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[期刊] 华北农学报
[作者]
徐玲娜 汪阳东 陈益存 周冠 张小平
本研究测得油桐叶片和种仁总糖含量分别为75.20,32.80 mg/g,总酚含量分别为15.75,0.57 mg/g,在此基础上对TRIzol法、CTAB-LiCl法进行改良,分别提取出高质量的种仁、叶片总RNA,并与异硫氰酸胍法及NOGEN试剂盒法进行比较,结果表明:改良TRIzol法提取的油桐种仁总RNA OD260/OD280稳定在1.9～2.0,28S rRNA和18S rRNA条带清晰完整,RNA产率较高,改良CTAB-LiCl法得到的种仁总RNA有部分降解,异硫氰酸胍法则对小分子盐类去除不够充分,而试剂盒提取出的油桐种仁总RNA有少许降解且有DNA杂质污染。上述4种方法中只有改良C...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
尹慧 陈莉 李晓艳 陈秋明 义鸣放
为筛选出适合百合叶片RNA提取方法,以铁炮百合‘白天堂’组培苗叶片为材料,比较了改进的CTAB、SDS及传统的Trizol、CTAB、SDS方法提取RNA的效果。结果表明:不论传统及改进的SDS法和Trizol法均不能有效去除百合叶片组织中的多糖、蛋白等杂质,传统CTAB法提取RNA存在DNA污染。针对百合叶片组织富含多糖多酚的特点,改进了CTAB法,采用醋酸钠及无水乙醇去除多糖,酚/氯仿反复抽提去除蛋白,DNaseⅠ去除DNA,LiCl有效沉淀RNA。采用此方法提取的RNA条带清晰,经紫外光谱分析D260/D280比值为2.0,D260/D230为2.1,电泳28S、18S条带清晰,比值约为...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈美霞 陈富成 颜克伟 刘晓倩 徐建堂 陶爱芬 祁建民
红麻叶片中富含多糖、多酚和其他次生代谢物质,影响其RNA的产量和质量.本研究应用CTAB法、热硼酸法、SDS法、Trizol法和商品化试剂盒5种方法提取福红992幼嫩叶片总RNA,并对各方法提取效果进行比较.结果表明,热硼酸法效果最佳,其次是CTAB法和SDS法,而Trizol法、试剂盒提取效果不理想.采用热硼酸法提取的红麻叶片总RNA能够成功进行反转录和制备cDNA.
关键词：
红麻 叶片 总RNA提取
[期刊] 华北农学报
[作者]
齐建双 王彦玲 铁双贵 卢彩霞 岳润清 韩小花 燕树锋 孙若楠
为比较不同方法提取的玉米叶片蛋白质对双向电泳效果的影响。采用TCA-丙酮沉淀和TRIzol试剂盒2种方法,提取国审玉米品种郑单958叶片全基因组蛋白质,并对提取的蛋白质样品进行双向电泳。结果表明:TCA-丙酮方法提取的蛋白质一向水平聚焦电压上升缓慢且达不到程序设置的电压,而TRIzol试剂盒方法实时监测图与程序设置图相吻合;对电泳胶图分析后可知,TRIzol试剂盒法分离出的蛋白点多于900个,低丰度蛋白质得到充分显现,大多数蛋白点分子量为20~80 k Da,p H值为4~7,蛋白点的形状较规则;TCA-丙酮沉淀法分离出的蛋白点仅有350个,表明样品中蛋白质分离种类较少,高丰度蛋白质过度显现,...
关键词：
玉米叶片 蛋白质提取方法 双向电泳
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李佳 沈斌章 韩继祥 甘莉
一种有效提取油菜叶片总ＤＮＡ的方法李佳，沈斌章，韩继祥，甘莉（华中农业大学中心实验室武汉４３００７０；华中农业大学农学系武汉４３００７０）关键词ＤＮＡ，提取方法，试剂，国产，油菜ＡＥＦＦＥＣＴＩＶＥＰＲＯＣＥＤＵＲＥＦＯＲＥＸＴＲＡＣＴＩＮＧＴＯＴＡ...
关键词：
DNA,提取方法,试剂,国产,油菜
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
杨昕悦 左文中 张帆航 米小琴 谭晓风 李树战 李乐生 李泽
【目的】研究油桐对土壤铬胁迫的响应机制，为油桐修复铬污染的土壤环境提供技术支撑。【方法】以1年生油桐盆栽苗为试验材料，研究外施不同浓度铬含量(0、50、100、200和500 mg·kg~(-1))土壤对油桐幼苗光合作用、叶绿素含量、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量、相对电导率、气孔张开率和叶片结构的影响。【结果】1)与对照相比，在铬浓度为50 mg·kg~(-1)的土壤下，油桐幼苗生长无显著差异；2)在铬浓度为100 mg·kg~(-1)的土壤下，油桐叶片的净光合速率(P_n)、叶绿素含量、可溶性蛋白含量显著降低(P
关键词：
油桐 铬胁迫 叶片解剖结构 富集
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
尹泽超 王玉婷 王耀杰 桑利群 罗秋香 孟凡娟
为了获取高质量的西藏巨柏叶片蛋白质,分别采用酚抽提法、TCA/丙酮法和改良的TCA丙酮法3种方法对西藏巨柏叶片进行总蛋白的提取,同时利用蛋白试剂盒(The 2-D Quant Kit)对蛋白质的浓度和纯度进行了分析测定,并通过蛋白质斑点数量及分布特征,最后确定了最佳蛋白提取方法。结果表明:对样品研磨的精细程度、丙酮清洗沉淀次数等操作细节均能影响提取结果,同时采用改良的TCA丙酮法提纯后的结果最佳。说明改良的TCA丙酮法可应用于西藏巨柏叶片后续的蛋白质组学研究。
关键词：
巨柏 叶片 蛋白 双向电泳
[期刊] 林业科学研究
[作者]
张启燕 高暝 吴立文 汪阳东 陈益存
[目的]对油桐种仁不同生长时期的油体蛋白进行定量蛋白质组研究,鉴定油桐种仁油体蛋白质的组成,探讨不同生长时期种仁油体蛋白质组的表达差异。[方法]采用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术提取3个不同生长时期的油桐种仁油体蛋白质组,质检合格的蛋白经酶解、iTRAQ标记后进行高效液相、质谱检测。利用Mascot软件对转换的二级质谱数据进行蛋白质鉴定,通过iTRAQ定量寻找差异表达蛋白,并对差异蛋白进行GO功能注释、KEGG代谢通路和聚类分析。[结果]在3个生长时期成熟油桐种仁油体亚细胞器中共鉴定出5 632个蛋白,其中,2 639个具有催化活性,401个蛋白质参与脂肪酸及油脂的合成与代谢。在种仁成熟的3个生长时期中,共有3 430个油体蛋白的表达量发生了显著变化。油体差异蛋白的富集分析发现,具有催化活性这一分子功能的差异蛋白主要在油脂积累初期发生富集。在桐油和桐酸积累时期,参与脂肪酸代谢和油脂贮藏的酰基辅酶A氧化酶、DGA蛋白和油质蛋白(Oleosin)表达量显著上升,表明这些蛋白在调控桐油和桐酸的积累中可能发挥着关键作用。[结论]获得油桐种仁成熟过程中动态特异的油体蛋白质组表达谱,揭示油体蛋白质组的组成、主要调控桐油合成的关键酶和结构蛋白,为进一步研究油脂的合成与油体的装配等相关机制奠定了基础。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孟晓庆 侯智霞 张兰 朴蕾
【目的】探讨榛子总RNA提取的有效方法,为今后开展榛子的分子生物学等研究奠定基础。【方法】以榛子的成龄叶片、幼嫩叶片和雄花芽为试材,采用植物RNA提取试剂盒、Trizol法、改良的CTAB法Ⅰ、改良的CTAB法Ⅱ、CTAB法和改良的SDS法提取其总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和PCR检测所提取总RNA样品的品质。【结果】除了Trizol法,其他5种方法都能提取到总RNA,但是改良的CTAB法Ⅰ更适合榛子幼嫩叶片、成龄叶片和雄花芽总RNA的提取,此方法提得的总RNA较完整,条带清晰,品质较优,28SrRNA亮度约是18SrRNA的2倍,且无降解现象。经RT-PCR验证,以改良的CT...
关键词：
榛子 总RNA CTAB SDS
[期刊] 林业科学
[作者]
胡志伟 李保国 齐国辉 郭素萍 张雪梅 董丽欣 李杰
对早实核桃"绿岭"种仁充实期叶片与果实(种仁、青皮、硬壳)N,P,K,Ca,Mg,Fe,Zn,Mn等矿质元素含量和果实中不同组织质量的变化规律进行了研究,结果表明:"绿岭"种仁充实期坚果与种仁质量以及脂肪和总蛋白总量分别增加了5.91g(51.39%)、5.53g(73.47%)、4.24g(80.99%)、1.02g(69.24%)。叶片N,K,Fe,Mn含量均呈下降趋势,P,Mg,Zn含量呈上升趋势,Ca含量先降低再升高。种仁中N,P,K,Ca,Mg,Fe,Zn,Mn含量均成降低趋势,种仁中N,P,K,Ca,Mg,Fe,Zn,Mn的总量均呈增加趋势。青皮中N,P,Fe,Mn含量呈下降趋势,...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
钟雅婷 邹东霞 廖旺姣 黄宁 罗辑
[目的]植食性昆虫肠道微生物的多样性与其食物密切相关,本研究通过探讨油桐尺蛾(Buzura suppressaria)幼虫肠道菌群及其取食的桉树叶内生菌群的多样性,分析两者之间的关系。[方法]利用Illumina Miseq技术对油桐尺蛾5龄幼虫肠道和桉树叶部内生的细菌16s rDNA和真菌ITS rDNA进行测序,分析油桐尺蛾肠道和桉树叶部内生的细菌和真菌的多样性和丰度。[结果]油桐尺蛾肠道细菌共注释到6门、11纲、19目、38科、43属,真菌共注释到8门、29纲、67目、159科、257属;桉树叶部内生细菌共注释到10门、19纲、26目、54科、74属,真菌共注释到8门,31纲,79目,171科,291属。桉树叶内和油桐尺蛾肠道中均发现桉树主要病害病原菌所属菌属,分别为炭疽菌属(Colletotrichum)、假单胞菌属(Pseudomonas)、假尾孢属(Pseudocercospora)、短梗霉属(Aureobasidium)、壳针孢属(Septoria)、毛色二孢属(Lasiodiplodia)、新壳梭孢属(Neofusicoccum)。[结论]油桐尺蛾肠道的细菌、真菌的多样性和丰度与桉树叶之间存在差异,桉树叶对油桐尺蛾肠道微生物的群落结构有重要影响,而携带某些病原菌的油桐尺蛾啃食或其排泄物接触可能是导致该病原菌侵染健康桉树叶的原因。
[期刊] 华北农学报
[作者]
段西飞 王静华 崔江慧 薛薇 李霄 常金华
介绍一种高粱总RNA的提取方法。该方法以CTAB为主要提取试剂,成功地提取出了高粱叶片的总RNA。获得的RNA条带清晰,A260/A280在1.8~2.0。这些结果表明提取的总RNA质量好,完整性好,可用于cDNA文库的构建、差异表达等工作。
关键词：
高粱 总RNA CTAB 提取
[期刊] 林业科学
[作者]
陈昊 谭晓风
【目的】油桐种仁中产出的桐油经济利用价值极高。桐油中α-桐酸的含量高达70%,然而植物体内α-桐酸代谢通路的研究还未见报道,这对直接筛选油桐α-桐酸代谢通路相关酶基因造成一定的困难。α-亚麻酸作为α-桐酸的同分异构体,其代谢通路的研究则较为深入,能为α-桐酸代谢通路的解析提供参考。因此,本研究期望在油桐种仁转录组数据的基础上,解析油桐的α-亚麻酸代谢途径,为油桐α-桐酸代谢机理的阐明提供理论参考。此外,通过调控这些基因的表达模式以及开发与之紧密连锁的分子标记,可大大加快油桐遗传改良和分子育种的进程。【方法】采用RNA-Seq技术对油桐种仁3个不同油脂合成期的转录组进行比较,获得大量差异表达的U...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
周冠 汪阳东 陈益存 李鹏 张姗姗 张小平
以木本油料植物油桐为研究对象,通过预实验选择种子成熟过程中脂肪酸转变关键时期,构建油桐种仁cDNA文库,并进行部分测序。初级文库的滴度为1×106pfu.mL-1,重组率为99.7%,插入片段大小为0.5~2.5 kb,平均约1 kb。通过测序获得的功能基因类型主要包括抗性基因、油体蛋白基因、贮藏蛋白基因及种子发育相关基因等,还有大量的未知功能基因和其他基因存在,各类基因的表达丰度不一。着重对首次分离到的油桐油体蛋白oleosin基因序列进行了同源性和蛋白结构预测分析。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
占志勇 陈益存 韩小娇 崔琴琴 汪阳东
为奠定油桐蛋白质组学研究的基础,针对影响油桐种仁蛋白质分离效果的几个重要因素进行单因素优化实验,建立了油桐种仁蛋白质组分离效果良好的双向电泳技术平台。实验结果显示:采用TCA-丙酮结合酚抽法提取的油桐种仁蛋白质,经裂解液(7 mol.L-1尿素,2 mol.L-1硫脲,4%CHAPS,65 mmol.L-1DTT,2%IPG buffer)裂解之后,上样700μg聚焦70 000 Vh,经过SDS-PAGE电泳(分离胶浓度15%,恒功率5 W,电泳时间8 h)后有良好的分离效果,能满足开展后续蛋白质组学研究的实验要求。
关键词：
油桐 双向电泳 蛋白质组学
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