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[期刊] 华北农学报
[作者]
方守国 王朝辉 韩成贵 李大伟 于嘉林
水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarfvirus,RBSDV)是引起我国水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病的病原。引起玉米粗缩病的RBSDV湖北分离物10条基因组dsRNA全序列已被确定,其中基因组片段6(S6)全长序列为2 645bp,只含有一个阅码框(82~2460 nt),编码一个分子量约为89.6 kDa的蛋白(P6)。为进一步研究该蛋白的生物学功能,在大肠杆菌中表达了RBSDV基因组片段6编码的P6蛋白并制备了相应的抗血清。Western blotting分析显示,P6抗血清不与纯化的RBSDV粒子蛋白发生反应,而在被RBSDV感染的玉米叶片和带毒的传播介体——...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘福秀 阮小蕾 何云蔚 李华平
【目的】了解水稻瘤矮病毒(RGDV)基因组结构与功能。【方法】根据已报道的RGDV基因组各片段末端序列及其反向重复特性,采用4轮RT-PCR的方法扩增RGDV基因组第6片段(S6),用生物学软件进行序列分析。【结果】得到了该病毒S6的全序列。S6全长1651bp,G+C含量39.13%,包含一个长的ORF,起始于第25位,终止于第1497位,编码490个氨基酸,分子量为53.3kD。【结论】该蛋白与伤瘤病毒(WTV)的P7的相似性为30.0%,与水稻矮缩病毒(RDV)的P7的相似性为31.7%。这是RGDVS6全序列的首次报道。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
卢嫣红 张金凤 熊如意 徐秋芳 周益军
【目的】分析南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)基因组S6编码的SP6蛋白的抑制子活性,明确SRBSDV是否编码RNA沉默抑制子来干扰植物的沉默。【方法】将分别含有SP6与GFP质粒的农杆菌共浸润转GFP基因的16c本氏烟纯合系,观察SP6对局部沉默和系统沉默的抑制作用;将含有SP6,GFP和dsGFP质粒的农杆菌三者共浸润,观察SP6对由dsRNA引起的沉默的抑制作用;在同一植株不同部位接种GFP和SP6,观察SP6对RNA沉默信号传导的影响;通过马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)在本氏烟上表达SP6,观察SP6是否能增强PVX的致病性。【结果】SP6能抑制由GFP正义RN...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
江彤 何志龙 李祥宇 张享享
［目的］测定水稻黑条矮缩病毒（Ｒｉｃｅ ｂｌａｃｋ－ｓｔＲｅａｋｅｄ ｄｗａＲｆ ｖｉＲｕｓ，Ｒｂｓｄｖ）安徽分离物全基因组序列，分析Ｒｂｓｄｖ安徽分离物与Ｒｂｓｄｖ其他分离物以及斐济病毒属（ｆｉｊｉｖｉＲｕｓ）其他成员之间的分子差异，为明确Ｒｂｓｄｖ遗传变异与进化规律提供重要信息。［方法］采用Ｒｔ－ＰｃＲ法从安徽玉米粗缩病样本中扩增Ｒｂｓｄｖ的全基因组，克隆、测序并进行序列分析。［结果］获得Ｒｂｓｄｖ安徽分离物全基因组序列。序列比对发现，Ｒｂｓｄｖ安徽分离物与其他Ｒｂｓｄｖ各个分离物ｓ１到ｓ１０的序列相似性较高，为８７．６％～９９．５％，其中与Ｒｂｓｄｖ韩国分离物（Ｒｂｓｄｖ－ｋＯＲ）序列相．．．
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
宛柏杰 林文武 吴锦鸿 陈晓敏 吴祖建 张洁
利用ＲＴ－ＰＣＲ的方法从感染水稻矮缩病毒（ＲｉＣｅ ｄｗａＲｆ ｖｉＲｕｓ，Ｒｄｖ）的水稻中克隆该病毒的运动蛋白基因ｓ６和外壳蛋白基因ｓ８，通过ＧａＴｅｗａｙ系统进行原核表达，获得表达载体Ｐ ｄｅｓＴ１７－Ｐｎｓ６和Ｐ ｄｅｓＴ１７－Ｐ８，将表达载体转化ｅ．Ｃｏｌｉ ＲｏｓｅＴＴａ，经ｉＰＴＧ诱导表达后获得分子质量约为５９和４６ ｋｕ含Ｈｉｓ标签的融合蛋白．以诱导表达的目的蛋白为抗原，免疫注射新西兰大白兔制备多克隆抗体．结果表明，ｗｅｓＴｅＲｎ ｂｌｏＴ检测制备的Ｐｎｓ６和Ｐ８抗体可特异性检测Ｒｄｖ，间接ｅｌｉｓａ测定Ｐｎｓ６和Ｐ８抗体的效价均约为６ ４００倍，并建立了可靠、灵敏、特异的ｄｏＴ．．．
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张蔚明 刘燕娟 周倩 廖晓兰
南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)p10蛋白由其基因组片段S10编码,根据SRBSD海南分离物S10序列(EU523360)设计特异性引物扩增编码p10蛋白的片段,并亚克隆至原核表达载体pET-28a+,以大肠杆菌BL21plysS为宿主菌进行高水平表达,利用纯化的p10蛋白免疫兔子,制备了p10蛋白的特异性抗血清。ELISA检测显示,p10蛋白的抗血清可与来自湖南不同地区的白背飞虱病汁液发生强烈的血清学反应,表明该抗血清适用于田间SRBSDV的快速诊断。
关键词：
南方水稻黑条矮缩病毒 原核表达 抗血清
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
朱俊子 周倩 崔亚 高必达
2010年,由南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)引起的新水稻矮缩病在湖南省大面积爆发。为确定南方水稻黑条矮缩病毒的自然寄主范围,采集湖南省永州零陵、邵阳隆回、郴州宜章等地发病田块及附近的禾本科作物及杂草,提取RNA后,用自行设计的专利引物对,对其进行RT-PCR检测,发现高粱、野燕麦、牛筋草是新的SRBSDV自然寄主。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周彤 杜琳琳 范永坚 周益军
【目的】建立一种快速、灵敏的逆转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP)检测寄主植物和传毒介体体内的水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)。【方法】合成4条针对RBSDV S10核苷酸序列6个位点的特异性引物。分别对引物浓度、MgSO4浓度、反应温度和时间进行优化。将感病水稻总RNA梯度稀释后进行灵敏性检验并与RT-PCR比较分析。选择RBSDV和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)验证该方法的特异性。用本RT-LAMP方法检测田间病株。【结果】RT-LAMP检测方法可排除SRBSDV的干扰而特异地检测植物和飞虱体内的RBSDV,与RT-P...
关键词：
水稻黑条矮缩病毒 RT-LAMP 检测
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
杨迎青 周国辉 蒲玲玲 兰波 李湘民
水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)是引起水稻矮缩病的2种主要病毒,这2种病毒病在田间危害症状较相似,难以准确鉴定。为建立这2种病毒的一步快速检测方法,从混合引物配比、退火温度2个方面优化了反应体系与反应程序,并用这2类病毒的总RNA进行了RT-PCR验证,最终建立了准确、灵敏、快速的一步检测方法。利用建立的方法对从江西省大余县和南昌县采集的水稻矮缩病毒叶片样品进行检测。结果表明:大余县10份样品均为南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV),检出率为100%;南昌县10份样品中有7份样品检出南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV),检出率为70%,另外3份样品检出水稻黑...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
周小龙 符策纠 李冰 丁晓雯 林晋军 刘雄伦 刘釐灵
为了解稻瘟菌无毒基因AvrPii在水稻病原菌相关分子模式诱导的免疫反应(PTI)抗病分子信号调控中的功能,对AvrPii基因编码蛋白的分子结构特性进行分析,构建了AvrPii基因的植物表达载体幵进行遗传转化。结果表明:AvrPii蛋白由70个氨基酸组成,相对分子质量约为7 500,等电点为6.0,总平均亲水性值为–0.159;AvrPii蛋白包含1个信号肽、1个跨膜结构域和2个基序为LxAR和CxxCxxxxxxxxxxxH的保守结构域;利用农杆菌侵染转化法,获得AvrPii基因全长序列和不含信号肽AvrPiinsp的转基因株系13个,PCR扩增和实时荧光定量PCR鉴定结果表明,AvrPii和AvrPiinsp基因已成功转入受体品种日本晴幵得到稳定表达。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
郑璐平 林辰 吴祖建 谢联辉
通过RT-PCR克隆获得水稻条纹病毒(RSV)编码的蛋白NS2和拟南芥柯浩体蛋白Atcoilin的cDNA,将两者分别与表达载体pEarley102(带青色荧光蛋白,CFP)和pEarley101(带黄色荧光蛋白,YFP)同源重组.将构建好的重组载体分别转化到农杆菌EHA105中,通过农杆菌接种法将两者共同注射到本氏烟叶片表皮细胞中进行表达.在共聚焦显微镜下观察,NS2-CFP与Atcoilin-YFP能重叠在一起,表明RSV NS2定位于柯浩体.
关键词：
水稻条纹病毒 NS2 柯浩体 细胞定位
[期刊] 西南农业学报
[作者]
黄所生 吴碧球 秦碧霞 李战彪 李成 孙祖雄 谢慧婷 黄凤宽 蔡健和
为完善水稻对南方水稻黑条矮缩病抗性的评价方法提供理论依据,运用RT-PCR检测法及其他常规方法研究不同虫态、不同接虫密度对白背飞虱传播SRBSDV的能力、不同水稻生育期对白背飞虱传毒效率影响、白背飞虱饲毒时间和传毒时间对南方水稻黑条矮缩病发病率的影响。结果表明,同一虫态白背飞虱不同的接虫密度水稻发病率不同,接虫密度增加发病率增高;随着虫龄增大而白背飞虱传毒效率增高。接虫密度2头/苗、3头/苗时,45龄和长、短白背飞虱型成虫传毒引起水稻发病率均达到100.00%。不同水稻生育期影响白背飞虱传毒效率。接虫后,
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘光清 张玉颖 云涛 倪征 张淼涛 梁华丽 华炯刚 李双茂 杜青云 盛祖恬
采用3′RACE方法对兔病毒性出血症病毒(RHDV)JX／CHA／97株基因组3′端全序列进行了扩增、克隆和测序,并利用ONAstar和DNAman软件分析了RHDV JX／CHA／97株与各参比毒株3′NCR的序列同源性,用RNA structure软件对3′NCR的二级结构进行了预测和分析。结果表明,所扩增的目的基因片段长1500 bp,包括部分VP60基因序列、ORF2基因、3′端非编码区(3′Non Coding Region,3′NCR)和poly(A)尾巴,其中 3′NCR位于ORF2终止密码子TAG之后,长59 bp,poly(A)至少含有27个A;3′NCR序列具有较高的同源性...
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨杰 王军 周彤 陈志德 仲维功
为了明确江苏新发生的矮缩病害为水稻黑条矮缩病,采用RT-PCR和序列测定方法对其病原进行了精确鉴定。根据水稻黑条矮缩病病毒基因组序列的信息,设计扩增RNA聚合酶基因、外壳蛋白基因和RNA沉默抑制子基因以及核心蛋白基因部分编码区的4对引物,提取感染水稻黑条矮缩病病毒的水稻植株总RNA并进行RT-PCR扩增,可以在感病植株中分别扩增出水稻黑条矮缩病病毒基因组特有的4个条带,测序结果表明,来源于江苏南京的分离物的4个基因部分编码片段与已登录的对应基因片段核苷酸序列同源性达99%以上,共发现7个碱基的突变。经生物信息学分析发现7个单碱基突变都是同义突变,氨基酸序列没有改变。根据以上结果确认该病病原为水...
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水稻黑条矮缩病 RT-PCR 病毒检测
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