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[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)  [作者] 韩凤英  谢荔岩  连玲丽  林奇英  
从福建霞浦海域分离、筛选到6株对烟草花叶病毒(TMV)具有体外钝化活性的菌株,其中,菌株9和10的抑制率较高,分别达95.26%和92.18%.进一步测定2株菌对TMV的抑制增殖活性,结果表明,菌株9和10可明显抑制TMV的增殖,其抑制率分别为36.29%和35.08%.通过对2株菌的形态特征、生理生化反应及16S rDNA序列的分析,将菌株9鉴定为蜡样芽孢杆菌,菌株10鉴定为水生海洋芽孢杆菌.
[期刊] 中国农业科学  [作者] 梁红艳  戎谞  陈丕庭  马志卿  张兴  
【目的】测定木瓜(Chaenomeles sinensis)抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的活性,并对其中的有效成分进行研究,为发现新的植物源抗病毒物质提供依据。【方法】以心叶烟(Nicotiana glutinosa)和普通烟(N.tabacum)为材料,结合活性追踪法,对木瓜中抗TMV成分进行分离和结构鉴定,并采用半叶枯斑法和室内盆栽试验对粗提物及单体化合物抗TMV的活性进行测定。【结果】木瓜乙醇提取物对TMV表现出较强的钝化作用(10 mg干样/mL的抑制率达97.76%),对TMV系统侵染具有预防作用(10 mg干样/mL的防效为49.98%);乙醇...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 景炳年  李林茹  何军  马志卿  张兴  
【目的】评价植物源病毒抑制剂VFB的抗烟草花叶病毒(TMV)活性,并初步探讨其作用机理。【方法】以心叶烟(Nicotiana glutinosaL.)和普通烟(Nicotiana TabacumL.)为寄主材料,采用半叶枯斑法测定了VFB对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的体外钝化作用及对TMV初侵染和增殖的抑制作用,并用透射电镜技术研究了VFB对感染TMV烟草叶片超微结构的影响。【结果】VFB对TMV具有明显的体外钝化作用,在对TMV钝化0.5,1和2 h后,其抑制率分别为44.41%,55.62%和64.43%;VFB对TMV侵染心叶烟具有较好的预防作用,其...
[期刊] 西南农业学报  [作者] 王芳  鄢波  俞立  陈利  张仲凯  黄兴奇  
从云南省弥勒县采集典型病株接种蔓陀萝,植斑分离,经免疫电镜(IEM)鉴定为TMV(Tobaccomosaicvirus),在红花大金元品种中以TMV普通株作对照进行致病力测定,确定为强毒株系。以烟草花叶病毒RNA云南强毒株系为模板,根据国内外研究结果自行设计、合成寡核苷酸引物,通过RT—PCR体外扩增,E.coli菌株DH5α克隆,获得了云南烟草54KD(TMV复制酶)全基因片段。顺序分析表明:该基因含1425个核苷酸,编码475个氨基酸,与国外发表的U1株系比较,DNA同源率为99.0%,氨基酸同源率为98.9%,与国内普通株比较,DNA同源率为99.1%,氨基酸同源率为98.9%。
[期刊] 西南农业学报  [作者] 王芳  鄢波  王玲仙  方琦  黄兴奇  
从云南弥勒县采集典型病株接种蔓陀萝植斑分离,经免疫电镜(IEM)鉴定为TMV;在烤烟品种红花大金元上以TMV普通株作对照进行致病率测定,确定为强毒株系。以烟草花叶病毒(TMV)云南强毒株系RNA为模板,根据国外研究结果,自行设计、合成寡核苷酸为引物,通过PT-PCR体外扩增,得到约500bp的DNA片段,将其克隆到E.coliDH5α上,并进行了序列分析。分析表明,该其因含477个核苷酸,编码159个氨基酸,与国外发表的U1株系比较,核苷酸同源率为98.1%,氨基酸同源率为97.5%。获得了云南烟草TMV外壳蛋白全基因片段。
[期刊] 西南农业学报  [作者] 李博文  赵宁东  赵立华  何思洁  张丽珍  李顺林  张洁  郑雪  龙琴  张仲凯  李靖  
【目的】烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)严重危害烟草、番茄、辣椒等多种作物,给农业生产造成巨大经济损失,本研究为利用低毒、高效植物源药剂防治TMV病毒病害提供先导化合物和理论依据。【方法】采用枯斑计数法对从多脂大戟中分离的11种化合物进行抗TMV活性测定。【结果】接种TMV 24 h后施用100μg/mL的化合物制剂进行防控实验,其中化合物Euphorblin E (HZ-7)的抑制率为67.54%,高于对照宁南霉素(52.89%);先施用11种化合物制剂6 h后再接种TMV进行预防实验,其中化合物Euphorblin E (HZ-7)抑制率为72.29%,高于对照宁南霉素(58.21%)。【结论】多脂大戟中化合物Euphorblin E可作为抗TMV病毒病害环保型生物源农药研发的先导化合物。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 王海鹏  马志卿  何军  殷培军  张亚妮  冯俊涛  张兴  
【目的】研究植物源农药VFB及其主要成分马齿苋(Portulaca oleraceaL.)、板兰根(Isatis Indigoti-caFort)、甘草(Glycyrrhiza uralersisFisch)等3种植物粗提物的抗病毒活性,为VFB进一步开发利用提供依据。【方法】以病毒A为对照药剂,采用半叶枯斑法测定了VFB及其主要成分马齿苋、板蓝根、甘草等3种植物粗提物对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的体外钝化作用及对TMV初侵染和增殖抑制作用,并用盆栽法研究了VFB对烟草花叶病毒病的保护和治疗作用。【结果】VFB对烟草花叶病毒(TMV)具有明显的体外钝化作用...
[期刊] 西南农业学报  [作者] 陈永对  李宏光  刘春明  董家红  肖俊华  张仲凯  
及时剔除带毒烟苗是防控烟草花叶病的重要一环,该研究采用TAS-ELISA检测与电镜负染色法复检相结合,对2011年红河烟区1308份苗期样品进行TMV检测。结果表明,红河烟区不同育苗点烟苗TMV检出率差异较大,平均检出率为2.52%;不同烤烟品种烟苗带毒率也有差异,烟苗TMV阳性率与品种的抗性无直接相关性,而与育苗地点和育苗环境有关。该研究对筛选无毒壮苗,切断TMV传播途径、减少TMV对大田烟苗的感染具有重要意义。
[期刊] 华北农学报  [作者] 师金鸽  李占杰  杨铁钊  
通过外源水杨酸(Salicylic acid,SA)处理烟苗,研究了水杨酸处理的烟草接种黄瓜花叶病毒后,其病情指数及抗病相关酶活性和H2O2含量的变化。结果表明:接种CMV后21 d,SA处理烟株的病情指数显著低于对照;SA预处理的烟株在接种CMV前后叶片内的过氧化物酶(POD)活性和过氧化氢(H2O2)含量提高,过氧化氢酶(CAT)活性下降。表明水杨酸具有诱导烟草抗黄瓜花叶病毒的效应。
[期刊] 西南农业学报  [作者] 尹跃艳  端永明  徐兴阳  邱仕芳  张廷金  丁铭  董家红  张仲凯  
烟草花叶病毒在烟草种植上为害严重。在烟草育苗前期,对育苗基质、水源、漂盘残根、育苗棚周围植物及烟草种植区病株残体、土壤用烟草花叶病毒TAS-ELISA试剂盒检测。结果表明,在水源、漂盘残根、烟草种植区病株残体、土壤中均可检测到烟草花叶病毒,在育苗棚周边8个科的14种植物中检测到烟草花叶病毒,此类毒源可能成为苗期烟草花叶病发生蔓延的初侵染源。
[期刊] 中国农业科学  [作者] 高晓晓  涂丽琴  杨柳  刘亚楠  高丹娜  孙枫  李硕  章松柏  季英华  
【目的】烟草花叶病毒属(Tobamovirus)是危害辣椒、烟草等茄科作物的主要病毒之一,严重影响蔬菜作物的种植和生产。本研究旨在探明侵染江苏省南京市辣椒的烟草轻绿花叶病毒(tobacco mild green mosaic virus,TMGMV)分离物(TMGMV-JS)的基因组结构特征、系统进化关系及其致病性,为TMGMV的防控提供科学依据。【方法】从江苏省南京市采集的辣椒病样,提取总RNA,利用TMGMV特异检测引物确认阳性后,设计病毒特异性全长引物扩增TMGMV-JS全基因序列,通过同源重组的方法克隆至pCB301植物表达载体上,获得TMGMV-JS分离物基因组序列和全长cDNA侵染性克隆。BLAST分析TMGMV-JS分离物与已报道分离物的同源性,利用MEGA7软件的邻接法进行系统进化分析。将侵染性克隆通过农杆菌浸润本氏烟和辣椒,经RT-PCR和Western blot检测验证侵染效果,测定TMGMV-JS分离物的致病性。【结果】侵染江苏省南京市辣椒的TMGMV全长序列为6 356 nt,编码4个功能蛋白,分别为126K复制相关蛋白、183K复制酶、运动蛋白MP和外壳蛋白CP。同源性分析结果显示TMGMV-JS与重庆分离物TMGMV-TN29(MF139550)同源性最高,厦门分离物(JX534224)次之,系统进化分析结果也显示TMGMV-JS与其他TMGMV聚于同一大分支,其中与重庆、厦门两个分离物在同一小分支,相对近缘。构建的pCB301-TMGMV-JS侵染性克隆载体可以系统侵染本氏烟,引起叶片黄化,植株系统性坏死;也可以系统侵染辣椒,引起叶片斑驳、卷曲和植株矮化等症状。【结论】侵染江苏省南京市辣椒的TMGMV-JS分离物基因组全长6 356 nt,与国内重庆、厦门TMGMV分离物具有较近的亲缘关系,同属于一个分支;构建的TMGMV-JS侵染性克隆可以系统侵染本氏烟和辣椒,在本氏烟上会导致系统性坏死。
[期刊] 华北农学报  [作者] 刘金亮  王凤婷  魏毅  潘洪玉  张世宏  
为从分子水平鉴定山东聊城的一表现明显花叶、黄化、蕨叶及果实畸形的南瓜病毒病的病原。采用RT-PCR的方法,用TMV外壳蛋白(CP)基因的特异引物,对该样品进行了检测,克隆到的基因序列进行分析,并使其在大肠杆菌中表达。结果表明,从该样品中扩增到了TMV的CP基因,说明该样品受到TMV的侵染,首次发现TMV自然侵染南瓜。对CP基因序列测定及分析表明,与GenBank上其他TMV分离物CP基因核苷酸序列的同源性为86.5%~99.0%,推导的氨基酸序列同源性为93.7%~99.4%。根据完整CP基因核苷酸序列构建的系统进化树显示:32个TMV分离物可分为5个组,其中TMV-liaocheng与Nak...
[期刊] 华北农学报  [作者] 刘骏  蒋士君  谈文  
采用化学诱导的方法进行烟草对花叶病毒(TMV)的诱导抗性的试验研究.发现用S30和L1种诱抗剂均能在烤烟、白肋烟和心叶烟上诱导出对TMV的抗性.诱抗效应达19.1%,~35.6%.此外,诱抗后心叶烟、白肋烟还表现出枯斑反应提前和枯斑缩小等抗性增强反应.将诱抗材料子代接种TMV,证明有诱抗性传递现象,其传递效应为25.2%~42.6%.经连续三代用L1诱抗剂在同一烤烟品种(G140)的苗期和花期分别诱导,其子代中诱抗性有逐代增强的现象,诱抗性累加效应分别为:F1 16.98%,F2 27.94%,F3 36.42%.
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)  [作者] 张正坤  吴祖建  沈建国  谢联辉  林奇英  
从烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)感染的发病烟草叶片中提取总RNA,通过RT-PCR扩增得到其运动蛋白基因,将扩增产物克隆到pMD18-T载体上.DNA序列分析表明,所得运动蛋白基因全长为807 bp,与已报道的TMV-U1株系核苷酸和氨基酸同源性均为100%.将目的基因亚克隆到原核表达载体pET-29a上,并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导4 h后蛋白表达量达到最大,超声波显示所得融合蛋白以不可溶形式存在.SDS-PAGA检测蛋白表达情况,表达产物与目的蛋白大小一致,割胶免疫注射家兔得到抗体,ELISA测定效价为25600,Western-blot...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 沈小英  牛小义  段军娜  刘伟  宋双  安德荣  
【目的】筛选对烟草花叶病毒(TMV)有良好抑制作用的多糖。【方法】采用半叶法,测定了云芝、金针菇、姬松、杏鲍菇、双孢蘑菇、灵芝、猪苓菌、蜜环菌、黑木耳、虫草、白桦茸和平菇等12种真菌多糖在枯斑三生烟(Nitcotiana tabacumvar.Samsun NN)上对TMV的抑制作用,并测定了其对烟草(普通烟NC-89)生长的影响。【结果】云芝多糖、猪苓菌多糖、虫草多糖和蜜环菌多糖对TMV均有较好的抑制效果,其中1g/L云芝多糖对TMV具有良好的预防作用,提前48h多糖处理的预防效果高达92.12%。云芝多糖对烟草具有促生作用,1g/L云芝多糖处理烟苗的地上部鲜质量和最大叶面积增效最为显著,分...
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