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[期刊] 淡水渔业
[作者]
孙敬锋 冼健安 张铁军 王安利
应用流式细胞术对墨吉对虾(Penaeus merguiensis)、南美白对虾(Penaeus vannamei)、斑节对虾(Penaeus monodon)三种对虾的血细胞类型进行了比较研究。根据其血细胞的前向角散射光(FSC)和侧向角散射光(SSC)特征的不同将血细胞分群,FSC和SSC二维图分析表明三种对虾的血细胞都可分为三个亚群:透明细胞、小颗粒细胞、大颗粒细胞。同时还对各种类型血细胞所占比例进行了比较研究,发现各个亚群血细胞所占组成比例在三种对虾之间具有相似性。其比例均为:小颗粒细胞最多,约为45%~49%;透明细胞次之,约为26%~28%;大颗粒细胞最少,约为10%~12%。
关键词：
流式细胞术 对虾 血细胞 分群
[期刊] 淡水渔业
[作者]
冼健安 王安利 苗玉涛
应用流式细胞术(FCM)对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)血细胞的分类、活性和免疫功能进行了研究。结果显示:血细胞可分为透明细胞、小颗粒细胞和大颗粒细胞三个亚群,组成比例分别为(26.25±5.29)%、(51.44±7.02)%和(11.20±1.82)%;螯虾血细胞的平均总凋亡率约为3.12%;血细胞对荧光大肠杆菌的吞噬活力显著(P<0.05)高于荧光微球,吞噬率分别为17.04%和14.57%;血细胞在自然生理状态下含有一定量的活性氧,其在两类颗粒细胞的含量显著(P<0.05)高于透明细胞,在大颗粒细胞中最高。结果表明,FCM能较好地应用于虾类的血细胞分类和功能研究。
[期刊] 水产学报
[作者]
胡锦丽 任星潮 刘逸尘 孙金生 耿绪云 张亦陈
为了更精确地对甲壳动物血细胞进行快速分类和功能分析,本研究以中华绒螯蟹为例,依据其血细胞内具有颗粒结构的特征,与常规显微观察对比,探讨了一种基于图像流式细胞仪的血细胞自动化分类新方法,并测量了体质量为(10±3) g的中华绒螯蟹的血细胞对直径1μm微球的吞噬情况。结果显示,两种方法都可将中华绒螯蟹血细胞分为4个类群。显微镜观察分类基于胞内可见颗粒,但由于缺乏精细的量化标准,批次样品的人工辨识结果波动较大;而图像流式方法以胞内全部颗粒结构为对象,利用高精度检测模块测量,结果更准确、客观,而且通量高、重复性好。测量结果显示,中华绒螯蟹血淋巴中无颗粒、小颗粒、中颗粒及大颗粒细胞占比分别为40.62%±2.65%、36.68%±6.84%、7.80%±1.16%和16.51%±5.60%,依据测量的颗粒特征区分的4个类群界限清晰,缺乏过渡样点,提示各类细胞之间可能没有相互转化。进一步的活体微球吞噬实验证实,中华绒螯蟹的4类血细胞都具有吞噬功能,并以无颗粒细胞为主要吞噬类群;吞噬微球的细胞比例在注射后6 h内呈钟型曲线变化,4 h可达峰值(5.69%±0.44%),表明中华绒螯蟹血细胞能高效清除血淋巴中的异物。研究表明,图像流式细胞仪适合于中华绒螯蟹的血细胞分类分析和功能研究,本研究结果为同类研究提供了重要参考,将有助于更全面了解甲壳动物血细胞的功能。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
黄雄 郭英华 田林 李全梓 岳志强
以买麻藤(Gnetum montanum)为内参,测定5种常用裂解液(Tris·MgCl_2、LB01、WPB、Otto’s、Galbraith’s)对桫椤(Alsophila spinulosa)细胞核的裂解效果,并通过比较桫椤和买麻藤流式细胞仪测定的荧光峰值,计算出桫椤的基因组大小。结果表明:5种裂解液中,WPB为桫椤最佳裂解液;桫椤基因组大小为6 003.25Mb,即2C DNA含量为6.138 pg。
[期刊] 实验技术与管理
[作者]
朴莹 江寅申 刘衍朋 余华海 高小炎
发现一种三级胺氮氧化物聚合物胶束（OPDEA-PS）具有革兰氏阳性细菌（G+）特异性粘附且对红细胞或其他血液成分粘附相对较弱的特性。利用这一特性研究了一种基于流式细胞术的快速血液细菌分型检测方法。结果显示，将不同比例的金黄色葡萄球菌（G+）和大肠埃希菌（G–）或肺炎链球菌（G+）和铜绿假单胞菌（G–）与血液混合，加入终浓度为0.01 mg/mL的~(Cy5)OPDEA-PS胶束，孵育10 min后用流式细胞术或平板计数法检测，得到流式检测准确率高于90%，平板计数法准确率低于80%。相比而言，流式检测法具有操作简单、快速高效、准确率高的优势。这种用流式细胞术快速分辨细菌革兰氏分型的检测方法将有助于临床上菌血症等急性血液细菌感染性疾病的细菌类型初判，达到及时诊断和治疗的目的。
关键词：
流式细胞术 细菌 血液感染 快速检测
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
武荣花 葛蓓蓓 王茂良 周燕 冯慧
以１８个中国古老月季为试材，以欧芹作为标准植物，采用２种不同的样本处理方法对其基因组大小进行测定，同时利用染色体计数法补充３个存在争议或尚未见报道的中国古老月季品种的倍性，为其基因组大小的确定提供必需的数据支持。结果表明：１）中国古老月季品种‘屏东月季’为二倍体（２ｎ＝２ｘ＝１４），‘桔囊’和‘牡丹月季’为四倍体（２ｎ＝４ｘ＝２８）。２）２种样本处理方法通过单因素方差分析发现，６个品种间差异显著，１２个品种间差异不显著。故２种处理方法均可用于基因组大小的检测，但方法Ⅱ准确度高，受外界影响小，更适宜基因组大小的检测。方法Ⅰ操作简便，可用于大规模的倍性检测。３）１８个中国古老月季品种（含二倍体、三．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
汪开毓 耿毅 黄小丽
采用含200 mg.kg-1喹乙醇的饲料连续饲喂鲤鱼(Cyprinus carpioLinnaeus),分别于饲喂后的第7天、14天、20天、25天和第30天各剖杀4尾鱼,取肝组织,用流式细胞仪检测其细胞凋亡程度。结果显示,在肝细胞DNA直方图中,于G1峰之前出现一AP峰,且AP峰峰值随染毒时间的延长而升高,肝细胞在不同时期的凋亡率与染毒时间呈正相关。在经喹乙醇染毒第7天,鲤肝细胞的凋亡率平均值为2.05%,而对照组为1.70%,两组间差异不显著(P>0.05);在第14天,可见轻微的AP峰;在第20天,凋亡率达到9.49%,凋亡峰已较明显;在第25天时的AP峰比第14天时峰值明显升高;在染毒...
关键词：
流式细胞术 喹乙醇 细胞凋亡
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王益兵 姚军虎 覃定奎 李朝云 杨小军
【目的】建立以流式细胞术结合Fluo-3-AM测定肉仔鸡肠道B淋巴细胞胞内Ca2+浓度的方法。【方法】分离培养21 d肉仔鸡肠道B淋巴细胞,以不同质量浓度(0,5,10,15,20μg/mL)脂多糖(LPS)刺激B淋巴细胞,测定B淋巴细胞刺激指数(SI),确定B淋巴细胞增殖的最适LPS质量浓度,建立肉仔鸡B淋巴细胞体外增殖试验模型。以最佳质量浓度LPS刺激培养72 h的肉仔鸡肠道B淋巴细胞为研究对象,应用Fluo-3-AM作为钙指示剂,建立肉仔鸡肠道B淋巴细胞胞内Ca2+浓度的流式细胞术测定方法,并用该测定方法探讨不同质量浓度(0,20,40,60,80μg/mL)二十碳五烯酸(EPA)对肉仔...
[期刊] 清华大学学报(自然科学版)
[作者]
赵精晶 尤政
流式细胞仪是用于高通量细胞分析和分选的高端生命科学仪器,被广泛应用于科学研究和临床诊断。最新的一个发展方向是以微流体芯片为核心的高集成度、微体积、全封闭、零交叉污染的微流体流式细胞仪。该文针对微流体流式细胞仪的三维(3-D)样本聚焦、光斑整形和片上分选等3项关键技术开展了研究。3-D流体动力聚焦微流体芯片能够在每秒数米的高流速下将样本流聚焦在流道中心,聚焦后的样本流边长仅为10μm量级。经设计的二元光学器件可将激光光斑整形为矩形准平顶光斑,比传统流式所使用的椭圆形Gauss光斑,矩形平顶光斑具有更均一的能量分布。采用电火花空化微气泡,利用空泡膨胀产生的射流实现高精度的单细胞片上分选。将整合了上述技术的微流体流式细胞仪应用于标准荧光微球的分析测试,综合性能达到或接近于现有的大型传统流式细胞仪。
[期刊] 实验技术与管理
[作者]
沈筱芸 郭杏 黎远东 陈萍 王琦 冯雁
流式细胞技术是医学分子与细胞生物学研究领域中重要的检测技术之一。根据流式细胞仪检测教学与科研工作的要求,该文设计了一个应用流式细胞术测定金花茶水提物作用功效的综合类实验项目。通过该实验可以使学生掌握体外细胞扩增和培养技术,以及使用普通倒置显微镜观察评估不同浓度的金花茶水提物对人外周血T淋巴细胞的刺激增殖功效,同时学会采用流式细胞术检测和分析金花茶水提取物是否具有活化T淋巴细胞作用的技术方法,有助于学生更好地理解和掌握流式细胞术的基本原理和实际应用。
关键词：
流式细胞术 金花茶 天然提取物 淋巴细胞
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王宝杰 王雷
用ZymosanA对中国对虾(Penaeuschinensis)血细胞进行体外刺激,用NBT还原法测定血细胞吞噬活动中产生O-2的产生;不同浓度2的过程。结果表明,中国对虾血细胞在经刺激诱导的吞噬活动中有明显的呼吸爆发和O-的ZymosanA对血细胞产生O-2的影响不同。ZymosanA在0.25～1.0mg/mL时随质量浓度的增加,产生O-2的量也增加,但当ZymosanA质量浓度继续增加到1.5和2.0mg/mL时,产生O-2的量反而下降。用同一浓度的ZymosanA对不同密度血细胞进行刺激产生O-2的强度也不同,随着密度的增加,血细胞产生O-2的量增加。SOD、NEM和碘代乙酰胺(Iod...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李吉涛 李健 陈萍 刘萍 何玉英 王清印
采用SMART(Switching mechanism at5′end of RNA transcript)技术构建了中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)血细胞和肌肉组织全长cDNA文库。以中国明对虾"黄海1号"血细胞和肌肉组织为材料,Trizol法提取总RNA,磁珠法纯化mRNA后,用SMART cDNA合成试剂盒合成双链cDNA。双链cDNA经SfiⅠ酶切和CHROMA SPINTM-400过柱分级分离后,与λTriplEx2载体两臂进行连接,随后进行λ噬菌体体外包装反应,构建血细胞和肌肉全长cDNA文库。肌肉组织原始文库滴度为0.77×106pfu/mL,血细胞...
关键词：
中国明对虾 血细胞 肌肉 cDNA文库
[期刊] 中国水产科学
[作者]
姜国建 于仁诚 王云峰 颜天 周名江
通过硝基蓝四唑(NBT)还原法和血细胞形态法两种一氧化氮合成酶的鉴定方法,以日本对虾(Penaeusjaponicus)作为研究对象,对日本对虾血细胞中的一氧化氮合成酶进行初步鉴定,并优化硝基蓝四唑(NBT)还原法测定对虾血细胞中一氧化氮合成酶的实验条件。结果显示,当L-精氨酸浓度为2.5mmol/L,脂多糖(LPS)质量浓度为100μg/mL,Ca2+浓度为2.5mmol/L时,NBT法测定一氧化氮合成酶活力的结果最佳。同时,还建立了两种针对一氧化氮合成酶活力的分析方法—L-瓜氨酸分析法和亚硝酸盐分析法,并对其测定条件进行了优化。结果表明,对虾血细胞在4℃下与L-精氨酸和LPS孵育8h后测定...
[期刊] 水产学报
[作者]
陆剑锋 万全 吴旭干 杨筱珍 赵维信 成永旭
甲壳动物血细胞在宿主免疫应答中发挥着重要的作用,其中包括识别、吞噬、包囊黑色素形成、胞毒作用和胞间的信息传递。不同类型的血细胞其防御机制不同,因此血细胞的形态和分类是甲壳动物免疫学的基础。通常情况,十足目甲壳动物的血细胞类型主要依据细胞质中颗粒物质的有无和颗粒物质的相对大小进行分类。研究采用Giemsa染色法、H.E染色法和电子显微技术法对克氏原螯虾血细胞进行分类,观察到3类血细胞:透明细胞、小颗粒细胞、大颗粒细胞,它们所占的比例分别为19.9%,46.1%,34.1%。在电镜下,这3类血细胞的超微结构极为容易辨识。透明细胞通常在3类细胞中最小,核质(N/C)比最高,但无明显的颗粒;相比之下,...
关键词：
克氏原螯虾 血细胞 免疫 包囊
[期刊] 水产学报
[作者]
王颖 王文琪 程顺峰
为研究虾蟹类甲壳动物血细胞膜表面是否具有相同的抗原决定簇及共同抗原表位的生物学特征,采用制备的抗三疣梭子蟹颗粒血细胞单克隆抗体,通过激光共聚焦扫描显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)、免疫印迹(Western blot)和流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)等多种方法,测定了7种甲壳类动物(凡纳滨对虾、中国明对虾、刀额新对虾、口虾蛄、中华绒螯蟹、日本板蟹及美洲黄道蟹)颗粒血细胞及透明血细胞与三疣梭子蟹颗粒血细胞单克隆抗体发生特异性结合的抗原表位。LSCM可观察到该株抗三疣梭子蟹颗粒血细胞单克隆抗体与中华绒螯蟹和日本板蟹血细胞交叉...
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