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[期刊] 水产学报
[作者]
麻金花 翁凌 颜龙杰 张凌晶 刘光明 曹敏杰
针对海参自溶现象,研究海参内脏中与胶原降解相关蛋白酶的存在情况,以期了解内源性蛋白酶在海参自溶过程中发挥的作用,为解明自溶的内在机理提供理论依据。通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析、Sephacryl S-200凝胶过滤柱层析、Phenyl Sepharose FF疏水柱层析及M ini Q离子交换柱层析等方法,从海参内脏中分离纯化出降解明胶的蛋白酶。利用荧光底物研究其酶学性质及其对海参体壁胶原蛋白的降解情况。结果表明,该酶最适温度为30℃,最适p H为7.5,可被金属蛋白酶抑制剂EDTA、EGTA完全抑制,亦可被PM SF、Pefabloc SC等丝氨酸蛋白酶抑制剂...
[期刊] 水产学报
[作者]
康平 汪秋宽 宋琳琳 徐玲
采用(NH4)2SO4分段盐析、透析、阴离子(DEAE-52)交换柱层析、SephadexG-200凝胶柱层析等分离纯化技术,通过SDS-PAGE电泳分析了皱纹盘鲍内脏酶的组成,结果表明鲍内脏酶主要含有两种褐藻胶裂解酶Ⅰ,Ⅱ,一种纤维素酶,一种琼脂酶。对酶的酶学性质分析结果表明两种褐藻胶裂解酶Ⅰ,Ⅱ的最适pH分别为8.6,7.2,最适温度为35℃,分子量分别为35.2 ku,67 ku;两种褐藻胶裂解酶的热稳定性比较差,且易受金属离子影响;纤维素酶的最适pH为5.0,最适温度为40℃。并确定了皱纹盘鲍内脏酶分离纯化的方法及参数,为进一步研究鲍内脏复合酶的性能提供了基础参数。
关键词：
皱纹盘鲍 褐藻胶裂解酶 纤维素酶 纯化
[期刊] 中国水产科学
[作者]
孙丽萍 薛长湖 许家超 李兆杰 蔡跃飘 赵雪
采用硫酸铵沉淀、离心超滤、DEAE-SephadexA25、SephadexG-100和SephacrylS-300HR柱层析等方法从海洋食藻性锈凹螺(Chlorostomarustica)消化腺中分离纯化出一种褐藻胶裂解酶(Alginatelyase),得到电泳纯酶制品,并对此酶的酶学性质进行了研究。结果表明:此褐藻胶裂解酶的分子量为28kD,反应的最适温度为40℃,具有热不稳定性,最适pH为7.0;酶的反应受多种离子的影响,Mn2+、Co2+和Cd2+对此褐藻胶裂解酶活性具有明显的抑制作用,而Mg2+、Zn2+、Na+和K+则具有促进作用;采用透明圈法和底物法验证了此裂解酶对聚甘露糖醛酸和...
关键词：
锈凹螺 褐藻胶裂解酶 特异性
[期刊] 西南农业学报
[作者]
朱友峰 岳寿松 宋爱荣 游银伟 尤升波 王翠萍
利用硫酸铵分级沉淀和交联葡聚糖G-100凝胶柱纯化了高效降解羽毛的嗜麦芽窄食单胞菌YHYJ-1所产角蛋白酶,纯化的角蛋白酶,经SDS-PAGE蛋白电泳分析,分子量为48.3 kda。结果表明,该酶最适反应温度和最适pH值分别为50℃和9.0,30～40℃具有较好的温度稳定性,60℃酶活下降很快;在pH 7.0～9.5的范围内具有较好的稳定性。金属离子Ni2+、Zn2+对角蛋白酶具有明显抑制作用,Cu2+、Fe2+、Fe3+能完全抑制酶活;1%巯基乙醇对酶具有明显激活作用。EDTA和PMSF对该角蛋白酶几乎完全抑制,可判定该酶是丝氨酸金属蛋白酶,是一种新的蛋白酶。
关键词：
角蛋白酶 嗜麦芽窄食单胞菌 性质 纯化
[期刊] 实验技术与管理
[作者]
郭传文 徐越 杜淑媛
I型胶原蛋白是细胞生物学中广泛应用的细胞外基质蛋白之一,也是组织工程等领域常用的生物活性材料,是生物学、细胞力学实验室大量使用且必需的蛋白试剂,一般从大鼠鼠尾中提取获得,称为鼠尾胶原。通过抽取鼠尾肌腱、醋酸溶解、蛋白透析纯化等操作,建立了一种鼠尾胶原的高效提取与纯化技术,能简便、快速地分离得到高纯度的鼠尾胶原。经检测,利用该方法得到的鼠尾胶原具有与商用鼠尾胶原极其相似的实际使用效果。该方法可节约大量实验经费,具备推广价值,同时涉及多种基础实验操作,亦可作为实验教学内容。
关键词：
鼠尾胶原 提取与纯化 实验教学
[期刊] 中国水产科学
[作者]
牟海津 江晓路 蒋萱 管华诗
从多种海藻表面分离筛选到具有较高卡拉胶降解活性的菌株M-2,对该菌株所产卡拉胶降解酶的部分酶学性质和酶解产物进行分析。研究表明,M-2所产卡拉胶降解酶为诱导酶,具有热不稳定性,反应的最适温度为32～38℃,而最适pH为6～8;酶的反应活性受多种离子的影响。经基体辅助激光解吸电离———飞行时间质谱测试,酶解卡拉胶终产物以四糖和六糖为主,该酶为κ-卡拉胶酶。
关键词：
卡拉胶 卡拉胶降解酶 酶学性质 酶解产物
[期刊] 中国水产科学
[作者]
汤海青 管斌 王雪鹏 陈丽红 欧昌荣 胡文浪
从青岛近海的红藻(Gelidiumamansii)中分离筛选到1株高活力的海洋琼胶降解菌AT 22,对其生长、产酶特性和酶活力影响因素进行初步研究。结果表明,AT 22所产琼胶酶为诱导酶,0 2%葡萄糖的添加对菌株产酶有抑制作用。该酶作用的最适pH值为6 0～7 0,最适温度为40℃,最适底物质量分数为1%～1 2%,Ca2+的添加对酶促反应有较强的促进作用,而Fe3+、Mn2+、Cu2+和Hg2+等有不同程度的抑制作用。
关键词：
琼胶降解菌 诱导酶 酶学性质
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘晗 刘鹏 崔铁军 白雪芳 杜昱光
对从野外土壤中分离得到的1株可降解黄原胶的兼性厌氧菌进行了鉴定。结果表明,该菌株在幼龄时期为杆菌,大小约为(0.4~0.6)μm×(1.0~2.0)μm,呈直杆形或稍弯曲杆形,但在1周以上的培养物中,只存在大小约为0.5μm×0.5μm的类球状细胞;该菌为革兰氏阴性,兼性厌氧,无运动性,不形成芽孢,能利用多种糖类基质。初步鉴定该菌为鞘氨醇单胞菌(Sph ing om onas)。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘战民 陆兆新 吕凤霞 别小妹 赵海珍
采用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤和离子交换层析等方法,对毕赤酵母工程菌发酵液中的原果胶酶进行了分离纯化,测定了其分子质量,并确定了离子交换层析法的最佳离子交换条件。结果表明,硫酸铵的饱和度为70%时,可以使原果胶酶的回收率达到71.9%,比活力为1 096.35 U/m g;经Sephadex G 75凝胶过滤,原果胶酶回收率达到57.6%,酶的比活力提高到3 762.40 U/m g;最佳离子交换条件为:0~0.5 m o l/L N aC l(缓冲体系为N oA c-HA c,pH 5.8)溶液线性洗脱、Sepharose F ast F low离子交换层析分离,在该条件下酶的比活力提高到9 ...
关键词：
毕赤酵母 原果胶酶 分离纯化
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
朱晓兰 刘百战 王维妙 高芸
研究了果胶甲酯酶、果胶裂解酶、多聚半乳糖醛酸酶、纤维素复合酶处理烟叶,细胞壁物质降解后,烟叶中果胶的含量与结构以及中性糖比例的变化。结果显示:4种生物酶可以有效降低烟叶中细胞壁类物质的含量,最高降幅可达17.8%;果胶甲酯酶和果胶裂解酶处理后的烟样,果胶的甲酯度显著降低,多聚半乳糖醛酸酶处理后果胶甲酯度略有增大;酶处理后果胶中性糖的含量均比对照样增加,但不同种类酶处理的中性糖比例有区别。果胶裂解酶和纤维素酶处理后,烟叶中性香气物质总量(不含新植二烯)分别提高了24.4%和21.9%。
关键词：
烟叶 果胶 结构 生物酶 降解
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
苗雪霞 李喜梅 王金荣 贾新成
根霉（Ｒｈｉｚｏｐｕｓｓｐ．）ＭＲ０２０菌株所产胞外植酸酶，经硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－ｃｅｌｕｌｏｓｅ离子交换层析，获得了２种植酸酶同工酶，其相对分子质量分别为３４０００和４００００，等电点分别为３．４８和３．８５。二者作用的最适温度均为５５℃；最适ｐＨ分别为２．６和４．６。Ｃａ２＋、Ｆｅ２＋和Ｍｇ２＋对酶有激活作用，Ｃｕ２＋和ＮＢＳ２＋对酶有抑制作用
关键词：
植酸酶 根霉 纯化
[期刊] 水产学报
[作者]
林娜 马德蓉 刘志东 倪玲 段蕊 张俊杰
为了探究南极磷虾致敏问题，从南极磷虾中筛选、鉴定、分离纯化其主要过敏原，并对过敏原的性质进行研究，实验通过缓冲盐溶液提取南极磷虾蛋白；采用SDS-PAGE和Western blot (WB)筛选南极磷虾过敏原；使用高效液相色谱-串联质谱鉴定过敏蛋白；通过等电点沉淀、硫酸铵盐析、阴离子交换柱层析分离纯化过敏原；采用SDS-PAGE及WB分析南极磷虾主要过敏原的耐热性及对模拟胃肠液的消化稳定性。结果显示，南极磷虾肌浆蛋白(SP)和肌原纤维蛋白(MF)电泳条带丰富且分子量范围广。南极磷虾蛋白与虾蟹过敏患者血清能发生免疫反应，其中至少有4个蛋白条带发生了阳性反应；免疫反应最强烈的蛋白分子量约为35 ku，能够被所有的患者血清识别，经液质联用鉴定此过敏蛋白为南极磷虾原肌球蛋白(TM)。硫酸铵分级盐析纯化TM的最佳饱和度为50%；分离纯化后得到了纯度较高的TM，其等电点为4.4，热稳定性好，能与虾蟹过敏患者血清发生强烈的免疫反应。TM随着模拟胃液消化时间的延长，主条带分子量逐渐降低，最后稳定在33 ku左右，并且分子量为15和12 ku的降解片段含量逐渐增多且稳定存在；这些降解条带仍然能与过敏患者血清发生较强的免疫反应。随着模拟肠液消化时间的延长，TM原始片段逐渐减少直至消失，最后完全降解成分子量更小的多肽；TM经肠液消化后其降解产物免疫活性大大降低。研究表明，南极磷虾中存在过敏原，TM是其最主要的过敏原，且具有免疫反应性。TM还具备了过敏原的一般特性，比如耐高温、耐胃蛋白酶消化、对胰蛋白酶消化部分稳定。研究结果对于阐明南极磷虾潜在致敏问题的预警和防控具有现实意义，也为南极磷虾加工利用及过敏原消减技术构建提供基础信息。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王时良 朱劼 邬敏辰
采用硫酸铵盐析、Phenyl—Sepharose CL-4B疏水层析、Sephadex G-50凝胶层析和DEAE- Sepharose fast flow阴离子交换层析等分离技术,从宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)固态培养物浸出液中分离出一种SDS—PAGE电泳纯木聚糖酶组分,其最终的收率为19．0％,纯化倍数为26．9。该木聚糖酶的相对分子质量20．7 ku,等电点pl5．0,含糖量0．42％;该酶的最适作用温度为50 C,在50 C以下较稳定;最适作用pH 5．0,在pH 5．5～9．0时较稳定;Ca2+对该酶活性有一定的激活作用,而Pb2+,Sn2+,Cu2+,Al3...
关键词：
字佐美曲霉 木聚糖酶 纯化 性质
[期刊] 淡水渔业
[作者]
郭彩华 张希春 卢珍华 郑彩梅
以鲢(Hypophthalmichthys molitrix)加工下脚料为原料,分离提纯其中的淀粉酶并对其部分性质进行了研究。结果表明经多级分离,得到了一种相对分子质量约2.15×104的淀粉酶,命名为SCIG1。SCIG1是鲢肠道淀粉酶的一种,酶活性的最适温度为30℃,最适pH5.5。
[期刊] 水产学报
[作者]
姚翠鸾 王志勇 张瑞英 韩学哲 张子剑 孔鹏 冀培丰 黄珊珊
经过CM-纤维素批量层析、Separdex G-100柱层析、DEAE-纤维素柱层析等步骤,从凡纳滨对虾肌肉组织分离得到精氨酸激酶,经SDS-PAGE检测达到电泳纯,分子量约为40kDa。对该酶的性质进行分析结果表明,精氨酸激酶的最适作用温度为55℃,当温度高于65℃时,酶活力显著下降;pH8时酶活力较高,低浓度的精氨酸对酶活力有促进作用,高浓度时表现抑制作用,而底物类似物精胺和氨基胍则对酶促反应表现出完全的抑制。NaCl,KCl对酶的活力具有促进作用,低浓度(10mmol.L-1)MgCl2对酶活力表现出激活作用,而CuCl2与MnCl2则表现出完全抑制酶活力,CaCl2与ZnCl2在低浓度...
关键词：
凡纳滨对虾 精氨酸激酶 纯化 性质
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