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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
刘春林 阮颖 官春云 周小云 王学军
针对 RAPD反应体系中 Taq聚合酶、d NTP和引物这 3个影响较大的因素 ,设计了一组 3因素 3水平试验 .根据试验结果 ,筛选出了油菜 random amplified polymorphic DNA(RAPD)反应体系中 3因素的最佳浓度配比 ,即 Taq 1.6 U ,d NTP 0 .2 mm ol/ L ,引物 0 .3μm ol/ L .
[期刊] 华北农学报
[作者]
郝丽芬 宋培玲 李子钦 李欣洲 张键 包玉英
通过正交试验设计,对油菜黑胫病菌ISSR-PCR反应体系的各影响因素进行研究,即从Taq酶、Mg2+、dNTPs、引物以及模板浓度5因素4水平进行优化,筛选并建立了适合油菜黑胫病菌ISSR分子标记的最佳反应体系,即在25μL反应体系中包含Taq DNA酶1 U,Mg2+2.0 mmol/L,dNTPs 0.2 mmol/L,引物0.6μmol/L,模板40 ng以及2.5μL 10×Buffer。并以扩增条带丰富、清晰、稳定性强为原则,从所查找的110条引物中筛选出24条适于油菜黑胫病菌ISSR-PCR扩增的引物,同时对各引物的最佳退火温度进行了筛选确定,经对20株病原菌的稳定性检测,证实该优...
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
王正加 黄坚钦 郭传友 杨萍 王华芳
建立山核桃RAPD反应优化体系是进行山核桃遗传多样性分析的前提。通过对影响PCR扩增结果的主要因子的组合研究,确定了山核桃Caryacathayensis的最适反应体系和扩增程序,即在20μL反应体系中,含2 5mg·L-1(50ng)模板,2 0μL10×Buffer,16 67pmol·s-1TaqDNA聚合酶;各0 2mmol·L-1dNTPs,3 0mmol·L-1MgCl2,0 3μmol·L-1引物。扩增程序为:94℃预变性300s,94℃变性30s,38℃退火30s,72℃链延伸90s,38次循环,72℃后延伸420s。图5表2参6
[期刊] 西南农业学报
[作者]
侯万伟 刘玉皎
利用正交设计L16(45)对蚕豆RAPD-PCR反应的5因素(Taq酶、Mg2+、dNTP、模板DNA、引物)在4个水平上进行优化试验,结果表明蚕豆最佳的RAPD-PCR的反应体系(20μl)为:10×缓冲液2.0μl,1.0 UTaqDNA聚合酶、1.5 mmol/L Mg2+、0.4mmol/L dNTPs、3 mmol/L引物、200 ng模板DNA。
关键词：
蚕豆 RAPD 反应体系
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马艳芝 王向东 张玉星
以鸭梨、杜梨为材料,对梨属植物DNA的提取及RAPD反应体系进行了系统优化,建立了梨属植物最佳反应体系及参数。结果表明,适当提高抗氧化、抗酚类物质的浓度(2%β-巯基乙醇,2%PVP-40,20 mmol/LNa2S2O5),提取的基因组DNA纯度较高;反应体系中含有Mg2+2.0 mmol/L,dNTPs浓度200μmol/L,引物0.4μmol/L,模板DNA 1.6 ng/μL,Taq DNA聚合酶0.06 U/μL,可成功用于梨属植物RAPD扩增。说明改良的CTAB法能成功用于梨属植物DNA提取,建立的最佳反应体系可用于梨属植物RAPD扩增。
关键词：
梨属植物 RAPD 反应体系
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
单丽丽 陆瑞菊 王亦菲 孙月芳 陆惠丽 黄剑华
以春兰为研究材料,对春兰基因组DNA的提取以及RAPD-PCR反应体系进行了优化.结果表明,在提取液中加入PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,采用高盐沉淀DNA和多次洗涤去除糖类,可以得到高质量春兰基因组DNA.电泳检测表明,所获得的DNA完整,无降解,完全可以满足RAPD等分子标记分析的需要.同时对春兰RAPD-PCR反应体系中各个影响因素进行了优化,建立了适合春兰RAPD分子标记的最佳反应体系,即20μL反应体系中含1UTaqDNA聚合酶,60μmol/LdNTPs,2.25mmol/LMg2+,1.0μmol/L引物,1.5ng/μL模板DNA.
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
赵鹏 Keith E.Woeste 张存旭 程飞 张硕新 蔡靖
核桃属种质资源丰富,其中多数物种木材材质优良,果实可食,营养丰富,为重要的经济树种。以美国白核桃Juglans cinerea、日本核桃Juglans ailantifolia等为材料,通过改良CTAB方法,从嫩芽、新鲜叶片和干叶片中分别提取核桃基因组DNA,并以此DNA为模板对RAPD-PCR反应体系中的一些重要参数进行摸索和优化试验。结果表明,改良的CTAB法可有效去除细胞内多糖和多酚等杂质对模板DNA的污染,大大提高DNA的数量和质量。优化适合于美国核桃、日本核桃和杂合核桃的RAPD-PCR反应体系为:在20μL的PCR反应体系中,含10 ng模板DNA,0.1 mg/mL牛血清蛋白(B...
关键词：
美国白核桃 日本核桃 RAPD 优化
[期刊] 华北农学报
[作者]
孙朝霞 王海燕 王玉国 侯思宇 张艳
利用随机引物扩增多态性(RAPD)分子标记技术研究不同枣树品系之间遗传多态性,建立起一个基于PCR技术的分子遗传标记RAPD分析的优化体系。设置不同的浓度梯度,从dNTPs、随机引物、Taq酶、Mg2+、缓冲液Buffer的浓度及模板DNA的质量和用量方面考察,建立了枣树RAPD技术最优体系。结果表明:20μL反应体系组分含量为10×Taq酶Buffer 2μL,Mg2+浓度2.0 mmol/L,dNTPs浓度200μmol/L,引物浓度0.2μmol/L,TaqDNA聚合酶浓度0.06 U/μL,DNA模板浓度1.5 ng/μL。最佳扩增程序为94℃预变性4 min,94℃变性30 s,36...
关键词：
枣树 RAPD 体系优化
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张克云 张崇星 吕毅 徐春花 王旭 林茂松
应用随机引物S344、S356和S360比较分析了PCR热循环复性温度、Mg2+浓度和模板浓度对松材线虫基因组DNA的RAPD扩增结果的影响,旨在建立松材线虫的最佳反应体系,并以此进行松材线虫的分子鉴定标记筛选。结果表明:37℃的复性温度、3.0 mmol.L-1Mg2+、10μL反应体系中松材线虫基因组DNA模板1~25 ng是研究松材线虫RAPD特征的最佳反应体系。利用此反应体系,通过对100个随机引物的分析,获得了3条松材线虫区别于拟松材线虫的分子鉴定标记。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
黄团 黄先群 李丽 彭慧元
为建立有效的不育基因分子标记辅助育种平台,以5个核不育两用系为研究材料,选用20条随机引物,利用RAPD混合集群分离分析法,对各两用系可育与不育基因池进行分子标记的初步分析。结果表明,在油研10号筛选到2个与不育基因相关的标记:BA2084-600和S1354-1300;在萝×诸中筛选到1个与不育基因相关的标记:LC02-500。在827AB、T18筛选到集团间有差异的引物,未筛选到通过集团单株检测的与其育性基因相关的标记。通过RAPD混合BSA法可以筛选到与不育基因相关的特异DNA标记。
[期刊] 华北农学报
[作者]
郭小菲 姜立娜 蔡祖国 任文娟 赵一鹏
为建立菜用大黄最佳的SRAP反应体系,进一步对菜用大黄品种进行遗传多样性分析,以菜用大黄基因组DNA为模板,采用单因素与正交设计相结合的方法,对SRAP-PCR扩增体系中的模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物和Taq DNA聚合酶浓度5个因素进行优化,并确立菜用大黄SRAP-PCR的最佳体系。结果表明:菜用大黄各因素对反应体系影响大小依次为:引物浓度>Mg2+浓度>dNTPs浓度>Taq DNA聚合酶浓度>DNA用量;最佳反应体系为:25μL反应体系中含10×PCR Buffer 2.50μL、模板DNA 30 ng、Mg2+2.50 mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、Taq...
关键词：
菜用大黄 SRAP-PCR 体系优化
[期刊] 西南农业学报
[作者]
吴春妍 杨冠松 张爱丽 申仕康 王跃华
采用正交和单因素试验设计方法,对影响甜菜树ISSR-PCR反应体系的d NTPs、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA及退火温度5个因素进行优化试验,建立了稳定的、可重复的甜菜树ISSR-PCR扩增反应体系。在20μl的反应体系中,d NTPs浓度为0.4mmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1.0 U,引物浓度为0.2μmol/L,模板DNA浓度为45 ng。扩增程序:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸2 min,40个循环,最后72℃延伸8 min。这一优化体系的建立为深入展开甜菜树种质资源的遗传多样性研究奠定基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
李向 轩淑欣 王彦华 赵建军 申书兴
以菜薹基因组DNA为模板,通过正交试验设计,从Mg2+、Taq酶、dNTPs、引物及模板5种因素4个水平对不结球白菜SRAP反应体系进行优化,建立了适合不结球白菜的SRAP-PCR优化反应体系。利用该优化体系,选用30对芸薹属SRAP引物,对5份不结球白菜的基因组进行扩增,筛选出7对具有2条以上特异扩增条带的SRAP引物,验证了该优化体系的稳定性。
关键词：
不结球白菜 SRAP PCR 正交试验
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李银霞 李天红
以‘新大久保’桃为试材,利用正交设计直观分析法和2因素完全随机试验优化了桃SSR技术中PCR反应体系。试验结果表明,适宜桃遗传分析的SSR技术体系为:在25μL反应体系中Taq DNA聚合酶和DNA最适用量分别为1 U和50~100 ng;Mg2+、dNTP和引物最适终浓度分别为1.5~2.0 mmol/L、0.20~0.28 mmol/L和0.2~0.6μmol/L。利用30个桃品种验证此反应体系,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物在100~300bp,多态性高,且反应体系的稳定性和可重复性好。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王学军 林良斌 熊兴华
近20年,油菜小孢子培养已得到深入的研究,并建立了完善的油菜小孢子再生体系.现综述油菜小孢子再生体系培养操作流程、影响因素及其转化体系等,指出了油菜小孢子培养所存在的问题及解决的方法.
关键词：
油菜 小孢子 再生体系
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