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[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
王建勇 谭晓风 龙洪旭 陈鸿鹏 刘凯 朱凤云
以油茶近成熟种子为材料,根据油茶EST文库中已知的脂氢过氧化物裂解酶EST序列,利用3’RACE与5’RACE技术,克隆到脂氢过氧化物裂解酶的全长cDNA序列。该基因全长1648bp,,包含一个1476bp开放阅读框长,编码491个氨基酸,5’与3’非编码分别为52bp、121bp。预测该蛋白相对分子量为54.7779KDa,等电点为6.77,是个叶绿体转运肽,N端包含有22个疏水氨基酸残基组成的序列,不仅具有转运肽富含的丝氨酸,还含有大量转运肽中很少存在的脯氨酸。多序列比对发现油茶脂氢过氧化物裂解酶核苷酸序列与茶的相似性达到96%,因此将该基因命名coHPL。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
孙盛明 戈贤平 傅洪拓 朱健 张世勇
利用cDNA末端快速克隆方法获得了青虾(Macrobrachium nipponense)的过氧化物还原酶基因(Prx)全长cDNA序列。该基因cDNA全长878 bp,包括72 bp的5′末端非翻译区,594 bp的开放阅读框(ORF),212 bp的3′末端非翻译区,开放阅读框编码198个氨基酸。氨基酸相似度比对显示,所分离的青虾过氧化物还原酶基因包括两个半胱氨酸残基的区域"FYPLDFTFVCPTEI"和"GEVCPA"。系统进化树分析表明,青虾过氧化物还原酶基因与南美白对虾(Litopenaeus vannamei)过氧化物还原酶聚在一起,具有最近的亲缘关系。荧光定量PCR检测显示,过...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张海燕 李国田 王晓杰 段迎辉 徐亮胜 郭军 马金彪 黄丽丽 康振生
【目的】克隆TaPrx基因并对其在小麦与条锈菌互作中的功能进行初步分析。【方法】利用PCR方法结合RACE技术在cDNA文库中筛选得到TaPrx基因的全长序列并进行生物信息学分析,然后克隆至pET-32a(+),转化E.coliBL21(DE3)后用IPTG进行诱导表达。通过Real-timeRT-PCR进行表达模式分析。【结果】得到TaPrx基因的全长序列688bp,ORF489bp,编码162个氨基酸残基,分子量17.36kD,等电点5.32,含一个保守的半胱氨酸残基(Cys),不含信号肽及跨膜结构域,亚细胞定位94%的可能性在细胞质。TaPrx融合蛋白分子量38kD,最佳IPTG诱导浓度...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
刘洋 姚艳丽 胡小文 徐磊 邢淑莲 张树珍
斑茅是栽培种甘蔗最重要的近缘物种之一，具有抗逆性强等特点。本文以高粱过氧化氢酶基因（ＮＣＢＩ登录号为ＸＭ００２４３７５８６．１）Ｃ ＤＮＡ序列为探针，对甘蔗属ＥＳＴ数据库进行同源检索、筛选和拼接，后经基因组ＰＣＲ、分子克隆、序列分析验证成功分离了１个斑茅过氧化氢酶基因ＤＮＡ序列（ＥＡ ＣＡＴ－１Ａ，ＧＥＮ ＢＡＮｋ登录号为ｋＦ８６４２２３）。该序列全长３８３１ ＢＰ，包含８个外显子和７个内含子，Ｃ ＤＮＡ序列长为１５３２ ＢＰ，包含１０ ＢＰ的５’非翻译区（ＵＴＲ）和４３ ＢＰ的３’ＵＴＲ，以及一个１４７９ ＢＰ的开放读码框，编码４９２个氨基酸，此蛋白序列具有过氧化氢酶保守结构域，属于ＣＡＴ家．．．
关键词：
斑茅 过氧化氢酶 基因克隆 同源进化分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
张安 曹清河 周志林 赵冬兰 逄洪波 唐君
为了从甘薯野生资源中获取抗逆基因，提取Ｉｐｏｍｏｅａ ｔｒＩｆＩｄａ组培苗总ｒＮａ，经反转录获得第一链ｃ ｄＮａ，使用特异引物进行ｐｃｒ扩增，获得了Ｉ．ｔｒＩｆＩｄａ抗坏血酸过氧化物酶编码区序列，并进行生物信息学分析以及组织特异性表达研究。经测序表明，所获得的序列长约７６９ ｂｐ，包含７５３ ｂｐ完整的开放阅读框；生物信息学分析结果表明，此序列编码２５０个氨基酸，蛋白大小约为２７．６ ｋ ｄａ，等电点为５．４２，有大范围亲水区，推测在细胞质中起到抗氧化作用；进化发育系统分析表明，Ｉｔ ａｐＸ和Ｉｂ ａｐＸ最为接近；组织特异性表达分析表明，Ｉｔ ａｐＸ在各组织中均有表达。Ｉ．ｔｒＩｆＩｄａ抗坏血．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
张安 曹清河 周志林 赵冬兰 逄洪波 唐君
为了从甘薯野生资源中获取抗逆基因,提取Ipomoea trifida组培苗总RNA,经反转录获得第一链c DNA,使用特异引物进行PCR扩增,获得了I.trifida抗坏血酸过氧化物酶编码区序列,并进行生物信息学分析以及组织特异性表达研究。经测序表明,所获得的序列长约769 bp,包含753 bp完整的开放阅读框;生物信息学分析结果表明,此序列编码250个氨基酸,蛋白大小约为27.6 k Da,等电点为5.42,有大范围亲水区,推测在细胞质中起到抗氧化作用;进化发育系统分析表明,It APX和Ib APX最为接近;组织特异性表达分析表明,It APX在各组织中均有表达。I.trifida抗坏血...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
马凌波 张凤英 马春艳 王素娟
利用细胞质抗坏血酸过氧化物酶(APX)基因部分片段为探针,从条斑紫菜(Porhyrayezoensis)叶状体的cDNA文库中筛选出1种新型的编码APX的全长cDNA克隆。该克隆开放阅读框编码242个氨基酸,与高等植物已知的胞质APX序列相似,同时具有两个特征性的保守区域。推导的氨基酸序列具有与在一种单细胞红藻(Galdieriapartite)中发现的APX B相似的杂交类型结构,这种结构可能是红藻或者非绿色光合生物的APX的重要特征。该cDNA克隆编码区G+C含量达到63 7%,其中密码子的第3位G+C含量高达88 4%。本实验得到的抗坏血酸过氧化物酶基因的cDNA序列已登录到GenBan...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
陈立祥 苏建明 雷威 田志坚 张学文 章怀云
以黄孢原毛平革菌基因组DNA为模板,克隆Lip-2基因片段,结合序列测定和生物信息学方法对扩增序列进行分析,结果证实所获得的序列与GenBank中已经登陆的Lip-H8基因具有高度的同源性,其N-端也具有真核生物分泌型信号肽序列.Lip-2基因序列的获得为下一步将其构建到酵母表达载体中进行蛋白质表达奠定了基础.
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
朱凤云 陈鸿鹏 谭晓风 刘凯 王建勇
为深入了解脂氧合酶基因在油茶果实成熟过程中的功能及其对油茶油脂品质的影响,本研究以油茶种子的转录组数据库中的脂氧合酶基因(lipoxygenase,LOX)的部分cDNA序列为基础,采用RT-PCR和RACE技术从油茶种子中克隆到此基因的全长cDNA,并其进行了序列分析。该基因全长cDNA为2 698 bp,包括5’非编码区161 bp、3'非编码区131 bp以及一个长2 406 bp的编码区和16 bp的polyA尾巴。该基因编码蛋白质的分子量约为91.65 kDa,等电点为5.255。同时该蛋白二级结构以α-螺旋为主,具有跨膜结构,主要分布在细胞内的叶绿体和细胞质中。经过比对分析,发现油...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
赵文恩 乔旭光 胡宏强 朱卫卫 韩雅珊
在不饱和脂肪酸中,亚油酸甲酯的氧化研究较广泛。Yamamoto 等已研究了它的氧化过程,并报道形成的产物氢过氧化物是由4种共轭二烯氢过氧化物构成,为13-氢过氧-9-顺,11-反式;13-氢过氧-9-反,11-反式;9-氢过氧-10-反,12-顺式;9-氢过氧-10-反,12-反式。Terao 报道了 HPLC 检测氢过氧化物的方法,目前亚油酸甲酯已作为研究溶液中脂氧化的代表性物质广泛使用。本文报道了采用新检测条件,用 HPLC 检测亚油酸甲酯氢过氧化物。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
田燚 马增艳 常亚青
以仿刺参Apostichopus japonicus为材料,利用cDNA末端快速扩增(RACE)方法首次得到仿刺参MnSOD的全长cDNA。该全长cDNA大小为955bp,其中5′端非编码区67bp,3′端非编码区216bp,开放阅读框(ORF)672bp,在3′端有多聚腺苷酸信号序列ATTTA,并有polyA加尾,符合有效翻译的基因全长cDNA的特征。MnSOD全长cDNA可编码223个氨基酸的前体蛋白,预测蛋白分子质量为24.64kD,理论等电点是6.66,为亲水性蛋白。该蛋白序列没有信号肽和跨膜结构,仅有一段线粒体导肽。其二级结构主要以α-螺旋为主,无规则卷曲和延伸链构成了蛋白中量最大的...
关键词：
仿刺参 MnSOD 基因克隆 序列分析
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张静文 张力文 严云香 常义 陈艳 李欣勇
【目的】铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)在保护细胞和组织免受氧化损伤方面起重要作用。对滨海植物草海桐盐胁迫诱导的Cu/Zn-SOD进行克隆和序列分析，为揭示草海桐适应盐碱环境提供理论依据。【方法】以盐胁迫的草海桐为材料，运用RACE技术克隆草海桐Cu/Zn-SOD,命名为SsCSD,采用生物信息学方法进行序列分析，构建pBinGlyRed-SsCSD重组质粒。【结果】通过RACE技术获得SsCSD基因全长共1148 bp,其最大开放阅读框(ORF)为687 bp,编码228个氨基酸。氨基酸保守结构域分析表明，该序列具有铜锌超氧化物歧化酶保守结构域，属于SOD家族。生物信息学分析表明其定位于叶绿体中，氨基酸序列分析显示其与已知植物叶绿体Cu/Zn-SOD的氨基酸残基高度同源。同时将SsCSD基因与植物表达载体pBinGlyRed进行重组，并成功转入农杆菌GV3101中。【结论】草海桐铜锌超氧化物歧化酶氨基酸序列与同源物种相似度高，在进化上高度保守，对进一步通过转基因验证该酶生物学功能具有重要意义。
[期刊] 水产学报
[作者]
唐蕾 傅明骏 赵超 邱丽华 刘文生 江世贵
为了研究含硒谷胱甘肽过氧化物酶（ｓｅｌｅｎｉｕｍ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ｓｅｇｐｘ）在斑节对虾应激反应和卵巢发育中的作用，实验以斑节对虾肝胰腺转录组数据中筛选获得的ｓｅ－ｇｐｘ基因（ｐｍ ｓｅ－ｇｐｘ）片段为基础，利用ｒａＣｅ技术获得ｐｍ ｓｅ－ｇｐｘ基因的Ｃ ｄｎａ全长，并对其进行了生物信息学分析；利用荧光定量ｐＣｒ技术研究了ｐｍ ｓｅ－ｇｐｘ在斑节对虾不同组织、卵巢发育各期、肝胰腺组织在ｐｈ９、硫酸铜（Ｃｕ～（２＋））应激下的相对表达量和变化趋势。结果显示，ｐｍ ｓｅ－ｇｐｘ基因Ｃ ｄｎａ全长为９５９ ｂｐ，５＇非编码区（ｕｔｒ）长１０ｂｐ，开放．．．
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
乔枫 耿贵工 曾阳 金兰 谢惠春
为探索青海枸杞抗坏血酸过氧化物酶(APX)基因信息,并对枸杞APX基因进行生物信息学分析以及基因表达研究,通过RT-PCR和RACE方法克隆枸杞APX基因,利用生物信息学软件预测基因结构,采用实时荧光定量PCR方法分析基因表达的变化。结果显示:枸杞APX基因的全长cDNA序列为1 047bp(Genbank No.KX981601),命名为LcAPX基因。该基因含有1个753bp的完整开放阅读框(ORF),编码250个氨基酸,包含亚铁血红素结合位点、底物结合位点和K~+结合位点。枸杞LcAPX与茄科植物的APX蛋白聚为一类,说明两者的亲缘关系较近。LcAPX基因在枸杞的成熟叶中表达量最高,花中表达量最少。其在聚乙二醇(PEG)、氯化钠(NaCl)胁迫下诱导表达,显示LcAPX在枸杞抗干旱和抗盐逆境过程起一定作用。
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