【目的】探讨油茶炭疽病复合病菌种类，筛选油茶炭疽病复合病菌的高效杀菌剂，为科学防治油茶炭疽病提供依据。【方法】从湖南、广西、广东、江苏，海南等地油茶成林采集炭疽病叶样本，采用组织分离法分离纯化致病菌，结合形态学和多基因联合系统发育分析进行种类鉴定；通过复合侵染试验研究致病菌之间的关系；采用菌丝生长速率法测定杀菌剂咪鲜胺、苯醚甲环唑、嘧菌酯、啶氧菌酯，氟吡菌酰胺和啶酰菌胺对油茶致病菌的室内毒力。【结果】1）从106个油茶炭疽病病斑中分离获得186株致病菌，其中主要病原菌是炭疽属真菌130株，拟盘多毛孢属真菌18株，新拟盘多毛孢属真菌28株，假拟盘多毛孢属真菌4株，链格孢属真菌6株；分离出单一炭疽病菌的病斑55个，而能同时分离出炭疽病菌和其他致病菌的病斑有51个，其中同一个病斑能同时分离出同属不同种或不同属致病菌的病斑有51个，分离的不同病菌有7种组合方式：同属不同种炭疽菌、炭疽菌和拟盘多毛孢属真菌、炭疽菌和新拟盘多毛孢属真菌、炭疽菌和假拟盘多毛孢属真菌、炭疽菌和链格孢属真菌两两组合以及炭疽菌和拟盘多毛孢属和新拟盘多毛孢属、炭疽菌和拟盘多毛孢属和链格孢属真菌3种菌的组合。2）将炭疽菌属和拟盘多毛孢属，炭疽菌属和新拟盘多毛孢属，炭疽菌同属不同种这3种分离率最多的组合方式致病菌回接到油茶上，发现炭疽病菌和其他致病菌复合接种的病斑显著大于只接同种病菌的病斑，表明油茶炭疽病斑中存在炭疽病菌与其他病原菌复合侵染协同增效的现象。3）室内毒力测定结果显示，苯醚甲环唑和咪鲜胺对炭疽菌属，拟盘多毛孢和新拟盘多毛孢致病菌均具有较强的抑制作用，平均EC50在0.011～0.555μg·mL-1之间；其次是嘧菌酯和啶氧菌酯，这2种药剂对拟盘多毛孢和新拟盘多毛孢的室内毒力最强，平均EC50在0.007～0.020μg·mL-1之间，但对炭疽菌的抑制作用较差；而啶酰菌胺和氟吡菌酰胺对油茶炭疽菌和拟盘多毛孢属致病菌几乎没有抑制作用。【结论】油茶炭疽病斑中存在炭疽菌和其他病菌复合侵染现象，咪鲜胺和苯醚甲环唑可作为防治油茶炭疽病复合侵染的主选药剂。

为四川省雅安市石棉县核桃炭疽病病害防治提供依据，对该地区发病叶片、果实和枝干分别进行发病组织培养、分离纯化，通过致病性测定、菌落形态观察和ｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列测定对病原菌进行鉴定，并采用菌丝生长速率法和孢子萌发法，室内测定２５种杀菌剂配方对病原菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用。结果表明：１）病原菌经分离纯化后得到的９个菌株，根据各菌株在ＰＤＡ平板正反面的不同形态分为２类，分别选择１个具有代表性的菌株Ｐ５１和Ｐ５７作后续鉴定。２个菌株接种果实和叶片后发病率均为１００％，病原重分离均得到接种的病原，其形态特征均与刺盘孢属ＣｏｌｌｅＴｏＴｒＩＣｈｕｍ ｇｌｏｅｏＳＰｏｒＩｏＩＤｅＳ真菌相似；将２个菌株．．．

【目的】明确近年来严重危害砀山梨的炭疽病病原菌种类,研究常用杀菌剂对致病菌菌丝生长、分生孢子萌发的抑制作用。【方法】对6个取自不同梨品种上的病果、病叶样本分别进行发病组织培养、单孢分离纯化,根据病原菌的形态特征和致病性,并结合其rDNA-ITS序列分析,进行病原菌种类鉴定。采用常用杀菌剂分别对病原菌菌丝和分生孢子进行处理,观测其化学抑制效果。【结果】从不同病斑上分离出了6个纯化菌株,其形态特征相同,且与已报道的炭疽病菌(Colletotrichum spp.)形态特征相似;用上述纯培养菌株接种于健康果实和叶片上,又引起与田间原标本相同的病害症状;通过病原菌rDNA-ITS克隆测序、BLASTn...

【目的】为了明确番木瓜炭疽病主要病原菌种类及适宜的防治药剂。【方法】从海南采集番木瓜炭疽病病果,采用柯赫氏法则对病原菌进行分离、纯化、致病性测定,根据病原菌的形态特征,结合其rDNA-ITS区域的序列分析对病原菌进行鉴定,并采用生长速率法测定17种杀菌剂对该病原菌生长的抑菌活性。【结果】从分离的炭疽菌中,得到2种强致病菌(代表菌株分别为C1和G1),其中C1菌株与辣椒炭疽菌(Colletotrichum capsici)形态特征相似,G1菌株和胶孢炭疽菌(C.gloeospcrides)形态特征相似。通过采用引物ITS1/ITS4对2个病原菌序列扩增并测序,将2个菌株rDNA-ITS序列与GenBank中相关菌株的ITS序列进行同源性比较,发现C1菌株与辣椒炭疽菌(C.capsici)同源性达到了99%,G1菌株与胶孢炭疽菌(C.gloeospcrides)的同源性同样达到99%。【结论】500 mg/mL咪鲜胺水分散粒剂对2菌株的抑菌效果最好,平均EC_(50)值仅为0.03μg/mL,其次为300 mg/mL咯菌腈悬浮剂和250 mg/mL丙环唑乳油,平均EC_(50)值分别为0.04和0.11μg/mL,确定番木瓜炭疽病主要由辣椒炭疽菌(C.capsici)和胶孢炭疽菌(C.gloeospcrides)引起,500 mg/mL咪鲜胺水分散粒剂、300 mg/mL咯菌腈悬浮剂和250 mg/mL丙环唑乳油对番木瓜炭疽菌抑菌效果好。

【目的】旨在明确我国云南省主要植胶区——西双版纳橡胶树炭疽病菌复合群的种属分类,筛选橡胶树炭疽病菌Colletotrichum cliviae的防治药剂。【方法】采集分离西双版纳地区橡胶树炭疽病菌,通过形态学和多基因系统进化分析相结合的方法进行鉴定,并采用菌丝生长速率法对杀菌剂进行室内毒力测定。【结果】成功分离鉴定出35株橡胶树炭疽病菌,其中63%的菌株属于胶孢炭疽菌复合群,34%的菌株属于尖孢炭疽菌复合群。系统发育树进一步将35株炭疽菌归为4个种属,分别为胶孢炭疽菌复合群下的C.siamense,尖孢炭疽菌复合群下的C.laticiphilum和C.wanningense,以及云南首次发现的C.cliviae。另外,室内药剂筛选结果表明,咪鲜胺、苯醚甲环唑、嘧菌酯、吡唑醚菌酯、吡噻菌胺5种杀菌剂对云南和海南地区橡胶树C.cliviae菌株的EC_(50)值为0.075～1.09 mg/L,其中咪鲜胺抑制活性最佳。【结论】云南西双版纳地区橡胶树炭疽病菌的优势种为胶孢炭疽菌复合群下的C.siamense。咪鲜胺对我国新发现的橡胶树C.cliviae的抑制效果依然良好。本研究进一步提高了对橡胶树炭疽病菌分类的认识,为有效防治该病害提供了技术支持。

对引起云南省元江县芦荟炭疽病的病原菌进行了生物学特性及室内药剂毒力测定研究。结果表明:引起该地芦荟炭疽病的菌原是芦荟炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioidesPenz.,其生长的适宜温度范围为25~35℃,最适温度为30℃,致死温度为60℃、10 min;病菌能有效地利用各种碳源和氮源,最适碳源是麦芽糖,最适氮源是硝酸钠。70%代森锰锌对菌落抑制效果最佳,其次75%百菌清,80%比超也有一定抑制效果。

【目的】明确黑老虎炭疽病原菌种类，筛选出适宜的防治药剂，为黑老虎炭疽病的识别和大田防治提供理论依据。【方法】采用组织块分离法对广东省云浮市黑老虎炭疽病原菌进行分离，基于科赫法则确定其致病菌，采用形态学和分子生物学相结合的方法对菌株进行种类鉴定，并采用菌丝生长速率法对其进行生物学测定及不同药剂的室内毒力检测。【结果】通过对病叶分离纯化共获得6种菌株，选取具有代表性的典型菌株A1进行形态鉴定以及ITS序列分析，确定黑老虎炭疽病原菌属炭疽菌属（Colletotrichum sp.）。通过对菌株A1进行生物学测定，明确其以PDA培养基为最适生长培养基，以28 ℃为最适生长温度，以53 ℃水浴处理10 min为菌株致死条件，以pH 6.0为菌丝最适宜生长pH，以连续黑暗（暗24 h）为最适光照条件，以麦芽糖和酵母粉分别为最佳碳、氮源。同时，在福美双、溴菌腈、多菌灵和嘧菌酯4种供试药剂中，多菌灵的抑菌效果最佳，EC_(50)值为0.14 μg/mL；其次是福美双和溴菌腈，EC_(50)值分别为55.26和55.32 μg/mL，抑菌效果较好；嘧菌酯的EC_(50)值为791.95 μg/mL，EC_(50)值在100～1000 μg/mL，抑菌效果不明显。【结论】广东省云浮市黑老虎炭疽病原菌为炭疽菌属。多菌灵、福美双及溴菌腈对黑老虎炭疽病原菌菌丝生长具有较好的抑制作用，可以作为黑老虎炭疽病的候选田间防治药剂。

[目的]为分离和鉴定红楠炭疽病的病原菌,筛选出适宜的防治药剂。[方法]本研究采用组织块分离法分离红楠炭疽病的病原菌,通过针刺回接法确定其致病菌,进一步采用形态学和分子生物学相结合的方法对红楠炭疽病的病原进行鉴定,最后采用菌丝生长速率法测定7种不同的杀菌剂对红楠炭疽病菌的室内毒力,根据EC_(50)值的大小选出抑制效果最好的杀菌剂。[结果]分离并鉴定引起红楠炭疽病的病原为Colletotrichum sp.;不同杀菌剂对红楠炭疽病菌的抑制效果明显不同,其中98.4%多菌灵的抑菌效果最好,不同供试浓度对红楠炭疽病菌的抑制率均为100%;此外97%吡唑醚菌酯和98%福美双也表现出较好的抑制作用,EC_(50)值分别为(19.74±1.79)、(55.92±5.34)μg/mL。[结论]首次确定引起红楠炭疽病的病原为Colletotrichum sp.,并筛选出抑制活性较好的杀菌剂,分别为98.4%多菌灵、97%吡唑醚菌酯和98%福美双。

【目的】明确广东省番木瓜果实疑似炭疽病病害的致病菌,并筛选防控该病害的适宜化学药剂,为番木瓜炭疽病的诊断和有效防治提供科学依据。【方法】在广东省广州市番木瓜果园采集番木瓜果实水渍状炭疽病疑似病果,对番木瓜病果进行组织分离及致病性测定,利用传统形态学和分子生物学方法鉴定病原菌;采用菌丝生长速率法测定8种杀菌剂对该病原菌的室内毒力。【结果】从病果样品中分离出5个形态特征相似的菌株(C1～C5),随机选取C1作为代表性菌株进行致病性测定和鉴定。致病性分析发现,番木瓜果实接种C1病原菌2 d即可表现出明显的水渍状病斑,从表现症状的部位可以重新分离到该病原菌。形态学观察发现,C1初生菌丝为白色辐射状,随后变灰白色,菌丝体上覆盖着一些橘红色分生孢子盘;孢子梗透明,有分隔;分生孢子透明,单细胞,细胞壁光滑,两端圆,形状规则呈圆柱形,壁薄,内含物呈颗粒状;分生孢子大小为13.2μm×5.1μm。这些形态学特征与短孢炭疽菌(Colletotrichum brevisporum)一致。分子生物学鉴定结果显示,供试菌株C1核糖体内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、β微管蛋白(β-tubulin,TUB2)和肌动蛋白(actin,ACT)基因序列与短孢炭疽菌(C. brevisporum)模式菌株BCC 38876对应基因的序列一致性分别为100%,93%,98%和100%。系统发育树分析结果表明,供试菌株C1与短孢炭疽菌单独聚为一支。结合形态学、分子生物学、致病性及发病特征明确了导致广东省番木瓜炭疽病的病原菌为短孢炭疽菌。室内毒力测定结果显示,在8种杀菌剂中,45%咪鲜胺水乳剂对C1菌株的抑制效果最明显,抑制中浓度(EC_(50))为0.082 0 mg/L,其次为250 g/L丙环唑乳油和40%苯醚甲环唑悬浮剂,EC_(50)分别为0.263 5和9.714 3 mg/L。【结论】在中国大陆首次鉴定了番木瓜果实炭疽病的致病菌短孢炭疽菌。45%咪鲜胺水乳剂、250 g/L丙环唑乳油和40%苯醚甲环唑悬浮剂对番木瓜短孢炭疽菌具有明显的抑制作用。

禾谷炭疽菌(Colletotrichum cereale)引致的炭疽病是山西晋北地区燕麦(Avena sativa)生产的主要限制因素,但目前尚未开展化学杀菌剂防治燕麦炭疽病的研究。为明确不同作用机制杀菌剂对燕麦炭疽病菌的抑制效果,本研究选取6类10种杀菌剂,使用菌丝生长速率法和液滴法对其抑菌效果进行测定。结果表明:多菌灵50%可湿性粉剂、丙环唑25%乳油、嘧菌酯25%悬浮剂和吡唑醚菌酯25%悬浮剂对禾谷炭疽菌菌丝生长的抑制作用较强,有效中浓度(EC50)分别为0.092 1、0.877 4、0.118 0和0.002 9 mg·L~(-1);百菌清75%可湿性粉剂、多菌灵50%可湿性粉剂、嘧菌酯25%悬浮剂和吡唑醚菌酯25%悬浮剂对禾谷炭疽菌孢子萌发具有较好的抑制效果,其中百菌清75%可湿性粉剂浓度≥0.80 mg·L~(-1)时,孢子萌发抑制率均为100%,多菌灵50%可湿性粉剂、嘧菌酯25%悬浮剂和吡唑醚菌酯25%悬浮剂的EC50分别为0.112 4、0.118 4和0.005 9 mg·L~(-1)。根据作用机制的不同,建议百菌清75%可湿性粉剂在炭疽病发生前作为保护性杀菌剂使用,多菌灵50%可湿性粉剂、嘧菌酯25%悬浮剂和吡唑醚菌酯25%悬浮剂作为保护和治疗性杀菌剂使用。此外,生产者应及时轮换采用不同作用机制的化学杀菌剂防控病害,同时改善种植条件,引进和选育抗病品种,保证燕麦的可持续生产。

【目的】鉴定广西香花油茶炭疽病病原菌，掌握其生物学特性，为抗病油茶品种选育提供参考依据。【方法】采集广西南宁市、来宾市和崇左市香花油茶林地典型炭疽病样品，以组织分离法和柯赫氏法获得致病菌株，依据病原菌形态特征描述和病原菌核糖体内转录间隔区(ITS)、肌动蛋白(ACT)、几丁质合成酶(CHS1)和3-磷酸甘油醛脱氢酶(GPDH)多基因分子系统学分析结果进行鉴定，并采用平板法测定病原菌的生物学特性。【结果】从广西南宁市、来宾市和崇左市3个地区香花油茶林地采集典型炭疽病样品中分离获得的76株炭疽菌属真菌，对健康香花油茶叶片均具有致病性，但致病力略有差异；代表菌株CXNN02、CXLB08和CXCZ09的离体接种病斑平均直径分别为6.48、6.39和5.20 mm，活体接种病斑比前者略小，分别为5.53、5.33和 4.97 mm，以CXNN02菌株的致病力略强。菌株CXNN02在PDA培养基上菌落呈圆形，菌丝灰色至深灰色，气生菌丝茂盛，绒毛状，背面产生黑色色素；菌丝生长较快，平均生长速率为11.75 mm/d；分生孢子光滑，无色，单胞，圆柱状，顶端钝圆或略尖，大小为（13.30～20.67）μm×（3.39～7.48）μm；分生孢子附着胞浅褐色至褐色，单个或多个，圆形或近圆形，边缘完整，大小为（6.50～10.69 ）μm×（5.17～9.50）μm。对菌株CXNN02、CXLB08和CXCZ09进行形态学结合病原菌多位点基因系统发育进化树分析，确定核果炭疽菌（Colletotrichum fructicola）是广西香花油茶炭疽病病原菌。生物学特性测定结果显示，香花油茶炭疽病病原菌菌丝生长和产孢的最佳温度均为28 ℃，最适菌丝生长pH为4～5，最适产孢pH为6，菌丝生长的较佳碳源为D-麦芽糖、D-葡萄糖、D-果糖和D-木糖，最佳产孢碳源为乳糖，较佳氮源为牛肉膏、蛋白胨和酵母粉3种有机氮源，最佳产孢氮源为酵母粉；完全黑暗有利于香花油茶炭疽病病原菌菌丝生长和产孢。【结论】广西香花油茶炭疽病病原菌为核果炭疽菌，其菌丝生长和产孢受温度、pH、碳氮源和光照条件影响明显。香花油茶是核果炭疽菌的新寄主，进行香花油茶抗病品种选育及制定炭疽病防治措施时需充分了解该菌的生物学特性。

【目的】探讨中国油茶苗圃炭疽病原菌种类,揭示油茶苗圃炭疽病菌抗药性,为其防治提供依据和指导。【方法】分离油茶苗圃炭疽病菌,并对分离菌株的ApMat基因进行PCR扩增和测序,通过对序列系统发育分析鉴定炭疽病原菌种类;采用区分剂量法测定所有菌株对杀菌剂多菌灵、乙霉威、戊唑醇和咪鲜胺的抗药性。【结果】湖南、江西、海南和广东4个省份分离的95株的油茶苗圃炭疽病病原菌主要是果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola)、暹罗炭疽菌(C.siamense)、山茶炭疽菌(C.camelliae)和胶胞炭疽菌(C.gloeosporioides) 4个种,其中炭疽病菌分布范围最广、分离数量最多(83株,占总分离菌株的87.4%)。抗药性测定结果表明,对多菌灵产生抗性的菌株有31个,占总分离菌株的32.6%;对戊唑醇产生了抗性的菌株有31株,占总分离菌株的32.6%。其中对多菌灵和戊唑醇这2种杀菌剂均具有抗性的菌株有6株,占总分离菌株的6.3%;对多菌灵、乙霉威和戊唑醇3种杀菌剂均有抗性的菌株有2株,占所有分离菌株的2.1%。但所有95个菌株对咪鲜胺敏感,说明目前苗圃油茶炭疽病菌尚未对咪鲜胺产生抗药性。29个高抗多菌灵而对乙霉威敏感菌株第198位氨基酸由谷氨酸(Glu)突变为丙氨酸(Ala),2株对多菌灵和乙霉威具有双重抗药性的菌株第200位氨基酸由苯丙氨酸(Phe)突变为酪氨酸(Tyr)。【结论】我国油茶苗圃炭疽病菌已对多菌灵/乙霉威和戊唑醇产生严重的抗药性,但对咪鲜胺尚未检测到抗药性。

2017年,采集云南玉溪冰糖橙典型果斑病病果,从病灶组织中分离致病菌,根据形态学特征、致病性和多种保守基因序列分析对病原菌进行鉴定,并进行室内药剂筛选。分离获得的3个菌株guo–1、NS2–2、NS2–6经鉴定为茎点霉(Phoma sp.),对当年生冰糖橙叶片和果实的致病力较强;基于ITS、SSU、EF1–α、LSU、TUB、ACT的系统发育分析表明,致病菌与Phoma sp.处于同一个分支。室内药剂筛选结果表明,3%噻霉酮可湿性粉剂、11.5%吡唑嘧菌酯悬乳剂、22.5%咪鲜胺水乳剂和60%唑醚代森联水分散粒剂对玉溪冰糖橙果斑病致病菌有明显的抑制效果。

【目的】采用生物信息学研究方法,筛选分析果生刺盘孢效应子,并验证其功能,为其致病相关基因研究提供理论依据,同时为油茶病害管理提供参考。【方法】对果生刺盘孢非侵染期(分生孢子)和侵染时期(油茶叶片病斑组织)进行RNA-seq测序,并利用生物信息分析软件BUSCA、Target P、big-PI Predictor和GO、KEGG、PHI数据库分析转录组数据,选出符合条件的候选效应子,再利用qRT-PCR技术对效应子进行相对定量分析;克隆候选效应子全长基因,通过烟草瞬时表达系统和DAB染色验证相应基因功能。【结果】1)转录组结果数据显示,侵染时期相对于非侵染时期有7 850个差异表达基因。对差异表达基因的编码蛋白进行预测分析,345个为经典分泌蛋白,占总数的4.39%。经典分泌蛋白氨基酸长度在各区间段分布较为均匀,而符合效应子筛选条件(<300和半胱氨酸残基数≥4为筛选条件,并过滤已经注释过功能的蛋白后,在果生刺盘孢中筛选出17个候选效应子。2)随机抽样选取9个候选效应子做qRTPCR分析,结果显示9个基因均为上调表达,与转录组数据结果相符。3)克隆出4个候选效应子,并通过烟草瞬时表达系统和DAB染色,验证出4个候选效应子均能引起植物细胞坏死。【结论】果生刺盘孢在侵染油茶时期有多个效应子表达,而在分生孢子时期此类蛋白多为不表达或少量表达,这验证了效应子是植物与病原菌相互作用的关键因素。

【目的】研究湖南省油茶炭疽病病原,为该病害的防控提供依据。【方法】采集湖南省长沙、株洲、浏阳、永州、怀化、常德、常宁等油茶主产区9个样地的典型油茶炭疽病叶,分离纯化叶片病健交界处的真菌菌株,观察菌株在(PDA)培养基上的菌落、分生孢子及附着孢的形态特征,确定为炭疽属真菌。进一步对炭疽属菌株进行柯赫氏法则验证,确定油茶炭疽病病原菌菌株。对获得病原菌的r DNA-ITS、CAL和GAPDH 3个基因进行PCR扩增和测序,得到的基因序列与GenBank中已有模式炭疽属菌株序列按照3个基因一致的顺序拼接后采用PA