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[期刊] 中国农业科学
[作者]
柳金伟 焦娇 王蕾 王莲莲 褚小静 梁元存
【目的】阐明氯化汞处理烟草悬浮细胞产生的细胞死亡具有细胞编程死亡(programmed cell death,PCD)的特征和分子机制。【方法】采用形态和生物化学方法观察氯化汞处理细胞后的变化,并采用药理学方法,通过添加抑制剂和抗氧化剂阐明氯化汞引发的信号转导途径。【结果】氯化汞诱导产生的细胞死亡具有PCD特征,包括染色质浓缩、细胞核的TUNEL检测呈阳性和DNA ladder的形成。氯化汞诱导烟草悬浮细胞过氧化氢积累,过氧化氢酶和抗坏血酸等抗氧化剂能降低细胞死亡率。蛋白激酶抑制剂、磷脂酶C和磷脂酶D的抑制剂能显著地降低氯化汞引起的细胞死亡和过氧化氢积累。【结论】氯化汞引起的细胞死亡是一种PC...
关键词：
烟草 氯化汞 细胞编程死亡
[期刊] 中国农业科学
[作者]
魏芳芳 王蕾 王莲莲 柳金伟 梁元存 王玉军
【目的】研究寄生疫霉Phytophthora parasitica分泌的蛋白激发子ParA1诱导烟草悬浮细胞后,磷脂酶C(phospholipase C,PLC)参与ParA1诱导烟草过敏细胞死亡(hypersensitive cell death,HCD)和防卫反应。【方法】采用药理学方法,在烟草悬浮细胞中添加PLC抑制剂,比较烟草悬浮细胞受ParA1诱导后细胞死亡和多种防卫反应的差别。【结果】PLC特异性抑制剂U73122能完全抑制ParA1引起的烟草悬浮细胞死亡,氧迸发、胞外基质碱化和植保素scopoletin(7-羟基-6-甲氧基香豆素)积累都能显著地被抑制,5种防卫基因hin1、hs...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王荣 梁元存 王丹丹 刘爱新 孟庆伟
【目的】研究烟草细胞对parasiticein的反应,了解parasiticein诱导烟草细胞的PCD的发生机制。【方法】用浓度约100nmol·L-1的parasiticein处理烟草悬浮细胞,相差显微镜下观察细胞的形态变化。【结果】发现烟草细胞的细胞膜收缩,与细胞壁间形成空隙,原生质浓缩等;用trypanblue染色后观察到类似现象。对诱导处理的悬浮细胞经DAPI(4,6-diamino-2-phenylindole)染色后,通过荧光显微镜观察,发现细胞核先后表现染色质凝集、形成颗粒状等特征;对处理的悬浮细胞提取基因组DNA并进行琼脂糖凝胶电泳,可观察到梯状的DNA条带(DNA ladde...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
夏启中 张明菊 张献龙 郭小平
棉花悬浮细胞经高浓度细胞分裂素(2mg/LKT或4mg/LKT)处理后第4天大量死亡,培养物呈褐黑色;抽提总DNA,进行琼脂糖胶电泳,结果表明:2mg/LKT和4mg/LKT两处理中有明显的大小为140~180bp及其倍增量片段的DNA“梯”。进行PI和FDA染色显微观察可以看到:2mg/LKT处理中大部分细胞的细胞核较小,核质浓缩,呈棒形或弯月形;胞质浓缩,出现了不对称的质壁分离,且丧失了FDA染色活性。这些结果表明,由高浓度细胞分裂素处理引起的棉花悬浮细胞大规模死亡是一种细胞程序性死亡(PCD)。不同的生理状态(UCSA和BAE)和不同生长时期(指数增长期和静止期)的棉花悬浮细胞对高浓度细...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘菲 刘辉 梁元存 刘爱新 魏芳芳 林琎
【目的】阐明核黄素对烟草悬浮细胞苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)、过氧化物酶(peroxidase,POD)活性以及抗病相关的酚类物质、木质素等次生代谢产物含量的影响。【方法】1mmol·L-1的核黄素处理烟草悬浮细胞,用生物化学、细胞化学和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)等方法测定苯丙烷代谢有关的生理和生化指标。【结果】核黄素处理后,PAL和POD活性明显升高,处理12h和24h后酶活性分别达到峰值;荧光观察细胞壁积累了更多的酚类物质,胞内和胞外scopoletin(7-羟基...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈阳辉 刘静 陈琰 侯春燕 王冬梅
【目的】以感染叶锈菌的小麦叶片细胞间隙液IWF-260作为激发子,刺激小麦洛夫林10悬浮细胞,探讨悬浮细胞受激发子刺激引发的NO变化情况及其产生的可能分子机制。【方法】采用Greiss试剂法及荧光分子探针DAF-2DA标记法检测胞内NO的动态变化,同时借助药物学试验探讨Ca2+和NO的关系。【结果】IWF-260能诱导小麦悬浮细胞产生NO,NO在IWF-260刺激诱发的细胞死亡过程中发挥重要作用。药物学抑制剂试验证明NOS和NR及胞外钙离子内流均与IWF-260刺激小麦悬浮细胞产生的NO有密切关系,且在NO的产生途径中,NR途径为主要途径。【结论】IWF-260能够诱导小麦悬浮细胞产生NO,N...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
任丽梅 陈琰 王冬梅
【目的】采用具有激发子活性的感染叶锈菌的小麦叶片细胞间隙液IWF-260刺激小麦洛夫林10悬浮细胞,探讨细胞感受激发子刺激引发的H2O2迸发情况及其产生的可能分子机制。【方法】采用化学发光法以及荧光探针DCFHDA、HE来研究H2O2的迸发以及NADPH氧化酶的活化。同时借助药物学试验探讨Ca2+和活性氧的关系。【结果】IWF-260可以引起悬浮细胞H2O2爆发,其在IWF-260刺激诱发的细胞死亡过程中发挥重要作用。而质膜NADPH氧化酶的激活以及胞外钙离子的内流与H2O2爆发有密切关系。【结论】IWF-260能够诱导细胞产生活性氧,质膜NADPH氧化酶和胞外钙离子内流参与了活性氧爆发过程。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
程丹丹 孙学娟 高辉远 杨程 张立涛 孟庆伟
【目的】探讨赤星病菌代谢产物(metabolic products of Alternaria alternata,MP)对烟草BY-2细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生和ATP含量的影响以及产生这种影响的原因。【方法】用10%MP处理烟草BY-2细胞,用氧电极检测不同MP处理时间后,烟草BY-2细胞呼吸速率和呼吸途径的变化,同时分析BY-2细胞内H2O2产生和ATP含量等的变化。【结果】MP处理导致了烟草BY-2细胞H2O2爆发和ATP含量下降,此外,MP处理也导致了烟草BY-2细胞总呼吸速率、细胞色素途径(cytochrome pathway)和交替氧...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
师超 徐朗莱
采用200 mmol·L~(-1) NaCl溶液对小麦(Triticum aestivum L.)幼苗进行胁迫处理,然后对胁迫0、12、24、48和72 h的小麦根尖的H_2O_2含量、O_2~-产生速率、膜脂过氧化程度、质膜完整性和根尖DNA降解等进行分析研究。结果表明:在胁迫诱导的小麦根尖中,H_2O_2含量、O_2~-产生速率、硫代巴比妥酸反应物(TBARS)含量和细胞死亡数都随着胁迫时间的延长而逐渐增加。对胁迫诱导的根尖进行组织染色发现,膜脂过氧化和质膜完整性破坏的程度和分布范围都随着胁迫时间的延长而逐渐加重和扩大。用琼脂糖凝胶电泳研究根尖DNA的降解情况,在电泳图上观察到DNA梯状和...
[期刊] 林业科学
[作者]
王敬文 蒋晶
研究了脱落酸（ＡＢＡ）诱导黑荆树悬浮培养细胞抗冻性发育的有关问题，其中包括ＡＢＡ施用浓度、抗冻性发育的时间进程、ＡＢＡ诱导可溶性蛋白质含量增高、环己亚胺对抗冻性发育的抑制作用等。研究结果表明，黑荆树悬浮培养细胞能够在添加ＡＢＡ的ＭＳ培养基中，在２５℃进行抗寒诱导，以１０ｍｇ／ＬＡＢＡ处理８天的悬浮培养细胞在－６℃的存活率达８３．６％，而对照存活率为零。ＡＢＡ能够诱导悬浮培养细胞可溶性蛋白质含量增高５．５倍，环己亚胺能够抑制蛋白质含量增高，同时也抑制低温驯化和ＡＢＡ诱导的抗冻性发育。
关键词：
黑荆树,抗冻性,ABA
[期刊] 林业科学
[作者]
翟俏丽 范桂枝 詹亚光
将促进白桦三萜积累的拟茎点霉属的内生真菌诱导子添加到白桦悬浮培养体系中,研究40,100,400μg·mL-1的真菌诱导子对生长初期、指数生长期和生长末期的悬浮细胞干质量和三萜积累的影响。结果表明:真菌诱导子的不同诱导方案均促进白桦悬浮细胞中三萜的积累,而细胞干质量积累却被抑制;其中最佳诱导条件为在指数生长期的白桦细胞中添加40μg·mL-1的真菌诱导子诱导1天,诱导后细胞中的三萜含量达29.47mg·g-1,比对照增长78%。在优化诱导条件下,考察培养液pH和电导率、细胞苯丙氨酸解氨酶(PAL)和过氧化物酶(POD)活性,发现真菌诱导后6～10h内,引发培养液的碱化和电导率的升高,特别是白桦...
关键词：
白桦 真菌诱导子 三萜 悬浮细胞培养
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
胡海英 赵亚美 阎晓磊 王华芳
香花槐是集绿化、固土、饲料等于一体的多用途林木,其细胞培养则是充分利用该树种优良特性的生物工程技术基础.该文以香花槐叶片为外植体,研究愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的技术体系.结果表明,愈伤组织诱导最适培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L.愈伤组织生长符合S型曲线,在固体培养基上,培养7 d进入指数生长期,到28 d,愈伤组织鲜重从1.329 3 g增长到10.763 7 g.悬浮培养的细胞,最大生长量为鲜重8.496 g或干重0.474 g.S型生长曲线分析表明,细胞生长迟滞期为3.6 d,最大生长量为14.6 g.
关键词：
香花槐 愈伤组织 悬浮细胞 细胞培养
[期刊] 林业科学研究
[作者]
张绮纹 张望东
本试验以群众杨３９号为试材，通过耐盐胁迫悬浮培养建立耐盐悬浮细胞系，经愈伤组织成功培育出耐ＮａＣｌ３．０‰～３．５‰的群众杨体细胞变异体的完整植株。实验表明，ＭＳ培养基附加０．４５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ、０．３ｍｇ／ＬＮＡＡ和０１ｍｇ／ＬＫｉｎｅｔｉｎｅ的Ｍ４培养基能较好地获得松脆、易分散的愈伤组织。液体以ＭＳ培养基只附加０．５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ的ＬＭ３为最好，附加氨基酸有益于悬浮细胞的正常生长。还对悬浮培养细胞的有关参数进行了测定。耐盐悬浮细胞培养实验结果表明ＮａＣｌ对细胞生长有抑制作用，并随着ＮａＣｌ升高而加强。对获得的耐３‰～６‰各水平ＮａＣｌ悬浮细胞经高密度植板，都能形成愈伤组织。耐盐愈伤...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
李英华 范海延 宋红丽 吕春茂
研究了NC89烟草悬浮细胞的最佳培养方案,为进一步提高辅酶Q10的产量提供理论依据。通过单因素试验和正交试验考察了培养基种类、蔗糖浓度、接种量、转速、pH值和装液量对烟草细胞生长及辅酶Q10合成的影响。结果表明:接种量对细胞的生长及辅酶Q10合成的影响作用极显著;蔗糖浓度对二者的影响均不显著,优选蔗糖浓度为20g·L-1;装液量对辅酶Q10合成的作用显著,而对细胞生长作用不显著;优选转速为110r·min-1,pH值为6.2。可见,适于NC89烟草细胞生长及辅酶Q10合成的优选培养条件为White基本培养基,附加蔗糖20g·L-1,装液量为20mL(100mL三角瓶),接种量75g·L-1,初...
关键词：
烟草 辅酶Q10 悬浮培养 正交试验
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王卫 豆献英 李德青 张正光
采用病毒诱导基因沉默技术从本氏烟(Nicotiana benthamiana)cDNA文库中筛选受3种不同激发子(Nep1、harpin和INF1)诱导的过敏性细胞死亡的调控基因。以农杆菌Gv3101为宿主、利用PVX病毒表达载体构建了含有7 000个单克隆的本氏烟cDNA文库,采用牙签刺伤法和注射接种法,从6 000个克隆中筛选到了34个能使激发子诱发的过敏性细胞死亡表型发生改变的克隆。对上述阳性克隆进行序列测定和分析,发现其中13个与已知的基因具有较高的同源性,其中克隆Nb14-4编码1个特异的ALY蛋白;克隆Nb3-9和Nb4-26分别编码1个苹果酸脱氢酶和果糖二磷酸醛缩酶;Nb4-28...
关键词：
激发子 过敏性细胞死亡 病毒诱导基因沉默
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