添加不同水平海藻糖、蔗糖和乳糖对猪精液冷冻保护的效果。结果表明,添加3种双糖均能提高精液的冷冻保护效果,其最佳添加水平均为0.035 g/mL,在该添加水平下,海藻糖组的精子活率、活力和精子质膜完整率分别为(46.34±0.52)%,(41.38±0.39)%和(43.51±1.78)%,与蔗糖组差异均不显著(P>0.05),但均显著高于乳糖和对照组(P<0.05);海藻糖组的有线粒体活性精子百分率和精子顶体完整率分别为(44.56±1.16)%,(64.09±0.81)%,显著高于蔗糖、乳糖和对照组(P<0.05),3种双糖均随添加水平升高精子的顶体完整率逐渐升高;海藻糖...
关键词：
猪精液 精液冷冻 海藻糖 蔗糖 乳糖
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李美霞 张庆利 刘利平 黄倢 谢国驷
环介导等温扩增(LAMP)技术近年来被广泛应用于病原生物的检测。为了解决LAMP反应试剂混合物在室温条件下的储运问题,本研究对添加5%、10%和15%海藻糖(质量/体积,g/ml)的LAMP反应试剂混合物进行冷冻干燥处理,研究了其在4℃、25℃和37℃储藏条件下活性维持的情况。研究结果表明,添加15%海藻糖能最大程度地保护LAMP反应试剂混合物的活性。相对于未经处理的普通LAMP体系混合物而言,添加15%海藻糖并经冷冻干燥的试剂混合物在4℃、25℃和37℃储藏条件下的活性半衰期分别为112.3、36.2和6.2d,分别为对照组的6.5、8.7和2.1倍。在LAMP反应试剂混合物中添加海藻糖并进...
[期刊] 海洋渔业
[作者]
汪亚媛 张国松 李丽 尹绍武 侯新远 张丽娟 贾一何 胡亚丽 周国勤 茆建强
对瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)精子在不同盐度和pH下的精子活力进行观察,同时研究了精子在4种不同稀释液与2种不同浓度抗冻剂组成的保存液中的超低温冷冻保存,并开展了冻精的授精实验。结果表明,瓦氏黄颡鱼精子浓度为(2.035±0.179)×1012cell·mL-1,在盐度为5.8、pH为7.17时,精子的活力都高达95%。以A液作为稀释液、10%甲醇作为抗冻剂时,冷冻保存精子效果最好,解冻后精子活力为(81.7±0.9)%。用解冻后的精子进行人工授精,获得的受精率为(88.4±2.1)%,孵化率为(74.0±0.8)%;而鲜精受精率为(91.0±0.8)%,孵化率(8...
关键词：
瓦氏黄颡鱼 精子 活力 超低温保存
[期刊] 水产学报
[作者]
章龙珍 刘鹏 庄平 王斌 闫文罡
为改进西伯利亚鲟精子超低温冷冻保存技术,探讨精子损伤机制,应用扫描和透射电子显微镜,观察了西伯利亚鲟鲜精与冷冻后精子的形态结构。结果显示,经过冷冻保存后精子的形态发生了很大变化。精子顶体长、精子头中部宽、头中部宽与前部宽比值及中段宽与鲜精相比显著增加(P<0.05);中段长度、后外侧延伸物长度比鲜精显著变短(P<0.05)。精子经过冷冻后有30.5%的精子在形态、结构上受到不同程度损伤,受损精子显微结构表现为顶体后外侧延伸物与核糅合,顶体内容物丢失;核膜囊泡化、核膜断裂,核内出现空泡;线粒体内嵴弥散,线粒体脱落;鞭毛外膜松弛与鞭毛脱离等。部分受损伤精子出现顶体丢失,中段脱落,鞭毛自中段基部断裂...
关键词：
西伯利亚鲟 精子超微结构 冷冻损伤
[期刊] 西南农业学报
[作者]
周洲 李世凯 赵飞 陈飞雄 孔杰
【目的】研究不同抗冻剂对西伯利亚鲟精子的冷冻保存效果,筛选出合适的鲟鱼精子超低温冷冻保存抗冻剂。【方法】采用计算机辅助精子分析系统(CASA),检测10%、15%、20%的甲醇(MeOH)和二甲基亚砜(DMSO)分别作为抗冻剂超低温保存西伯利亚鲟精液活力及运动参数差异。【结果】以MeOH和DMSO作为抗冻剂,在浓度分别为10%、15%、20%条件下,精子解冻激活后DMSO保存的精子活力及精子的运动参数均高于MeOH保存的精子。各处理抗冻效果以15%DMSO最优,其A+B级精子活力占比最高,为44.83%;精子的平均曲线运动速度(VCL)、平均路径速度(VAP)最高,分别为24.33、22.16μm/s,显著高于10%DMSO组精子,与20%DMSO间差异不显著;精子头侧摆幅度(ALH)、运动的摆动性(WOB)、平均移动角度(MAD)指标3种浓度间差异不显著。【结论】西伯利亚鲟的精子超低温冷冻保存抗冻剂以15%DMSO的抗冻效果最好。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
舒雪密 叶欢 仲嘉 张鸣 罗江 刘源 杜浩
中华鲟(Acipenser sinensis)是我国一级重点保护水生动物,其精原干细胞等种质资源冷冻保护技术尚不完善。本研究在前期建立的匙吻鲟(Polyodon spathula)精原干细胞冷冻保存液配方基础上,研究解冻温度、抗氧化剂和抗冻蛋白对中华鲟精原干细胞冷冻保存效果的影响,以期建立高效的中华鲟精原干细胞超低温冷冻保存方法。研究结果表明,实验设置的解冻温度(20、25、30和40℃)中25℃组冷冻保存效果最佳:解冻后细胞数目为(3.86±0.51)×10～5,细胞存活率可达(96.36±0.53)%;比较不同浓度组(500、1000和1500 mg/L)的谷胱甘肽、抗坏血酸和α-生育酚等3种抗氧化剂对中华鲟精原干细胞冷冻保存效果的影响,结果显示,冷冻保存液中添加1000 mg/L α-生育酚的实验组,解冻后得到的细胞数目最多(7.64±0.34)×10～5,显著高于其他抗氧化剂添加组,细胞存活率可达(92.82±0.72)%;通过比较不同浓度(0.1、1.0和10μg/mL)的两种类型抗冻蛋白(AFPI和AFPIII)对中华鲟精原干细胞的冷冻保存效果,发现添加了1.0μg/m L AFPI的实验组解冻效果最好,解冻后得到的细胞数目为(6.85±0.19)×10～5,显著高于其他实验组,细胞存活率为(86.89±0.73)%。综上所述,中华鲟精原干细胞冷冻保存的最佳解冻温度为25℃,1000 mg/L α-生育酚作为抗氧化剂,和1.0μg/m L AFPI作为抗冻蛋白对其冷冻保存效果最佳。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
昝林森 张莺莺 耿繁军 田万强
【目的】研究海藻糖(TH)和牛血清白蛋白(BSA)单独或配合使用对牛精液冷冻效果的影响。【方法】向种公牛精液商业稀释液中添加不同浓度的TH(0,0.000 37,0.025和0.05 mol/L)和BSA(0,1,2,3 g/L),TH和BSA的4个添加水平分别两两组合,组成16个处理,以其中二者添加水平均为0作为对照,制作0.25 mL细管冻精,解冻(40℃,10 s)后比较分析精子活率、顶体完整率和质膜完整性3个指标。【结果】单独添加TH、BSA及其互作对牛精液的冷冻效果与对照组相比达到显著水平。与对照组相比,单独添加不同水平的TH或BSA对冻后牛精子活率和质膜完整率均有明显影响(P<0....
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
田永胜 陈松林 季相山 孙礼娟 翟介明
半滑舌鳎精子冷冻保存对于人工繁殖育苗、杂交育种、雌核发育及其性别控制研究具有重要的意义,为此,本文对半滑舌鳎精子冷冻保存方法进行了研究。分别利用2.8mol/L的二甲基亚砜(DMSO)、甘油(Gly)和1,2-丙二醇(PG)冷冻保存该鱼精子。结果显示,DMSO冷冻保存精子的活力较高。利用MPRS+2.8mol/L DMSO以1∶0.5、1∶1、1∶1.5和1∶2的比例稀释并冷冻精子,1∶1比例在冻前能够抑制精子的运动,冻后活力可达82.50±3.54%,显著高于其他稀释比例(P
关键词：
半滑舌鳎 精子 冷冻保存
[期刊] 中国水产科学
[作者]
金佳利 许金娇 杜明润 乔明辉 阮瑞 李创举
瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)是我国极具发展前景的养殖品种,本研究拟建立一套完善的瓦氏黄颡鱼精子冷冻保存体系,为瓦氏黄颡鱼的人工繁殖、育种创新及种质资源保护提供技术支撑。利用计算机辅助精子分析系统进行精子质量检测,对稀释液、稀释比例、抗冻剂、冷冻和复温程序进行了优化筛选。结果显示,稀释液2对瓦氏黄颡鱼精子的保存效果较好,最佳稀释比例为1:10。以DMSO作为抗冻剂对瓦氏黄颡鱼精子毒性较大, 10%的甲醇具有最佳的抗冻效果。瓦氏黄颡鱼精子冷冻程序的最优条件为:平衡时间30min,液氮上方7cm处熏蒸10 min。冻存的精子在42℃水浴解冻9s时具有较高的活力和运动性能。在本研究建立的冻存条件下,复苏后的瓦氏黄颡鱼精子活力达93%,前向运动比例达53%,与鲜精无差异。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
刘娟 许春荣 刘念 张争光 赵文婧 赵欢欢 许鹏 刘德玉 许常龙 胡传活
【目的】筛选最佳的Mito-TEMPO浓度并探究其对猪精子冻后质量、抗氧化能力及线粒体功能的影响，为改善猪精子冷冻保存方法提供参考依据。【方法】在冷冻Ⅰ液中添加0.5、5.0、50.0和500.0 μmol/L Mito-TEMPO，通过评估冷冻解冻后各组精子的动力学参数和活率，筛选出适用于猪精液冷冻保存的Mito-TEMPO浓度。检测冷冻解冻后猪精子的质膜完整率、顶体完整率、DNA碎片指数（DFI）、活性氧（ROS）水平、总抗氧化能力（T-AOC）、丙二醛（MDA）含量、过氧化氢酶（CAT）和总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性，以及ATP和线粒体呼吸链复合物Ⅰ-Ⅴ含量。【结果】与新鲜组（F组）相比，冷冻解冻后精子的动力学参数和活率显著降低（P<0.05，下同），而添加Mito-TEMPO对冻后精子动力学参数和活率均有不用程度的改善，以50.0 μmol/L Mito-TEMPO最有效。与F组相比，冻后猪精子的质膜和顶体完整率、T-AOC及ATP和线粒体呼吸链复合物Ⅰ-Ⅴ含量显著降低，CAT和T-SOD活性也显著降低，DFI、ROS水平、MDA含量显著升高。而与冷冻对照组（C组）相比，50.0 μmol/L Mito-TEMPO组（M组）中精子的质膜完整率、顶体完整率、T-AOC及ATP和线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅴ含量显著升高，DFI、ROS水平、MDA含量显著降低，CAT和T-SOD活性显著提高。【结论】Mito-TEMPO对猪精子具有冷冻保护作用，且Mito-TEMPO的最佳浓度是50.0 μmol/L，可通过提高冷冻解冻后猪精子的抗氧化能力和线粒体功能来改善精子的质量。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李青旺 江中良 王立强 胡建宏 于永生 夏凡
采用液氮熏蒸法制作猪冻精颗粒 ,对稀释液及冷冻保护剂进行优化筛选。结果表明 ,在 5种稀释液中 ,5号稀释液优于其他 4种 (P
[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄晓荣 张涛 冯广朋 赵峰 刘鉴毅 王妤 章龙珍 庄平
选取6 ind健康的雄性俄罗斯鲟(Acipenser gueldenstaedti),经人工催产后获得成熟的精子,运用扫描电镜和透射电镜,观察了超低温冷冻前后精子的形态结构。结果显示,经过超低温冷冻后精子形态结构发生了较大变化,其中冻精顶体长度、头中部宽度及中段宽度与鲜精相比显著增加(P<0.05);中段长度及后外侧延伸物与鲜精相比显著减少(P<0.05)。冻后有38.6%的精子在形态结构上受到不同程度的损伤。精子的结构损伤主要表现在精子顶体不明显或与核发生糅合,后外侧延伸物消失,甚至顶体脱落;精子核膜皱
[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄晓荣 章龙珍 庄平 刘鉴毅 张涛 冯广朋 赵峰
研究超低温(-196℃)冷冻保存对大黄鱼(Pseudosiaena crocea)精子内总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性的影响。运用试剂盒分别测定了冷冻前后大黄鱼精子内酶活性的变化。结果表明,经过超低温冷冻保存后,大黄鱼精子的活力下降,精子内GR活性从(4.42±0.29)U·L-1增加到(58.93±2.26)U·L-1(P<0.05);其它几种酶的活性均显著下降(P<0.05),总ATP酶、CK、SDH的活性分别从冻前的(60.16±5.88)U·mL-1、(11.91...
关键词：
超低温冷冻保存 大黄鱼 精子 酶活性
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