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[期刊] 中国农业科学
[作者]
李广君 王慧 王树迎 侯衍猛 黄丽波
【目的】探究济宁青山羊发情周期不同阶段黄体生成素受体(LHR)在输卵管不同部位的分布及其mRNA的表达差异。【方法】运用实时荧光定量RT-PCR技术,对LHR mRNA目的片段回收、克隆及序列分析,检测其表达量的差异,同时做LHR免疫组化染色。【结果】LHR阳性物质存在于发情周期各个阶段的输卵管各段,且主要分布在输卵管的黏膜上皮细胞、固有层细胞以及血管内皮细胞中。LHR mRNA在整个发情周期的输卵管中均有表达,但以输卵管漏斗部在发情期的相对表达量最高,且与其它3个阶段差异极显著(P<0.01)。输卵管壶腹部在发情后期的相对表达量最低,与其它3个时期的差异显著(P<0.05)。输卵管峡部在发情...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
蒋进 曹少先 茆达干 惠锋明
【目的】克隆豚鼠子宫黄体生成素受体(LHR)基因片段并分析其进化关系,研究豚鼠子宫LHR mRNA在发情周期不同时期的表达特性。【方法】以豚鼠子宫总RNA为模板,根据小鼠、大鼠、猪LHR保守区设计引物,RT-PCR扩增LHR基因片段。筛选阳性克隆测序,采用DNAMAN软件分析比对同源性。以β-actin为分子内参,采用优化的半定量RT-PCR技术,测定豚鼠发情周期不同时期的子宫组织LHR mRNA表达量。【结果】测序得到686 bp的剪接变异体1和缺失75 bp 4号外显子的剪接变异体2。686 bp序列与人类LHR mRNA序列同源性为83.8%,与牛、猪及绵羊LHR mRNA序列同源性分别...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王维民 胡庭溪 李发弟 马友记 樊红樱 潘香羽
【目的】分离鉴定绵羊视黄酸受体-γ(Retinoic acid receptor gamma,RARG)基因,分析该基因的分子特征,研究其在发情周期不同阶段卵巢中的表达差异。【方法】选取年龄和体况相近、健康的甘肃高山细毛羊周岁母羊8只,通过同期发情处理,根据卵巢生理状态,将其分为两组:黄体期组和卵泡期组,各4只,屠宰后,采集卵巢组织,以周岁母羊卵巢组织RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增绵羊RARG基因并克隆到pMD18-T载体中进行测序验证。利用ORF Finder和DNAStar等生物信息学软件分析绵羊RARG基因的理化性质、同源性和预测结构域和功能。利用Q-PCR技术,检测绵羊RARG...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王璐 刘红改 于得水 李晶 刘慧 赵慧英
【目的】探讨Ｇ蛋白耦联雌激素受体（Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｅｓｔｒｏＧｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｇｐｅｒ）激动剂对卵巢表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｅＧｆｒ）表达的影响，为阐明Ｇｐｅｒ和ｅＧｆｒ在卵巢功能维持中的作用奠定基础。【方法】取间情期小鼠，将其分为４０，２００，１ ０００ｎＧ／只Ｇ－１腹腔注射组和对照组（腹腔注射等体积生理盐水），每组２０只，各组小鼠进行相应的处理。注射Ｇ－１后，依次取发情前期、发情期、发情后期和间情期小鼠各５只，脱颈处死，迅速取出卵巢，采用免疫组织化学ｓｐ法和实时定量ｒｔ－ｐｃｒ法，研究不同剂量Ｇｐｅｒ激．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
聂彬 韩燕国 黄华榕 姜勋平 刘耘 刘桂琼
母鸡贮精腺位于输卵管的子宫阴道交接部和伞部，为探究鸡碳酸酐酶４基因在输卵管不同部位的表达情况，以探明该基因是否在母鸡贮精腺部位高表达，为进一步研究禽类贮精腺的贮精机理奠定基础。参考鸡ＣＡ ＩＶ基因序列，在其保守区设计特异性引物，并以鸡β－ＡＣｔＩｎ基因为内参基因建立荧光定量方法，基于荧光定量分析ＣＡ ＩＶ基因在鸡输卵管伞部、膨大部、峡部、子宫部、子宫阴道交接部和阴道部的表达。结果表明，子宫阴道交接部的ＣＡ ＩＶ基因表达量最高，伞部次之，在膨大部、峡部、子宫部和阴道部表达量较低。ＣＡ ＩＶ基因在子宫阴道交接部的表达量显著高于在伞部、膨大部、峡部、子宫部和阴道部的表达（Ｐ＜０．０５），在伞部的表达．．．
关键词：
鸡 碳酸酐酶4 贮精腺 实时定量PCR
[期刊] 华北农学报
[作者]
李营营 张昊堃 贾皓帆 郭婧瑶 杨喜喜 王志亮 李明娜 王欣荣
旨在初探BMF基因在小尾寒羊卵泡发育过程中的生物学功能，为将来深入探索其调控机理提供理论依据。对小尾寒羊实施同期发情，采用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot, WB)及免疫荧光染色(IF)方法检测BMF基因及其编码蛋白在不同生理阶段卵巢中的表达量；随后分离不同直径的卵泡，分析目的基因在大、中、小卵泡中的表达差异。结果显示，BMF mRNA在撤栓后42 h卵巢中的表达量显著高于撤栓后18 h(P<0.05),其编码蛋白表达结果与mRNA基本一致；BMF蛋白主要表达于卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞中；进一步分离卵泡，发现BMF基因及其编码蛋白表达量均在中卵泡中显著高于大卵泡和小卵泡(P<0.05)。以上结果表明，BMF基因可能参与卵巢周期性活动，在卵泡发育过程中发挥重要作用。
关键词：
小尾寒羊 BMF 卵泡 卵巢 繁殖
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
宁红梅 雷治海 张文龙 苏娟 贾翠萍 宋捷 贾晓庆
选取苏钟种母猪16头,在第2个发情期后,按发情前期、发情期、发情后期和间情期随机分成4组。用RT-PCR检测苏钟猪发情周期不同时期preproorexin和orexin 1受体(OX1R) m RNA在下丘脑-垂体-卵巢轴中的表达。结果显示:发情周期不同时期preproorexin m RNA在下丘脑、垂体和卵巢中变化趋势一致,preproorexin m RNA在猪的发情前期表达最高,随后其表达量开始下降,在发情后期其表达最少,在间情期时又开始上升。下丘脑中OX1R m RNA在发情前期开始上升,在发情后期达到最高,随后在间情期又开始下降。垂体和卵巢中OX1 R m RNA的变化与下丘脑中O...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吴庭才 李银聚 张春杰 程相朝
将克隆并测序的鸡卵清蛋白基因5′端调控序列和鸡IL-2基因cDNA,以串联方式置于真核表达载体pcDNA3的CM V启动子下游,构建了鸡输卵管定位表达载体pcDNA3-OVP-IL 2。将真核表达载体pcDNA3-IL 2和构建的输卵管定位表达载体pcDNA3-OVP-IL 2分别转染鸡输卵管上皮细胞,激素诱导72 h后,用淋巴细胞转化试验检测细胞培养液中IL-2的表达水平及生物学活性。结果显示,转染细胞均可表达IL-2,且所表达的IL-2有促进T淋巴细胞转化和淋巴母细胞成熟的活性;转染pcDNA3-OVP-IL 2的输卵管上皮细胞表达产物在1∶256稀释水平下仍具有促进T淋巴细胞转化和淋巴母...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
阿依木古丽 蔡勇 曹忻 龙玲 陈士恩 余四九 崔燕
【目的】观察发情周期不同阶段牦牛子宫中ERα、PR mRNA和蛋白的表达变化。【方法】采用实时荧光定量PCR技术和免疫组织化学SP法分别对发情期、发情后期、间情期和发情前期牦牛子宫中ERα和PR mRNA及ERα和PR蛋白的表达特点进行了研究。【结果】发情周期不同阶段牦牛子宫内膜和肌层中均有ERαmRNA和PR mRNA的表达,ERα和PR蛋白免疫阳性产物表达于子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞、基质细胞、血管内皮细胞和子宫肌层平滑肌细胞中;子宫内膜中ERαmRNA和PR mRNA在发情后期表达最强,间情期显著下降(P<0.05),发情前期回升;ERα和PR蛋白表达在发情期最强而间情期最弱;子宫肌层中...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙健红 赵慧英 苏正元 尹宝英 张涌
应用免疫组织化学SP法检测γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)在不同生殖周期奶山羊卵巢中的表达情况,探讨IFN-γ的变化规律及其与生殖的关系。结果显示,在间情期三级卵泡颗粒细胞胞膜、发情期三级卵泡和成熟卵泡颗粒细胞、妊娠期卵泡颗粒细胞、妊娠7周粒黄体细胞、妊娠12,16和20周膜黄体细胞胞核中均有IFN-γ的表达;在三级卵泡和成熟卵泡的卵泡液中也有IFN-γ的表达;妊娠12,16和20周粒黄体细胞上IFN-γ表达量很低。IFN-γ可能在不同类型的细胞上发挥着不同的作用。
关键词：
山羊 IFN-γ 卵巢 颗粒细胞 黄体
[期刊] 中国农业科学
[作者]
贾存灵 李宁 魏泽辉 朱晓萍 刘海英 贾志海
目的根据小尾寒羊BMPRIB突变位点进行基因分型。研究发情期小尾寒羊BMPRIB基因型(BB、AB和AA)与FSHR和LHRmRNA表达量的关系。方法利用半定量PCR技术。结果在发情期BB型右侧卵巢FSHR的mRNA水平(1.14±0.11)显著高于AA(0.44±0.11)和AB(0.36±0.08)型(P<0.01),但左侧卵巢在基因型间无显著性差异;BB型右侧卵巢LHR的mRNA水平(0.42±0.02)也显著高于AA(0.23±0.02)和AB(0.25±0.04)型(P<0.01),左侧卵巢各基因型间无显著性差异。结论FSHR和LHR的mRNA的高表达量可能是引起小尾寒羊较高的产羔数...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
包图雅 曹贵方 凃勇 杜晨光
【目的】探讨17β-雌二醇(E2)上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2表达的可能信号通路。【方法】分离培养绵羊输卵管上皮细胞,将第2代输卵管上皮细胞分为E2(10-8 mol/L)组、雌激素受体拮抗剂ICI182780(10-7mol/L)组、PKA阻断剂KT-5720(1μmol/L)组、PKC阻断剂H-7(50μmol/L)组、NF-κB阻断剂PDTC(50μmol/L)组及空白对照(Control)组,在不同阻断剂组加入各自阻断剂干预绵羊输卵管上皮细胞1h后,在各阻断剂组和E2组中再加入10-8 mol/L 17β-雌二醇培养6h,然后采用实时荧光定量RT-PCR方法检测各组SBD-2mRN...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
夏荣欣 李悦 刘婷婷 孙宣 钟黄欣 郭文晴 曾诚 张国敏
[目的]本实验旨在探究神经介素B（neuromedin B， NMB）及其受体[神经介素B受体（neuromedin B receptor， NMBR）、胃泌素释放肽受体（gastrin releasing peptide receptor， GRPR）和蛙皮素受体（bombesin receptor subtype 3， BRS3）]在山羊不同发育阶段睾丸组织中的差异表达，为解析哺乳动物睾丸发育及功能调节的机制提供参考。[方法]选取系谱清晰和体况良好的雄性山羊12只（3和9月龄，各6只）进行阉割并采集睾丸组织，在NMB及其受体基因克隆与序列分析的基础上，采用免疫组化技术检测NMB及其受体在睾丸组织中的表达定位，利用RT-qPCR和western blot检测NMB及其受体在不同发育阶段山羊睾丸组织中的表达变化。[结果]NMB及其受体基因与绵羊和牛的进化关系最近，NMB及其受体基因编码区的核苷酸序列与牛和绵羊的同源性达96%以上，结构分析发现NMBR、GRPR和BRS3均属于七次跨膜受体。NMB及其受体在3月龄和9月龄山羊睾丸组织中广泛表达，其中在间质细胞、肌样细胞和精子细胞中呈高表达。与3月龄山羊相比，9月龄山羊睾丸组织中NMB与GRPR的mRNA和蛋白表达量显著降低（P<0.05），而NMBR与BRS3的mRNA和蛋白表达量显著增高（P<0.05）。[结论]NMB及其受体可能参与山羊睾丸发育的调节，丰富了家畜生殖生理学的研究。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
曾诚 夏荣欣 李悦 刘婷婷 孙宣 钟黄欣 郭文晴 张国敏
[目的]本试验旨在探究神经介素B(NMB)及其受体NMBR[还包括胃泌素释放肽受体(GRPR)和蛙皮素受体(BRS3)]在山羊不同发育阶段睾丸组织中的差异表达，为解析哺乳动物睾丸发育及功能调节机制提供参考。[方法]选取系谱清晰和体况良好的雄性山羊12只(3月龄和9月龄，各6只)进行阉割并采集睾丸组织，在克隆NMB及其受体基因与分析序列的基础上，采用免疫组化技术检测NMB及其受体在睾丸组织中的表达定位，利用RT-qPCR和Western blot检测NMB及其受体在不同发育阶段山羊睾丸组织中的表达变化。[结果]NMB及其受体基因与绵羊和牛的进化关系最近，NMB及其受体基因编码区的核苷酸序列与牛和绵羊的同源性达96%以上，结构分析发现NMBR、GRPR和BRS3均属于7次跨膜受体。NMB及其受体在3月龄和9月龄山羊睾丸组织中广泛表达，其中在间质细胞、肌样细胞和精子细胞中呈高表达。与3月龄山羊相比，9月龄山羊睾丸组织中NMB与GRPR的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05),而NMBR与BRS3的mRNA和蛋白表达量显著增加(P<0.05)。[结论]NMB及其受体可能参与山羊睾丸发育的调节。
[期刊] 华北农学报
[作者]
高爱琴 李宁 李金泉 张燕军
为深入研究成纤维细胞生长因子5对毛囊生长发育的生物学功能提供理论依据。在10月左右和1月左右,即皮肤毛囊处于生长旺期和退行期时采集了12只内蒙古阿尔巴斯白绒山羊皮样,利用TRIZOL试剂盒提取皮肤总RNA(一步法),利用RT-PCR方法检测FGF5基因在绒山羊绒毛周期性生长不同阶段皮肤中的表达分布情况,试验结果表明,FGF5基因mRNA在绒山羊毛囊生长旺期和退行期均有表达,却只得到了一种剪切形式的表达,经测序是长片段,而缺失外显子2的短片段形式没有检测到。
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