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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
扶绍东 王子菁 王正磊 黄代钏 石皖荣 苗晋锋 张明智
[目的]本试验旨在探讨Streptochlorin对金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，S.aureus）感染引起小鼠乳腺上皮细胞氧化应激的影响及机制。[方法]采用Streptochlorin预处理小鼠乳腺上皮细胞（EpH4-Ev）2h，适时加入S.aureus（MOI=10）共孵育4h，收集样品；通过CCK-8、倒置荧光显微镜观察、生化试剂盒、Westernblot、RT-PCR等方法检测相关指标，辅以计算机分子对接技术。[结果]发现20μmol/LStreptochlorin预处理能够明显改善S.aureus侵袭导致的乳腺上皮细胞排列紊乱、皱缩等形态改变，降低细胞上清损伤标志物乳酸脱氢酶（LDH）、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）的分泌以及肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素6（IL-6）等经典炎性细胞因子的基因的表达（P<0.05），此外，Streptochlorin预处理后显著降低乳腺上皮细胞胞内活性氧（ROS）水平、提高细胞总抗氧化能力（T-AOC）能力、降低丙二醛（MDA）蓄积（P<0.05）。Westernblot检测以及分子对接结果初步证明，Streptochlorin可能通过keap1-Nrf2信号通路，促进下游分子血红素加氧酶1（HO-1）、NAD(P)H:醌氧化还原酶1（NQO1）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽S-转移酶（GST）的基因表达发挥抗氧化作用（P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
崔新洁 胡庆亮 李奕平 陶琳 修磊 刘秉春 陈媛 王潇
【目的】观察金黄色葡萄球菌能否诱导牛原代乳腺上皮细胞发生凋亡。【方法】先以新鲜牛奶为材料分离培养牛乳腺上皮细胞并鉴定,然后用金黄色葡萄球菌侵染牛乳腺上皮细胞,采用普通光镜和扫描电子显微镜观察金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡的形态学变化;用流式细胞仪(Annexin V/PI双染法)定量检测金黄色葡萄球菌感染对牛乳腺上皮细胞凋亡的诱导作用;RT-PCR检测细胞凋亡通路中关键蛋白caspase 3和caspase 8的变化情况。【结果】从乳汁中分离的细胞经原代培养后,细胞呈典型的铺路石状,细胞表层可产生大小不等的乳滴,RT-PCR法扩增出乳腺上皮细胞的骨架蛋白8特异性条带;免疫荧光细胞染色法结...
关键词：
金黄色葡萄球菌 牛乳腺上皮细胞 细胞凋亡
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
海珍珍 范永鑫 马小霞 马海娟 张东涛 周学章
[目的]研究产PV-杀白细胞素(Panton-Valentine leukocidin,PVL)金黄色葡萄球菌ATCC49775(产PVL标准菌株)、ΔPVL 49775(PVL基因缺失株)以及体外重组PVL(rPVL)对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)内质网应激和自噬的影响,为系统阐述金黄色葡萄球菌及PVL对BMECs损伤的分子机制奠定基础。[方法]用感染复数(MOI)为30的金黄色葡萄球菌菌株ATCC49775和ΔPVL 49775感染BMECs,于感染后3和6 h取样;用100 ng/mL rPVL处理BMECs,于处理后1,3和6 h取样;以未处理的BMECs为对照(CK)。用免疫荧光法检测样品BMECs细胞的自噬体荧光强度;提取样品细胞的总蛋白,以GADPH为内参蛋白,采用Western blot法检测各处理组内质网应激相关蛋白(CHOP和GRP78)和自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ、ATG5、Beclin1和p62)的相对表达量。[结果]ATCC49775、ΔPVL 49775感染后不同时间,BMECs自噬体荧光强度均极显著(P<0.01)高于CK,内质网应激相关蛋白(CHOP和GRP78)和自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ、ATG5、Beclin1和p62)的表达水平也大多显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于CK;同一处理时间下,ATCC49775感染组自噬体荧光强度和相关蛋白表达水平均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于CK,内质网应激和自噬相关蛋白的表达水平大多极显著(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
朱于敏 苗晋锋 邹思湘 陈伟华
【目的】建立金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)感染的大鼠乳腺炎模型,并观察CpG-DNA对乳腺的保护作用。【方法】18只雌鼠分3组(n=6),产后72h分别灌注磷酸盐缓冲液(phosphatebuffersolution,PBS)(C组)、2×105CFU·ml-1(L组)和2×1012CFU·ml-1(H组)金葡菌到第四对乳腺内,24h处死。L组乳腺病变轻微,H组腺泡结构破坏严重,并有大量嗜中性粒细胞(polymorphonuclearneutrophils,PMN)浸润;H组乳腺组织TNF-α、IL-6水平显著上升。选择2×1012CFU·ml-1为诱发剂量观察Cp...
关键词：
乳腺炎 大鼠 模型 金黄色葡萄球菌
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
周艺琳 王正磊 许媛媛 韩先干 PHOUTHAPANE Vanhnaseng 苗晋锋
[目的]本试验旨在探讨白藜芦醇对乳房链球菌感染引起乳腺细胞氧化应激的影响及机制。[方法]先用15 μmol·L~(-1)白藜芦醇（resveratrol）处理小鼠乳腺上皮细胞（EpH_(4)-Ev）4 h，再加入乳房链球菌（MOI = 10）共孵育3 h，收集样品；通过生化试剂盒（硝酸还原酶法、比色法、微量法等）、流式细胞术、显微镜观察、Western blot、RT-qPCR等方法检测相关指标的变化。[结果] S.uberis感染可显著提高EpH_(4)-Ev细胞活性氧（ROS）水平和一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）含量、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、乳酸脱氢酶（LDH）、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）、超氧化物歧化酶（SOD）活性，降低总抗氧化能力（T-AOC）水平。白藜芦醇预处理后可显著降低ROS水平、NO含量、iNOS、LDH、NAGase活性，显著提高T-AOC水平，进一步提升SOD活性。在分子水平上，S.uberis感染显著提高EpH_(4)-Ev细胞血红素加氧酶1（HO-1）、NAD(P)H：醌氧化还原酶1（NQO1）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽S-转移酶（GST）mRNA与核因子E2相关因子2（Nrf2）蛋白的表达水平，而白藜芦醇预处理对其有进一步提升作用。显微镜观察发现白藜芦醇预处理可以明显改善由S.uberis感染引起的小鼠乳腺上皮细胞发生皱缩。[结论]白藜芦醇可以有效缓解乳房链球菌感染引起乳腺细胞的氧化应激，这可能与白藜芦醇激活Nrf2蛋白并促进其下游抗氧化基因表达相关。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
朱于敏 刘仪 陈伟华 邹思湘
72只泌乳期SD雌性大鼠随机均分成对照组和试验组(n=36),于产后0 h试验组每只肌注CpG-DNA 200μg,对照组肌注0.01 mol.L-1PBS(pH 7.2)100μL。两组于产后72 h均经乳头管灌注2×1012CFU.mL-1金黄色葡萄球菌,每侧各100μL到第4对乳腺内(两侧);分别于灌注前0 h,灌注后8、16、24、48和72 h(n=6)颈静脉放血处死。组织学观察显示,试验组乳腺腺泡内嗜中性粒细胞(PMN)在感染初期较对照组浸润迅速,试验组在72 h时已无PMN浸润,而对照组仍有浸润。与对照组相比,CpG-DNA能显著降低8、16和72 h的乳腺组织细菌数。IL-2水...
[期刊] 华北农学报
[作者]
马小军 陈富强 张小丽 李发弟 唐然 张晨 宋晓育 张欣
Ｔｏｌｌ样受体能够识别细菌等病原微生物及介导炎症反应信号通路，在先天免疫和获得性免疫中发挥着重要作用。为了解Ｔｏｌｌ样受体２（ＴｌＲ２）在小尾寒羊正常乳腺组织及由金黄色葡萄球菌引起的乳腺炎乳腺组织中的表达情况，探讨ＴｌＲ２在金黄色葡萄球菌乳腺炎致病过程中的作用机制及乳腺上皮细胞在乳腺免疫防御中所起的作用，采用ｑＲＴ－ＰＣＲ技术和免疫组织化学染色（ＩＨＣ）法检测了正常小尾寒羊及金黄色葡萄球菌乳腺炎病理模型小尾寒羊乳腺组织中ＴｌＲ２基因ｍＲＮＡ及其蛋白的表达情况。结果显示，小尾寒羊正常乳腺组织、金黄色葡萄球菌感染乳腺组织均有ＴｌＲ２ ｍＲＮＡ及其蛋白表达；但金黄色葡萄球菌感染后乳腺组织中ＴｌＲ２基．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨静 易麟乙 刘美 王刘庆 廖美德
【目的】对从原始森林土壤中分离得到的1株抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的放线菌AF1进行分类鉴定,并对其代谢产物活性进行分析。【方法】通过菌株形态学特征、生理生化特征观察和16SrDNA序列分析,对AF1菌株进行分类鉴定;采用琼脂平板打孔法,测定AF1菌株发酵产物的稳定性及AF1菌株发酵产物乙酸乙酯粗提物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌活性。【结果】电子显微镜观察显示,AF1菌株分生孢子直或呈波浪弯曲状,孢子链呈松散螺旋状,AF1菌株能利用葡萄糖、D-半乳糖、麦芽糖、鼠李糖和蔗糖,不能利用D-果糖、D-甘露醇和肌醇,可以水解淀粉但不能水解纤维素。AF1菌株16SrDNA序列全长1 242bp(Ge...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杨洋 张伟 袁耀武 钟晓英 马雯
目的利用PCR技术,无需增菌,直接检测乳品中的金黄色葡萄球菌。方法通过溶剂提取的方法从人工样品中提取模板,以金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因(nuc)为靶基因,经过PCR扩增得到279bp的产物。经过DNA测序证实该产物为目的扩增产物。采用PCR方法实际检测了乳品中的金黄色葡萄球菌,同时,与国标GB4789.10—94方法及两种快速检测致病性金黄色葡萄球菌测试片PetrifilmRSA.CountPlate及Baird-parker+RPFAgar进行了比较。结果PCR方法的灵敏度高,全脂乳和脱脂乳检测的检出限为10CFU/ml,奶酪检测的检出限为55CFU/g,可在6h内完成对乳品中金黄色葡萄球...
关键词：
PCR 检测 乳品 金黄色葡萄球菌
[期刊] 中国农业科学
[作者]
苏洋 蒲万霞 陈智华 邓海平
【目的】了解内蒙古地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌耐药性和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染的情况,为奶牛乳房炎的防治提供理论依据。【方法】采用K-B纸片扩散法,检测分离自内蒙古地区38株金黄色葡萄球菌对17种药物的敏感性,同时用琼脂稀释法检测苯唑西林、万古霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC);再用头孢西丁、苯唑西林纸片扩散法、苯唑西林盐琼脂筛选法和PCR方法扩增mecA耐药基因对分离菌株进行全面MRSA检测。【结果】分离菌株对每种抗生素都有不同程度抗性,对氨苄西林、头孢拉丁、青霉素、复方新诺明、新生霉素和链霉素的耐药率都高于45%,而对氧氟沙星、丁胺卡那霉素、万古霉素、环丙沙星、庆...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
吴从文 鲍宝龙
为了研究金黄色葡萄球菌一氧化氮合酶的功能和作用,克隆该基因的全长序列,在一氧化氮合酶基因缺陷菌株的基础上,构建一氧化氮合酶过表达菌株,进行表型验证,研究NO对细菌表型的影响。结果显示:一氧化氮合酶缺失使细菌自溶速率加快,抗氧化杀伤能力减弱,生物被膜生成能力降低、缺失和过表达均会影响细菌正常的生长周期和速率。外源性NO对野生菌株、敲除菌株和过表达菌株生物被膜有不同影响显示,金黄色葡萄球菌一氧化氮合酶还参与了外源性NO对生物被膜的调控。一系列表型结果表明:金黄色葡萄球菌内源性NO作用不仅仅阻断Fenton反应、增强过氧化氢酶活性,还可以作为一种信号分子调控细菌基因的转录和表达。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张想军 冯峰 周学章
[目的]研究苦参碱在金黄色葡萄球菌入侵奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)过程中的干预作用及其原因,为苦参碱的临床应用奠定基础。[方法]用CCK-8法检测苦参碱对BMECs增殖的影响,用庆大霉素保护试验检测苦参碱对金黄色葡萄球菌入侵BMECs的影响;并在苦参碱干预金黄色葡萄球菌感染BMECs后,分别采用RTqPCR检测BMECs中抗菌肽基因的表达,Greiss法检测NO的分泌,Western blot检测NF-κB通路蛋白p65的表达。[结果] 25～100μg/mL苦参碱均能促进BMECs的增殖,并能抑制金黄色葡萄球菌入侵BMECs;苦参碱干预能显著下调BMECs中抗菌肽基因TAP和BNBD5 mRNA的表达,抑制NO的分泌和NF-κB的活化,并呈剂量依赖性。[结论]苦参碱通过抑制NF-κB的活化来抑制金黄色葡萄球菌入侵BMECs,并可显著下调金黄色葡萄球菌感染的BMECs中抗菌肽基因的表达。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
卢芳国 周清明 陈武 何迎春 张薇 文礼湘
为了解拮抗菌X23发酵液对金黄色葡萄球菌的杀菌作用及机理,将拮抗菌X23发酵液与金黄色葡萄球菌作用后,运用琼脂平板倾注法检测菌体克隆数,扫描电镜观察菌体形态,透射电镜观察菌体超微结构。结果表明:拮抗菌X23发酵液与金黄色葡萄球菌作用60、90、120 min后,金黄色葡萄球菌克隆数极显著低于生理盐水对照组(P
关键词：
拮抗菌 金黄色葡萄球菌 杀菌作用
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王海涛 王倩 谢明杰
【目的】研究大豆异黄酮(Soybean isoflavone,SI)的抑菌机制。【方法】本试验利用呼吸代谢抑制实验和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)荧光染色对大豆异黄酮的抑菌机制进行研究。【结果】呼吸代谢抑制实验结果表明,当SI的终浓度为0.8mg·ml-1时,可显著抑制金黄色葡萄球菌苹果酸脱氢酶的活性,SI组苹果酸脱氢酶的比活性与对照组相比降低了74.97%。DAPI染色结果显示,DAPI可以和金黄色葡萄球菌内的核酸结合,经过SI作用28h后,菌体内的核酸含量呈明显下降趋势,其中DNA的荧光强度减少了33.53%,RNA减...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈秋云 韩北忠 李春雷
通过扫描电镜观察和测定生物被膜生长曲线的研究得出 :在不锈钢表面形成的金黄色葡萄球菌生物被膜约 6h后进入稳定期 ,培养 5d后其细菌密度达到 3× 10 6cfu·cm-2 ;金黄色葡萄球菌以生物被膜的形式比以浮游形式生长对二氧化氯具有更强的抵抗能力 ;胰酶大豆肉汤 (tryptonesoybroth ,TSB)的营养物质能明显减弱二氧化氯的杀菌效果
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