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[期刊] 林业科学
[作者]
王建勇 谭晓风 陈鸿鹏 曾艳玲 龙洪旭 梅芳芳 刘凯
【目的】油茶种仁含油率较低且易遭逆性环境等的影响,这些都严重影响和制约了油茶产业的快速发展。丙二酰单酰Co A:ACP转酰酶是脂肪酸合成酶(FASⅡ)复合体的组成酶之一,在脂肪酸合成中起着装载作用,它的酶促反应产物丙二酰单酰ACP是脂肪酸合成关键组成部分。开展该基因的功能研究,能为油茶的分子遗传育种奠定基础。【方法】以油茶品种‘华硕’种子为材料,借助其种子转录组和表达谱数据库,通过RACE技术,克隆丙二酰单酰Co A:ACP转酰酶基因并对该基因进行生物信息学分析。利用常规的酶切连接技术构建基因的原核表达载体,并利用α酮戊二酸脱氢酶(KDH)偶联系统测定表达产物的酶活性。【结果】丙二酰单酰Co ...
[期刊] 林业科学
[作者]
彭江 孙一铭 宋锋 李鹏 饶灿 孙敏
尾巨桉(Eucalyptus urophylla×E.grandis)属于桃金娘科(Myrtaceae)桉属(Eucalyptus)速生树种之一,其油腺细胞能够产生1,8-桉叶素、β-桉叶醇和α-蒎烯等主要成分的挥发性精油。桉树精油具有疏风解热、祛湿解毒、抑菌消炎、防腐止痒的医药功效(Ogunwande et al.,2005);同时作为牙膏、口香糖、化妆品及食品的香精来源。因此,开发尾巨桉精油具有重要的经济价值,但工业上桉树精油产率一般为0.8%～5%,相对较低(宋永芳,1990);而遗传代谢工程已成为提高植物次生代谢产物含量的有效手段之一。
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
陈博雯 盖颖 蒋湘宁
肉桂酰-辅酶A还原酶(Cinnamoyl Co-A Reductase,CCR)是木质素合成中的关键酶,根据植物中CCR保守序列设计引物,以尾叶桉GLU4嫩茎为材料克隆到其CCR基因,命名为Eu CCR。该基因g DNA长2 918bp,c DNA长1 045 bp,CDS区编码336个氨基酸。EuCCR核酸序列与Gen Bank已登录的桉属植物CCR基因同源性达到96%以上,与伞房属、杯果木属植物CCR的同源性达85%以上,其编码的氨基酸序列经比对发现具有完整FR_SDR_e结构域及NADP结合位点和底物结合位点,与可可树等植物中CCR基因编码序列同源性也在84%以上,确定为CCR基因。对E...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
刘美兰 谭晓风 龙洪旭
以葡萄桐近成熟种子为材料,根据油桐转录组数据库中已知部分烯脂酰CoA还原酶(enoyl-CoA reductase,ECR)序列,利用RACE克隆技术,克隆得油桐烯脂酰CoA还原酶的全长c DNA序列,命名为VfECR,并对该基因的核苷酸序列及其相应氨基酸序列的理化性质、疏水性/亲水性、跨膜结构域、蛋白质的二、三级结构、亲缘关系进行分析。结果表明:该基因全长1 154 bp,含有一个933 bp的开放阅读框,编码310个氨基酸,属于不稳定的亲水性蛋白,含有6个明显的跨膜结构域,且与陆地棉ECR蛋白的同源性最高,亲缘关系最为接近。同时利用RT-qPCR对VfECR基因的组织特异性和种子发育过程中...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
牛蓓 徐莺 宋君 郭晓恒 符佳 邹亮 陈放 高孝锦 郭静
硬脂酰－酰基载体蛋白脱饱和酶是植物脂肪酸合成代谢的关键酶，直接调节膜脂和贮脂中饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸的比例。本研究通过ＲＴ－ＰＣＲ及ＲＡＣＥ技术，克隆乌桕硬脂酰－酰基载体蛋白脱饱和酶（ＳＳＳＡＤ）的ＣＤＮＡ全长序列。结果显示，该序列包含１个１１９１ ｂＰ的完整的开放阅读框（ＧＥＮｂＡＮｋ登录号为ＥＦ０７９６５５），编码３９６个氨基酸，含３３个氨基酸的叶绿体转移肽。其成熟肽含有３６３个氨基酸，推测其分子量为４１．５ ｋＤＡ，等电点为５．４２。同源性分析及同源建模数据显示ＳＳＳＡＤ和其它物种的ＳＡＤ有较高的同源性，含有１个保守结构域。构建原核表达载体ＰＭＡＬ－ＳＳＳＡＤ，转入大肠杆菌ＤＨ５α，并．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
董飞 祭芳 吴季荣 殷宪超 徐剑宏 史建荣
【目的】克隆Tri101并通过原核表达获得纯化蛋白,通过免疫SPF大白兔获得高效价、高灵敏度的多克隆抗体,为Tri101蛋白及转Tri101作物的检测提供抗体基础【。方法】以禾谷镰刀菌(Fusarium graminearium)F3210为材料,PCR法获得Tri101并连接至表达载体pET29a(+),将重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)后利用IPTG进行诱导表达。利用纯化表达产物制备多克隆抗体。【结果】SDS-PAGE分析结果表明,Tri101在大肠杆菌BL21(DE3)中得到表达,重组蛋白大小为50 kD左右,以包涵体形式存在。利用HisTrap亲和柱纯化重组蛋白,最佳咪唑洗脱...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
蒋霞云 袁襄南 魏福卫 周培根 邹曙明
采用快速扩增cDNA末端(RACE)克隆技术,通过设计甲壳素脱乙酰酶简并引物,从总状毛霉(Mucor racemosus)菌丝体中克隆了CDA2的基因(EF468349)及其全长cDNA(DQ678929)序列。与已获得的总状毛霉菌cda1基因相比,cda2基因中不含内含子。总状毛霉cda2全长cDNA为1 378 bp,包含23 bp 5’端非翻译区、1 254 bp开放阅读框和101 bp 3’端非翻译区,编码一条由418个氨基酸残基组成的多肽链,其N端包含一段21个氨基酸残基组成的信号肽,在150～272氨基酸残基区存在一个多糖脱乙酰酶保守结构域。通过构建pET28a-cda2表达载体和...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘偲 曾祥玲 郑日如 罗靖 王彩云
为探讨桂花花瓣醇酰基转移酶基因的功能，从桂花品种‘柳叶金桂’花瓣中克隆得到１个醇酰基转移酶基因，命名为ＯｆＡＡＴ１，该基因全长１ ３８６ｂｐ，编码４６１个氨基酸；通过ｑＲＴ－ｐＣＲ分析发现，ＯｆＡＡＴ１基因在花器官尤其在花瓣中大量表达，而在幼叶中基本不表达；其表达量随着花朵的开放逐渐增加，至盛花期达到最大，末花期又减少；ＯｆＡＡＴ１基因的表达量在盛花期还呈现明显的昼升夜降的节律性变化；进一步的氨基酸序列比对和系统进化树分析表明，该基因编码的氨基酸存在酰基转移酶ｂＡＨＤ家族特有的保守结构域，与矮牵牛ｐＨＣｆＡＴ亲缘最近，其次是大豆ＧｍＣＨＡＴ和马铃薯ＳＴＣＨＡＴ；结合桂花花瓣香气挥发性成分分析，．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
董丽丽 龚凌燕 陈磊 涂佳丽 张水明
［目的］肉桂酰辅酶Ａ还原酶（ＣＣＲ）是木质素合成的关键酶。本文旨在通过克隆和鉴定石榴ＣＣＲ基因（Ｐｇ ＣＣＲ）来探究石榴木质素的合成机制以及培育软籽石榴新品种。［方法］以石榴品种‘红玉石籽’（ＰｕｎｉＣＡ ｇＲＡｎＡｔｕｍ‘ＨｏｎｇｙｕｓＨｉｚｉ’）籽粒为材料，利用ＲＡＣＥ和Ｒｔ－ＰＣＲ的方法，获得Ｐｇ ＣＣＲ基因的全长序列。通过实时荧光定量ＰＣＲ分析Ｐｇ ＣＣＲ基因在不同品种、不同组织、籽粒不同发育时期的表达水平。［结果］Ｐｇ ＣＣＲ基因Ｃ ＤｎＡ全长序列１ ０１７ ｂＰ，编码３３８个氨基酸，包含被认为是ＣＣＲ蛋白催化位点的保守序列ＫｎＷｙＣｙｇＫ。系统进化树分析表明，Ｐｇ ＣＣＲ与其他物种．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
吴蓓 李梦瑶 王广龙 黄蔚 熊爱生
［目的］肉桂酰辅酶Ａ还原酶ＣＣＲ（ＣｉｎｎＡｍｏｙｌ－Ｃｏ Ａ ＲｅｄｕＣｔＡｓｅ）在植物木质素代谢中起重要的作用，能够将羟基肉桂酸还原生成肉桂醛。本文目的是研究不同芹菜中肉桂酰辅酶Ａ还原酶基因ＡｇＣＣＲ在芹菜中组织表达和非生物胁迫过程中的响应情况。［方法］以２个芹菜品种‘六合黄心芹’和‘文图拉’为材料，分别克隆出编码肉桂酰辅酶Ａ还原酶的基因ＡｇＣＣＲ。利用荧光定量ＰＣＲ分析不同芹菜组织和２种芹菜在高温、低温、干旱和盐胁迫下ＡｇＣＣＲ的表达情况。［结果］序列分析表明，‘六合黄心芹’和‘文图拉’中ＡｇＣＣＲ基因均含有１个长度为１ ０１４ ｂＰ的开放阅读框，编码３３７个氨基酸，二者的核苷酸位点有３．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
危蓉萍 杨东航 卜莹莹 纪燕玲 于汉寿
［目的］通过表达载体ｐ ＥＴ－２８ａ（＋）在大肠杆菌中克隆表达蜜蜂螺原体ＳｐｉｒｏｐｌａＳｍａ ｍＥｌｌｉｆＥｒｕｍ ＣＨ－１中可能与致病相关的几丁质脱乙酰酶（ＣＨｉＴｉｎ ｄＥａＣＥＴｙｌａＳＥ，Ｃｄａ）基因ＣＨｉｄ，并测定其部分酶学性质，为进一步研究该基因在蜜蜂螺原体致病过程中的作用奠定基础。［方法］利用ｏｖＥｒｌａｐ ＥｘＴＥｎＳｉｏｎ ｐＣｒ（ｏＥ－ｐＣｒ）定点突变技术，在引物设计时插入目的突变，通过３次ｐＣｒ获得突变后的目的片段，测序验证后构建重组质粒ｐ ＥＴＣＨｉｄ，挑取ＢｌＣＨｉｄ表达菌株。ｉｐＴＧ诱导表达目的蛋白，ｎＴａ－ｎｉ２＋柱纯化，ＷＥＳＴＥｒｎ ＢｌｏＴＴｉｎＧ验证，紫．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
喻文娟 俞菊华 李红霞 李建林 唐永凯 于凡 何枫 傅纯洁
为探究脂酰辅酶A脱氢酶对脂肪酸β氧化的调控机制,使用RT-PCR在鲤鱼肝脏克隆了脂酰辅酶A脱氢酶家族中的MCAD和LCAD全长c DNA序列,阅读框分别为1 275,1 326 bp,编码424,441个氨基酸,分析表明他们均具备ACADs家族的特征序列:FAD结合位点、底物结合位点、催化位点等,与斑马鱼MCAD和LCAD的一致性分别为93.16%和94.56%。实时定量RT-PCR结果表明,MCAD和LCAD主要在肝脏和心脏表达;不同脂肪源对MCAD的表达没有明显影响,但鱼油对LCAD的表达有明显的刺激
[期刊] 中国农业科学
[作者]
齐玉洁 张鑫 杨夏 高中山 贾惠娟
【目的】根据国际桃基因组序列信息,进行克隆和表达分析与桃果实内酯类合成相关的果肉组织酰基辅酶A氧化酶(Acyl-CoA oxidase,ACX)的5个候选基因,为进一步开展桃香气物质代谢分子机理的研究提供新的研究方向。【方法】根据Phytozome(www.phytozome.org/peach)发布的桃ACX全基因组序列设计特异引物对5个基因全长进行克隆测序,与参考编码序列进行比对和编码蛋白性质进行分析,并对这些成员进行组织特异性表达分析。【结果】获得了桃果肉组织中表达的5个ACX编码基因全长序列,PpACX1、PpACX3的CDS区没有突变,PpACX2核苷酸序列871位处A突变为G,导致...
关键词：
桃 酰基辅酶A氧化酶 基因克隆 序列分析
[期刊] 中国水产科学
[作者]
冯田田 陶易凡 马昕羽 路思琪 张幸 刘文婷 潘奕凡 强俊
硬脂酰辅酶A去饱和酶(stearoyl-CoA desaturates, SCD)是单不饱和脂肪酸合成的关键限速酶,它在调节肝脏脂肪生成、脂肪酸代谢和脂质氧化方面发挥着重要作用。在本研究中,利用RACE技术克隆了吉富罗非鱼(Oreochromisniloticus)的完整scdcDNA序列,qRT-PCR分析了组织表达特点。为了验证scd基因的功能,利用CRISPR/Cas9技术构建scd基因敲除斑马鱼模型,研究了F3突变体的表型和基因表达变化,并结合高脂饲料实验验证了scd基因缺失后斑马鱼脂代谢的调控机制。结果显示,吉富罗非鱼scdcDNA序列全长1333bp,其中包括173 bp、1008 bp、152 bp的5'非编码区、开放阅读框和3′非编码区,编码335个氨基酸。scd基因在雄性和雌性罗非鱼的各组织中都有表达,在肝脏内表达量最高,脾脏内表达量最低。利用CRISPR/Cas9构建了scd基因敲除的斑马鱼(Daniorerio)模型进行功能验证,与野生型[SCD(+/+)]斑马鱼相比,纯合型[SCD~((–/–))]斑马鱼腹部明显膨大。Western blot和qRT-PCR结果显示,与SCD(+/+)组斑马鱼相比, scd基因在SCD~((–/–))组斑马鱼中表达显著降低(P
[期刊] 水产学报
[作者]
李燕 周志刚
为了探讨在氮饥饿对缺刻缘绿藻花生四烯酸(ArA)合成与积累的影响,通过cDNA末端快速扩增(RACE)和设计简并引物进行反转录(RT)-PCR扩增,克隆了编码该藻异质型乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)的2个生物素羧基载体蛋白(BCCP)的基因序列。其中MiBCCP1基因的cDNA序列长1 267 bp,包含的5'-非翻译区(UTR)长44 bp,3'-UTR长524 bp,开放阅读框(ORF)长699 bp,编码232个氨基酸并含有45个氨基酸序列的叶绿体定位信号肽;预测成熟蛋白分子量约为20 ku。MiBCCP2基因的ORF长789 bp,编码263个氨基酸并含有49个氨基酸的叶绿体定位信号...
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