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[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
姜春宁 郑彩霞 包仁艳
采用4种pH值和2种SDS浓度的TrisHCl提取液、TCA丙酮溶液对油松胚珠蛋白质进行提取.经SDSPAGE电泳检测,提取液pH值对提取效果的影响与SDS浓度有关.低浓度SDS(0.2%)需要提高提取液的pH值,pH8.8的效果最好.SDS浓度提高到2%,pH值对蛋白提取量影响不明显,电泳条带都很清晰,同时分子量为14.4、16.1、17.1kD的蛋白条带明显增强.经IEFSDSPAGE凝胶电泳检测,TCA丙酮沉淀法所得图谱效果好、干扰少、蛋白点数多;用pH8.8TrisHCl提取液提取时,低浓度SDS(0.2%)比高浓度SDS(2%)所得图谱效果好.
[期刊] 实验技术与管理
[作者]
尹燕霞 佟丽 李小蒙 向本琼
对分子筛层析实验进行改革,优化分子筛层析分离标准蛋白的实验条件、建立良好的标准曲线。以分子筛Sephacryl S-200 HR作为层析填料,对蛋白、蛋白浓度、样品上样量、上样顺序、流速等关键因素和环节进行了摸索,通过实验条件的筛选和优化获得了线性关系较好的标准曲线和洗脱峰图谱。该方法具有较高的分辨率和重复性,为进一步研究层析技术奠定了基础,在本科生的实验教学中取得了良好教学效果。
关键词：
分子筛层析 标准曲线 实验教学
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
陈申如 张其标 倪辉
研究结果表明 ,酸法提取鲢鱼鱼肉蛋白质时 ,蛋白质酸溶解的最适条件是 :酸液 pH值为2 39,溶解时间为 1 5h ,固液比为 1∶9,溶解温度为 4℃ ,鱼肉蛋白质等电点沉淀的最适 pH值为5 74。用酸法提取的鲢鱼肉蛋白质无腥味 ,色泽洁白 ,蛋白质产率高 ,可达 90 %左右。
关键词：
酸法 鲢鱼 蛋白质
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
孙智达 M.A.H.Ismond
油菜在中国和加拿大都是非常重要的经济作物。菜籽饼中蛋白质含量在２８％ ～４５ ％ 之间，但也含大量抗营养物质，其中多酚类物质对蛋白质的色泽影响较大，到目前为止，它仅能部分被人们用来作为动物饲料。本研究采用新的提取方法，即先用８０ ％ 乙醇脱除酚类物质，然后以０．０１～０ ．１ ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ 和０ ．０１ ～０ ．１ ｍｏｌ／ＬＮａＨ２ＰＯ４ ，ｐＨ 值控制在５ ．０ ～６ ．０ 进行提取。结果显示０．０１ ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ 和０ ．０１ ｍｏｌ／ＬＮａＨ２ＰＯ４ ，ｐＨ 为５ ．０ 时提取效果最佳。此种方法在有效脱除营养物质后，可得到优质菜籽蛋白质
关键词：
菜籽饼 蛋白质 理化特性 多酚
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
李莉 周燕 高述民 王瑛 刘艳
该文采用石蜡切片法对油松卵细胞发育过程中蛋白泡的动态变化进行了研究,并利用蛋白质双向电泳技术和ImageMasterTM2D Platinum软件初步分析了与卵细胞发育相关的特异蛋白.结果表明:5月初颈卵器开始形成,其内充满液泡,随着液泡的消失,蛋白泡从卵细胞的下部和边缘出现,在精核即将进入卵细胞时蛋白泡数量达到高峰,受精时蛋白泡开始减少,逐渐出现空泡现象.精卵结合之后,蛋白泡几乎全部成为空泡.伴随着蛋白泡的变化,胚内的糖类物质和蛋白质也呈现出有规律的时空变化.蛋白质双向电泳图谱表明:从颈卵器形成到卵细胞受精之后,4个新蛋白点出现,10个蛋白点消失,10个蛋白点表达量减弱.
关键词：
油松 卵细胞 蛋白泡 特异蛋白
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
李丽杰 苏宏 马怀宇 吕德国
为开展山定子(Malus baccata Borkh.)根系蛋白质组学研究,以当年生15片真叶的山定子实生苗白色幼嫩根系为试材,采用TCA-丙酮沉淀法、酚抽提法和Trizol抽提法3种方法提取其总蛋白质,并对样品上样量、IPG胶条的p H值范围和等电聚焦参数进行优化,建立适用于山定子根系的双向电泳技术体系。结果表明:采用Trizol抽提法提取的蛋白质产率最高,可达3.15mg·g-1FW,且其SDS-PAGE图谱明显优于其他两种方法 ;选用800μg的上样量,17 cm p H值4~7的IPG胶条和改进后的等电聚焦程序所得到的二维电泳图谱蛋白点最多,最清晰,分辨率最高。
关键词：
山定子 根系 蛋白质 提取 双向电泳
[期刊] 林业科学
[作者]
王银翠 周国娜 张斌 陈明叶 高宝嘉
【目的】研究自然环境条件下剪叶和油松毛虫不同取食刺激程度双重诱导对油松体内蛋白质表达的影响，揭示油松诱导防御反应的蛋白质基础。【方法】在河北省平泉县的油松－山杏混交林中，选取１５年生左右生长势一致的油松，进行树上套笼饲养１０头、３０头油松毛虫和剪叶处理，以未处理油松为对照，采用双向电泳法测定油松体内蛋白质表达差异。【结果】通过蛋白质点表达量的计算，与对照相比，油松毛虫取食及剪叶刺激后，均有特异表达蛋白点、消失蛋白点、上调蛋白点及下调蛋白点，但不同处理间蛋白点的表达差异不同。对差异蛋白点进行质谱鉴定，数据库检索结果表明，油松毛虫取食后特异表达的蛋白点是叶绿体ＡＴＰ合酶ＣＦ０β亚基、抗坏血酸过氧化．．．
[期刊] 林业科学
[作者]
刘高强 魏美才
采用缓冲液法对马尾松毛虫幼虫中的蛋白质进行提取研究。结果表明:原料粗细度、提取温度、提取时间和沉淀pH对幼虫蛋白质的提取率有显著影响(P
[期刊] 华北农学报
[作者]
董婧 逯晓萍 吕二锁 薛春雷 李俊伟
为了优化玉米叶片双向凝胶电泳技术条件，通过比较３种总蛋白提取方法对玉米双向电泳结果的影响，并对蛋白质上样量、ＩＥＦ等电聚焦条件及ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶浓度等参数进行探索、优化；结果发现，与酚提取法和磷酸缓冲液法相比，采用改进的ＴＣＡ／丙酮法提取总蛋白操作简单、方便，所得的２－ＤＥ图谱中蛋白质点数量多、背景清晰，是一种适用于提取玉米苗期叶片总蛋白的有效方法；同时筛选出：第一向ＩＥＦ等电聚焦样品上样量为８００μｇ，聚焦条件为２０ ０００ Ｖ／ｈ，在浓度为１２．５％的ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，能够在１７ Ｃｍ的ＩＰｇ胶条上获得背景低、分辨率较高、重复性好的双向电泳图谱，该优化体系适用于玉米叶．．．
关键词：
玉米 叶片 蛋白质提取 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
石海波 王云生 冯勇 高聚林 白海 苏二虎 张来厚 赵瑞霞 刘志雄 黄灵忠 姜丽丽
为了获得玉米籽粒双向电泳中蛋白质提取的最佳方法,建立最佳的玉米籽粒蛋白双向电泳技术体系,对酚抽提法、三氯乙酸/丙酮沉淀法(TCA/丙酮沉淀法)和可溶性蛋白提取法3种不同提取方法得到的蛋白质进行了分析,并在相同条件下进行双向电泳比对分析,结果表明:可溶性蛋白提取法获得的蛋白纯度高、浓度适中、双向电泳蛋白质点最丰富,最适合双向电泳研究;利用可溶性蛋白提取法获得的蛋白,对第一向等电聚焦参数等条件,以及不同p H值范围的IPG预制凝胶条进行了比较分析,结果表明:采用p H值3~10的IPG预制凝胶条时,采取电压梯度上升的方式,总聚焦70 000 Vhs、上样量800μg效果最佳,采用p H值4~7的I...
关键词：
玉米 籽粒 蛋白组学 双向电泳
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王珊珊 郝宇涵 任婧祺 郭春深 朱延殊 范海延
双向电泳(2-DE)是蛋白质组学研究的重要支撑技术之一。为建立适于黄瓜根系蛋白质组分析的双向电泳技术,对黄瓜根系蛋白质样品提取方法、裂解缓冲液配方及SDS-PAGE分离胶浓度等参数进行研究。结果表明:采用TCA/丙酮法提取黄瓜根系中的蛋白质,裂解缓冲液为8mol·L-1尿素、2mol·L-1硫脲、2%IPG Buffer、4%CHAPS、1%TBP、65mmol·L-1DTT、2mmol·L-1EDTA、0.001%溴酚蓝和1%鸡尾酒,SDS-PAGE分离胶浓度为11%时,可获得分离效果较好的双向电泳图谱。该技术条件为适合黄瓜根系蛋白分离的较优双向电泳体系。
关键词：
黄瓜根系 蛋白质组 双向电泳
[期刊] 西南农业学报
[作者]
朱佳杰 沈夏霜 付强 周宇 谭芸 甘西
以吉富罗非鱼为研究对象,通过对其肝脏蛋白质的提取方法、等电聚焦程序和IPG胶条pH选择这几个关键环节的优化探索,建立了吉富罗非鱼肝脏蛋白质组双向电泳技术体系。结果表明:①采用液氮研磨法比匀浆器匀浆法提取蛋白质的效果更好;②聚焦时延长除盐时间至10 h,同时升高电压至8000 V,可获得清晰的电泳图谱;③通过双向电泳检测到吉富罗非鱼肝脏的蛋白点主要分布于pH值4.0~7.0之间。该技术体系的建立为今后开展罗非鱼蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。
关键词：
吉富罗非鱼 肝脏 蛋白质组学 双向电泳
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
薛宝贵 黄智慧 周洲 马爱军
通过对表皮蛋白质提取方法、不同裂解液配方、等点聚焦程序和上样量等条件的对比试验,建立及优化了大菱鲆表皮组织蛋白质的双向电泳体系。试验采用改良的TCA/丙酮和超声波提取相结合的方法提取大菱鲆表皮组织的全蛋白,裂解液配方根据Bio-Rad公司推荐的进行调整,使用17cmpH4~7的IPG胶条被动水化上样,上样量为250μg。等点聚焦程序采用30V线性6h、250V线性2.5h、500V线性1.5h、1000V快速2h、4000V线性3h、8000V快速3h、8000V线性1h、500V24h,凝胶银染后用I mage Master2D Platinum7.0软件进行分析,最终得到较满意的双向电泳图...
关键词：
大菱鲆 表皮组织 蛋白质 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
曾广娟 李春敏 张新忠 陈东玫 赵永波 董文轩
为探索苹果叶片蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的样品制备方法,比较了三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法、改良的Tris-HCl法、酚-甲醇/醋酸铵沉淀法、二硫苏糖醇(DTT)/丙酮法及Tris-HCl法等5种蛋白质的提取方法。制备的样品经SDS-PAGE分离采用银染显色。结果表明,改良的Tris-HCl法在加大PVPP用量和蛋白质提取缓冲液的基础上,将丙酮沉淀蛋白质的时间由30 min增加到1 h,使蛋白质的得率最高为3.243μg/μL,上样量5μL得到的蛋白质条带数量最多,条带最清晰为41条。利用这一改良方法对苹果实生树不同节位蛋白质的动态变化进行了研究,共发现6条蛋白...
关键词：
苹果 SDS-PAGE 蛋白质提取
[期刊] 西南农业学报
[作者]
刘品华 谢景文 康照金 冯亚娟 汪帆
【目的】去除鼠曲草粗多糖中蛋白质的最优方法,是研发的基础。【方法】以蛋白质清除率和粗多糖损失率为指标,进行综合评价。采用碱性法、酸性法、醋酸铅法、三氯乙酸法、Sevag法、酶法,研究了去除蛋白质的效果。【结果】醋酸铅法、三氯乙酸法、木瓜蛋白酶-三氯乙酸法去除蛋白质的效果较好,其蛋白质清除率分别为97.55%、81.97%、100.00%,粗多糖损失率分别为12.17%、5.89%、52.71%。【结论】由综合指标评价可知,其效果依次为醋酸铅法、三氯乙酸法、木瓜蛋白酶-三氯乙酸法。
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鼠曲草 粗多糖 蛋白质 去除
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