干扰素刺激基因15(ISG15,interferon-stimulated gene 15)是一种泛素样蛋白，在调节机体天然免疫和抗病毒感染过程中发挥重要作用。ISG15在针对流感病毒、乙型肝炎病毒、HIV病毒、埃博拉病毒、SARS病毒、中东呼吸综合征冠状病毒、巨细胞病毒等病毒的抗病毒研究已有文献报道。除此以外，最新的研究表明ISG15分子会在新型冠状病毒的木瓜蛋白酶样蛋白酶的作用下失活，从而抑制其抗病毒功能。因此抑制新型冠状病毒木瓜蛋白酶样蛋白酶，除能直接阻断病毒的生命周期、抑制病毒在体内的复制以外，同时也会提升ISG15分子水平，继而间接提升机体免疫能力，降低感染风险。该文介绍ISG15抗新冠病毒的过程，重点介绍ISG15抗冠状病毒作用的特异性，此外，总结新冠病毒通过木瓜蛋白酶样蛋白酶阻断ISG15介导的天然免疫实现免疫逃避的机制，并罗列了潜在的木瓜蛋白酶样蛋白酶的抑制剂。本文从ISG15抗病毒天然免疫的分子机制角度，总结抗SARS-CoV-2药物的最新进展，并对相关药物的研发前景进行展望。

【目的】制备猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白及其多克隆抗体,建立检测PDCoV N蛋白抗体的间接ELISA方法。【方法】从PDCoV CH-01毒株中扩增N全基因,克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-PDCoV-N,转入BL21(DE3),用IPTG诱导表达重组N蛋白,并对该蛋白的反应原性进行鉴定。诱导表达的N蛋白经镍柱纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。同时用镍柱纯化后的N蛋白作为包被抗原,建立PDCoV的间接ELISA检测方法,对该方法的特异性、重复性和稳定性进行检测,并利用该方法对河南部分地区猪场送检的165份临床猪血清样本进行PDCoV抗体检测。【结果】成功克隆了1 026 bp的N基因,构建了重组表达载体pET-28a-PDCoV-N,经诱导表达后获得了重组N蛋白,其相对分子质量约42.9 ku,Western blot分析表明所表达的蛋白可与抗PDCoV全病毒猪阳性血清发生反应。制备的PDCoV N蛋白多克隆抗体经Western blot检测表明,该抗体具有特异性;间接免疫荧光试验测定该多克隆抗体在ST细胞上的最佳使用稀释度为1∶200。以N蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA方法,确定最佳的反应条件如下:抗原2μg/mL在4℃过夜包被,10 g/L BSA在37℃下封闭2 h,血清(1∶80稀释)37℃孵育1 h,酶标二抗(1∶6 000稀释)37℃孵育1 h,TMB在37℃下显色15 min;待检血清OD_(450)值≥0.272判定为阳性。特异性试验结果显示,该包被抗原与其他猪常见病毒的阳性血清均无交叉反应,批内和批间重复试验变异系数均小于5%。用间接ELISA法对来自河南不同地区的165份血清样本进行检测,结果表明各地样本PDCoV抗体阳性率平均为53.94%。【结论】成功表达了PDCoV N蛋白,制备了其多克隆抗体,建立了PDCoV间接ELISA检测方法,该方法具有良好的特异性、重复性和稳定性,可用于临床猪血清中PDCoV抗体的检测。

将SARS冠状病毒(SARS-CoV)表面的主要结构蛋白刺突蛋白S144-643的基因片段(nt430-nt1929)克隆入表达质粒pET-28b中,并在大肠杆菌中表达。S144-643蛋白分子质量为55 ku左右,以包涵体形式存在于细菌中。ELISA及Western blot证明,S144-643可以与SARS康复病人的阳性血清发生特异性反应,免疫新西兰大白兔可以诱发产生较高水平的特异性抗体,因而证明原核表达的S144-643具有良好的免疫原性。

　根据GenBank中报道的CCVInsavc 1株核蛋白基因(M)序列,用特异性引物对分离的CCVV1野毒株进行了RT PCR扩增,将扩增得到的PCR片段纯化后与pGEM T连接得到重组质粒pTM,并进行了核苷酸序列测定。结果表明,该基因全长为789bp,编码263个氨基酸,其中前17个氨基酸为信号肽。与CCV标准毒株Insavc 1M基因相比,两者核苷酸的同源性为92.1%;推导的氨基酸序列同源性为90.9%,差异主要发生在该蛋白的N端前1/3区域内。在推导的M蛋白氨基酸序列中,发现了3个明显的疏水区,提示该蛋白可能是一个反复跨膜的蛋白;在N端15～17,38～40,234～236位氨基酸...

以纯化的牛冠状病毒(BCv)免疫 BALB/c 小鼠,取其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞 SP2/0融合,用间接 ELISA 筛选,获得了4株分泌 BCV 特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞:C_(12)、C_(31)、C_(42)和C_(54).它们系针对 BCV 不同表面抗原决定簇的.用 C_(12)和 C_(31)两株细胞制备的腹水混合包被聚苯乙烯微孔板,建立了以生物素标记的兔抗 BCV IgG 和酶标亲和素介导的 BAS—ELISA,并对 BCV 标准毒株和临床犊牛腹泻粪样作了检测.

新型冠状病毒感染疫情所引发的健康和经济危机，加重了之前业已存在的全球教育危机。联合国及相关发展机构一直站在抗击新型冠状病毒感染疫情和全球治理的前沿，倡导将教育恢复作为摆脱新型冠状病毒感染疫情、实现经济复苏的关键对策，呼吁所有国家及合作伙伴为人类和地球的未来而投资于教育。然而，许多发展中国家尚未将教育列入财政支持优先事项，公共教育支出在政府预算中的份额下降，教育在应对危机的财政措施中没有受到重视，教育援助在官方发展援助总额中的占比下降。新型冠状病毒感染疫情期间，我国在经济下行压力加大、财政收支矛盾突出的情况下，仍然强调对教育的财政投入“只增不减”。在后疫情时代，我国加快建设教育强国，有必要参考借鉴国际社会关于教育发展的先进理念与政策倡议，坚持教育优先发展，创新教育融资机制，公平合理分配教育经费，提供国际教育公共产品，为全球教育发展贡献中国力量。

【目的】本文研究Ⅹ蛋白（Protein Ⅹ，pⅩ）在血清4型禽腺病毒（Fowl Adenovirus Serotype 4，FAdV-4）感染LMH细胞后对Toll样受体产生的影响，为进一步阐释FAdV-4感染致病机制和免疫应答机理提供数据参考。【方法】通过PCR扩增X基因编码区序列，与pEF1α-HA载体连接，构建重组表达质粒pEF1α- HA-X。将重组表达质粒pEF1α-HA-X和空质粒pEF1α-HA分别转染LMH细胞，24 h后用FAdV-4感染转染后的细胞，2个处理组分别标记为pEF1α-HA-X+和pEF1α-HA+；同时设立转染后未加病毒刺激组作对照，分别标记为pEF1α-HA-X-和pEF1α-HA-。用Western-blotting和间接免疫荧光验证重组蛋白表达情况，实时荧光定量PCR检测Toll样受体（chTLR1a、chTLR1b、chTLR2a、chTLR2b、chTLR3、chTLR4、chTLR5、chTLR7、chTLR15、chTLR21）和效应因子（IFN-α、IFN-β、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-15）mRNA转录水平的变化。【结果】X基因开放阅读框（ORF）全长540 bp，共编码179个氨基酸残基。Western-blotting结果显示重组X蛋白与HA标签小鼠源单克隆抗体反应，在27 kD处得到单一条带，间接免疫荧光结果可见绿色荧光。实时荧光定量PCR检测发现，与pEF1α-HA-组相比较，pEF1α-HA-X-组chTLR1a和chTLR1b的mRNA转录水平极显著上调（P<0.01，下同），分别为pEF1α-HA-组的9.76和12.34倍；chTLR2a、chTLR2b、chTLR5、chTLR7、chTLR15和chTLR21的mRNA转录水平显著上调（P<0.05，下同)。添加病毒感染后，与pEF1α-HA-X-组相比，pEF1α-HA-X+组chTLR1a和chTLR1b的mRNA转录水平极显著下调，分别下调60%和66.7%；chTLR2a、chTLR2b和chTLR3的mRNA转录水平显著提高，分别上调2.91、2.01和1.47倍（P<0.05），其他chTLRs的mRNA转录水平下调，但差异不显著（P>0.05）；同时，pEF1α-HA-X+组效应因子IFN-α、IFN-β、IL-1β的mRNA转录水平比pEF1α-HA-X-组显著上调，IL-8的mRNA转录水平极显著下调。【结论】在LMH细胞过表达pX并被FAdV-4感染后，pX能激活宿主免疫应答系统，Toll样受体（chTLR2a、chTLR2b和chTLR3）和其效应因子（IFN-α、IFN-β和IL-1β）的mRNA转录水平显著上调以抑制病毒复制，说明pX具备激活宿主细胞天然免疫系统的功能。

通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了猪瘟病毒(CSFV)的E0、E2和E012基因并进行了克隆与鉴定。构建了真核表达载体pcDNA-E0、pcDNA-E2和pcDNA-E012,通过与鼠白血病病毒(MuLV)假型病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111瞬时共转染人胚肾细胞(293T),48h后收集假型病毒上清液,将假型病毒上清液超速离心后用抗CSFV的多抗进行Western-blot检测。结果证明E012蛋白能够在假型病毒颗粒表面表达,说明E012能够整合到此病毒粒子表面;用其感染多种宿主细胞,48h后检测发现在猪肾细胞(SK6,PK15)和猪睾丸细胞(ST)上,标记基因...

RNA分子上存在着多种修饰方式,如5-甲基胞嘧啶(m~5C)、6-甲基腺嘌呤(m~6A)、1-甲基腺嘌呤(m~1A)和假尿嘧啶(Ψ)等。而其中RNA分子腺嘌呤第6位氮原子上发生的甲基化修饰,即m~6A(N~6-methyladenosine)是一种非常重要的表观遗传修饰方式,在干细胞命运决定、肌肉发育、精子形成以及肿瘤发生中都起着重要的作用。在40多年前已经发现病毒RNA中含有m~6A修饰,m~6A功能的行使主要在甲基转移酶(编码器"Writers")、去甲基化酶(消码器"Erasers")和结合蛋白(读码器"Readers")的参与下进行,他们共同调控m~6A的发生。不同种类的病毒,在不同的细胞和组织中产生不同的m~6A修饰。而m~6A修饰对病毒和宿主RNA的调控机制不尽相同。m~6A修饰对宿主的影响在一定程度上与宿主的免疫系统有关。MeRIP-Northern blot和MeRIP-seq等技术的发展帮助加深对该领域的研究。本文综述了m~6A甲基化在甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)、人类免疫缺陷病毒1型(Human immunodeficiency virus1,HIV-1)、猴空泡病毒(Simian vacuolating virus40/Simian virus 40,SV40)、卡波西氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)、丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)、乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)、肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)、呼吸道合胞病毒(Rous sarcoma virus,RSV)和植物病毒感染中的作用,探讨该甲基化修饰在病毒与宿主相互作用中扮演的重要角色。

［目的］鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）感染会引起鸡的免疫抑制，给养禽业带来巨大危害。本文旨在探讨鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）蛋白ＶＰ４和ＶＰ５在病毒感染引起的免疫抑制中的作用。［方法］构建ＶＰ４和ＶＰ５蛋白的真核表达质粒并转染Ｖｅｒｏ细胞，再用ＩＢＤＶ ＣＶ０３病毒株感染转染后的细胞，Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ方法检测细胞中模式识别受体及下游转录因子的表达；ｒｔ－ｑ ＰＣｒ检测细胞因子及抗病毒基因的表达。［结果］ＩＢＤＶ ＣＶ０３病毒感染Ｖｅｒｏ细胞后，ＶＰ４蛋白在一定程度上能够提高ｔｌｒ３、ｒＩＧ－Ⅰ蛋白含量，但差异不显著；ＶＰ５对ｔｌｒ３、ｒＩＧ－Ⅰ等介导的天然免疫通路有一定的抑制作用；过．．．

实验选用４种鱼类传代细胞，对首次发现的鳗鲡“狂游病”的病原鳗鲡冠状病毒样病毒进行了细胞分离与培养。本研究在鲤上皮乳头状瘤细胞（ＥＰＣ）中复制了鳗鲡冠状病毒样病毒粒子，并经病毒细胞培养物的电镜负染和超薄切片法检查得到了证实。

为探究Ig G/Ig M蛋白的分子特征、理化特性及病理学相关致病机理,对鹅细小病毒感染雏鹅的免疫球蛋白Ig进行了分级分离、纯化及Ig G/Ig M蛋白质结构和功能等生化-分子生物学分析。以GPVYZ感染雏鹅,采用(NH4)2SO4分级分离鹅血清Ig,将Sephadex G-100凝胶柱在Utro-gel ACA22凝胶柱色谱工作站上串联,分步聚集纯化出鹅血清Ig M/G进行SDS-PAGE和生化分析。结果显示,初级沉淀鹅血清Ig,在非还原条件下,感染组(RD)缺失6个蛋白主带(128,114,69,59,55,48 k Da);而在还原条件下,RD组缺失7个蛋白主带(139,128,119,1...

为探究Ｉｇ ｇ／Ｉｇ Ｍ蛋白的分子特征、理化特性及病理学相关致病机理，对鹅细小病毒感染雏鹅的免疫球蛋白Ｉｇ进行了分级分离、纯化及Ｉｇ ｇ／Ｉｇ Ｍ蛋白质结构和功能等生化－分子生物学分析。以ｇＰＶＹＺ感染雏鹅，采用（ＮＨ４）２ＳＯ４分级分离鹅血清Ｉｇ，将ＳｅＰＨａｄｅｘ ｇ－１００凝胶柱在ＵｔｒＯ－ｇｅｌ ａＣａ２２凝胶柱色谱工作站上串联，分步聚集纯化出鹅血清Ｉｇ Ｍ／ｇ进行ＳｄＳ－Ｐａｇｅ和生化分析。结果显示，初级沉淀鹅血清Ｉｇ，在非还原条件下，感染组（ｒｄ）缺失６个蛋白主带（１２８，１１４，６９，５９，５５，４８ ｋ ｄａ）；而在还原条件下，ｒｄ组缺失７个蛋白主带（１３９，１２８，１１９，１．．．

目前发现的猪肠道冠状病毒主要有猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪三角冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)4种。其中SADS-CoV是2017年首次在我国广东省发现的一种猪肠道冠状病毒,该病毒感染后可致小于5日龄仔猪出现严重急性腹泻、急性呕吐、脱水等症状,死亡率较高,给养猪业造成巨大的经济损失。目前还未见针对SADS-CoV的有效药物和疫苗产品上市,从病毒传播、致病机制、诊断及预防控制等方面综述SADS-CoV的研究进展,期望为SADS-CoV的防控提供参考。

【目的】克隆鸭血清白蛋白(duck serum albumin,DSA)基因,并对其进行生物信息学分析和mRNA表达规律研究。【方法】以前期抑制性消减杂交技术筛选的白蛋白(albumin,ALB)基因为候选基因,通过构建雏鸭肝炎病毒和聚肌苷酸胞苷酸(polyinosinic polycytidylic acid,Poly(I:C))感染模型,利用RT-PCR、RACE技术和基因组步移技术分别克隆ALB基因cDNA序列和5′侧翼序列,并对其进行生物信息学分析;同时利用RT-qPCR检测ALB基因各组织时空表达量。【结果】①ALB cDNA全序列长为2 107 bp,包括47 bp的5′UTR、2...