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[期刊] 中国水产科学
[作者]
宋玉娟 崔铁军 李丹彤 刘扬
海萝(Gloiopeltisfurcata)经PBS缓冲液抽提、硫酸铵分级、DEAE 52纤维素离子交换层析和SephadexG 200分子筛层析,从中纯化出海萝凝集素(GFL),在PAGE和等电聚焦电泳上各显示单一蛋白染色带,其等电点为9 0。用SephadexG 200分子筛层析测得其相对分子质量为8318。海萝凝集素除对人血型红细胞无凝集活性外,对单胞藻及兔、鲤、鲫的红细胞均表现出一定程度的凝集活性,对兔红细胞的凝集活性最强,且不被已测试的D-果糖、D-半乳糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖所抑制,而被D-甘露糖、牛甲状腺球蛋白、鸡卵白蛋白、γ-球蛋抑制。该凝集素在pH4 0～10 2均有活性,而在...
关键词：
海萝 凝集素 纯化 理化性质
[期刊] 水产学报
[作者]
李丹彤 宋亮 钟莉 常亚青
为探寻刺参药用价值,探索其抑制肿瘤细胞增殖,促进淋巴细胞转化等生物功能。将刺参(Apotichopusjaponicus)经磷酸盐缓冲溶液抽提,20%~75%硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-200分子筛层析,得到刺参凝集素(AJL)。用Sephadex G-200分子筛层析测得其分子量为85 652Da。AJL的含糖量为20.9%。该凝集素可以凝集人的A、B、AB、O型红细胞,且对A型红细胞凝集作用最强,在对兔、鼠、鲤鱼、鸡和人的A、B、AB、O红细胞的凝集作用中,对鸡的凝集作用最强。该凝集素凝集兔红细胞的作用不被D-果糖、D-甘露糖、γ-球蛋白、葡萄糖、蔗糖、甘露聚糖所抑制,而被牛甲状...
关键词：
刺参 凝集素 纯化 性质
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李丹彤 崔铁军 马国庆 汤霞 李熙宜
角叉菜（ Ｃｈｏｎｄｒｕｓ ｏｃｅｌｌａｔｕｓ）经磷酸盐缓冲液抽提， ２０％～ ７５％硫酸锭分级沉淀，牛甲状腺球蛋白一Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析，可以从红藻角叉菜中纯化出角叉菜凝集素（ＣＯＬ），在 ＰＡＧＥ上显示单一蛋白染色带，在等电聚焦电泳上显示单一蛋白染色带，其ＰＩ为８．３０。纯化后的ＣＯＬ的最大紫外吸收峰在２８５ ｎｍ，用ＳｅＰｈａｄｅｘＧ－２００分子筛层析测得其分子量为 ４ ２５２。该凝集素可以凝集人的Ａ、Ｂ、ＡＢ、Ｏ型红细胞，且凝集活性相同，在对人、兔、鲤、鲫的红细胞的凝集作用中，对兔红细胞的凝集作用最强，且不被己测试的Ｄ－半乳糖、Ｄ－果糖、Ｄ－甘露糖、葡萄糖、蔗糖、甘露聚糖、...
关键词：
角叉菜 凝集素 纯化 理化性质
[期刊] 水产学报
[作者]
李丹彤 张泽虎 赵元凤 钟莉 张泽宇 王冬梅 李伟
将海洋红藻-绒线藻(Dasya villosa)经磷酸盐缓冲液抽提,20%~75%硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-200分子筛层析,得到绒线藻凝集素(DVL)。用Sephadex G-200分子筛层析测得其分子量为547ku。该凝集素凝集兔红细胞的作用不被D-果糖、D-半乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露聚糖、γ-球蛋白所抑制,仅被牛甲状腺球蛋白所抑制,最小抑制浓度为96.88mg.L-1。2价金属离子Ca2+、Mg2+及EDTA对该凝集素凝集活性没有影响。其凝集活性在25~80℃保持不变为28,90~100℃加热30min,活力为27,仍保留50%的活性,说明其具有较强的耐热性。经t-检验,注射...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘雪兰 余为一 李槿年
本研究建立鼠红细胞膜吸附法纯化中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)血清凝集素的方法,并与硫酸铵盐析、凝胶过滤层析和离子交换层析等其他提取方法进行比较。实验结果表明,中华绒螯蟹血清经鼠红细胞膜吸附后,再由EDTA把结合的凝集素从膜上解离,可以获得纯化的高活性凝集素。该纯化物在PAGE中出现2个清晰的区带,一个是大分子的b带,另一个则是由3种大小相近的小分子组成的c区带;在SDS-PAGE中,则显示出3个分子量接近、约为100 000的条带。经50％饱和硫酸铵盐析或用Sephadex G200凝胶过滤层析法可浓缩但不能纯化中华绒螯蟹血清凝集素。经DEAE-Sephadex A50离子...
关键词：
中华绒螯蟹 凝集素 鼠红细胞膜吸附 纯化
[期刊] 水产学报
[作者]
李丹彤 谢广成 丁文勇 王秀利 刘洋 徐文琦 张永攀
为进一步研究刺参甘露糖结合凝集素(AJ-MBL)的功能及提高刺参自身免疫力,对AJ-MBL基因的CDS区进行原核表达、纯化并初步鉴定其生物学活性。采用RT-PCR法扩增AJ-MBL基因编码区,经酶切鉴定、序列分析后,将其CDS区498 bp片段克隆至原核表达载体pET28a中,得到重组质粒pET-AJ-MBL。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并经IPTG诱导表达出分子量约17 ku的融合蛋白。该蛋白以包涵体形式存在,用Ni2+离子亲和柱纯化。结果显示,获得高表达量的重组纯化蛋白。纯化的17 ku AJ-MBL进行红细胞凝集试验检测其生物学活性。凝集试验结果显示,AJ-MBL凝集...
[期刊] 华北农学报
[作者]
于小清 陈段芬
为了探索植物凝集素在分子水平的作用机理,利用RT-PCR技术从中国水仙(Narcissus tazettavar.chinensis)金盏银台中克隆到一个新的编码凝集素的基因。序列分析与预测结果表明,该基因cDNA片段总长为609 bp,含有一个由25个氨基酸残基组成的信号肽和一个519 bp的完整开放阅读框;编码172个氨基酸,分子量为18 712.31 Da;前体蛋白在氨基酸水平上与杂种多花水仙凝集素、雪花莲凝集素、石蒜凝集素的一致性分别为83%,81%和77%;其二级结构以α-螺旋、不规则盘绕和延伸链为主;三级结构与雪花莲凝集素极其相似,是一种能与D-甘露糖特异性结合的B型凝集素。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杨刚柱 未金花 吕迅 程水红 梁静南 李学兵
为了构建简单高效的病原微生物分离纯化方法,首先制备了双金属磁性纳米粒子Au-Fe3O4,然后在Au组份的表面修饰了可特异性结合凝集素及病原微生物的的乳糖基(Lac),获得了糖基化磁性纳米粒子Lac-Au-Fe3O4,并进一步研究了Lac-Au-Fe3O4与蓖麻凝集素(RCA120)之间的反应及其对RCA120分离效率的影响,结果表明:1)Au-Fe3O4纳米粒子尺寸均一(8+14nm),呈哑铃状,Au和Fe3O4组份分别位于哑铃的两端;2)Lac-Au-Fe3O4具有良好的水溶性和磁学性质,在30min之内可特异性地与RCA120充分结合;3)在外加磁场作用下,Lac-Au-Fe3O4对水溶液...
关键词：
磁性纳米粒子 糖基化 凝集素 病原微生物
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
姚东瑞 盘赛昆 周鸣谦 葛荣荣
采用DEAE-SepharoseFF离子交换层析和Superdex20010/300GL凝胶过滤层析技术,从泥鳅血清中分离出两种天然凝集素MSL-I和MSL-Ⅱ。SDS-PAGE检测表明,MSL-I及MSL-Ⅱ均显示两条蛋白质着色带。采用凝胶过滤法测得MSL-I相对分子质量为25000,MSL-Ⅱ相对分子质量为82000。根据凝胶过滤测定及SDS-PAGE检测结果可知,MSL-Ⅱ由相对分子质量分别为29000和13600两种亚基组成,MSL-I的亚基组成有待进一步研究。MSL-Ⅱ能结合多种糖,其中对乳糖的亲和力最强。MSL-Ⅱ具有较强的热稳定性,在pH4～11范围内具有凝集活性,最适pH为6～...
关键词：
泥鳅 血清 凝集素 分离纯化
[期刊] 淡水渔业
[作者]
张黎 袁媛 王娟 顾继锐 吴江 谢显连 徐恒
从南方鲇(Silurusmeridionalis)血清分离到一种天然的凝集素分子,能够凝集多种不同的抗原物质,其组成成分为糖蛋白,具有耐热和耐酸碱性,对β-巯基乙醇敏感。凝集反应受温度、离子强度以及时间等因素的影响。经糖的专一性抑制实验显示,蔗糖和半乳糖对凝集反应有抑制作用,说明这2种糖分子是凝集素在识别和凝集过程中起一定作用的糖分子。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
廖绍安 李筠 张晓华 纪伟尚 徐怀恕
日本对虾 (Penaeusjaponicus )亲虾体长 19～ 2 4 .5cm ,取其血清。 7种动物血液取自大白鼠、小白鼠、豚鼠、兔、鸡、羊、人。结果表明 :①虾血清分别在 2 8、37、5 6℃时热处理 30min ,其凝集活性不变 ,在 70℃和 80℃热处理 30min后凝集活性完全丧失。②血清在 pH为 5～ 7.5的TBS缓冲液中凝集活性稳定 ,在pH为 8～ 9之间凝集活性迅速下降。③凝集抑制实验表明半乳糖、甘露糖、L 阿拉伯糖、D 葡萄糖胺、N 乙酰 D 葡萄糖胺等 5种糖对血清凝集素都有较强的抑制作用 ,尤其D 葡萄糖胺和N 乙酰 D 葡萄糖胺的抑制作用更强。④交叉吸...
关键词：
日本对虾 血清凝集素 理化性质 凝集效价
[期刊] 水产学报
[作者]
何介华 邹思湘 陆承平
将草鱼出血病病毒(GCHV)的结构蛋白与Sepherose 4B偶联制备亲和柱,经亲和层析从团头鲂血清中分离到一种蛋白,能凝集兔红细胞,其血凝性依赖于β巯基乙醇的存在。红细胞凝集抑制实验证实该蛋白与D半乳糖有最高的亲和力,其次为甘露糖。梯度PAGE测得其分子量约为240000,SDS梯度PAGE证实该蛋白由分子量为15000的单个亚基组成,亚基之间没有共价连接。以上特性与半乳糖凝集素相符,故称其为团头鲂抗病毒半乳糖凝集素样蛋白。抗体阻断试验证实,此种凝集素样蛋白是团头鲂血清抗病毒及红细胞凝集活性的主要成分。N末段的氨基酸序列为Lys Val Asn Leu Asp Glu Lys Cys Pr...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘雪兰 余为一 李槿年
将中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)血清凝集素与动物(鳖、鲫鱼、鸡、鸽、兔、鼠、人A、B、O型)红细胞和细菌(八叠球菌、嗜水气单胞菌、短小芽孢杆菌、大肠杆菌、葡萄球菌、假单胞菌和拟态弧菌)进行凝集反应。结果表明,中华绒螯蟹血清凝集素有明显的选择性,与小白鼠红细胞和八叠球菌的凝集活性最高(P0.05)。10 mmol/L的CaCl2和300 mmol/L的NaCl不影响凝集素与小鼠红细胞和细菌的凝集活性,600 mmol/L的NaCl可降低其活性。pH 5~9不影响蟹凝集素活性,但400 mmol/L的ED...
关键词：
中华绒螯蟹 血清凝集素 凝集价
[期刊] 中国水产科学
[作者]
彭其胜 郭文场 杨振国 王玉平
用饱和硫酸铵盐析、S 2 0 0 HR凝胶层析、DEAE sepharose离子交换层析从中国对虾 (Penaeuschi nensis)血淋巴液中分离出 1种凝集素 ,通过SDS PAGE测定 ,该凝集素由 2个亚基组成 ,分子量分别为80 0 0 0、750 0 0 ;此凝集素能凝集牛、马、鼠、兔、鸡、羊和人A、B、O型红细胞 ,其凝集活性不被D 甘露糖、D 果糖、D 乳糖、乙酰半乳糖、神经氨酸、D 葡萄糖、D 半乳糖和D 岩藻糖抑制 ;其最适血凝 pH为 6～ 8,Ca2 +不影响其凝集活性
关键词：
中国对虾 血淋巴液 凝集素 纯化
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