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[期刊] 中国农业科学
[作者]
张开玉 熊如意 吴建祥 周雪平 周益军
【目的】检测灰飞虱体内由水稻条纹病毒(RSV)编码的外壳蛋白(CP)、病害特异性蛋白(SP),以及非结构蛋白NS2、NS3和NSvc4等5种蛋白以及病毒粒子CP与SP、NS2、NS3、NSvc4的体外结合,为进一步研究水稻条纹病毒与其介体昆虫互作提供有用信息。【方法】提取高带毒灰飞虱(Q家系)总蛋白,用免疫方法检测昆虫体内CP、SP、NS2、NS3和NSvc4等5种重要蛋白的表达以及病毒粒子CP与SP、NS2、NS3、NSvc4的体外结合情况。【结果】结果表明在带毒灰飞虱体内以上5种蛋白都能检测到,而且CP含量最高,NSvc4、SP、NS3、NS2含量依次降低;用体外原核表达后纯化的蛋白进行了...
关键词：
灰飞虱 水稻条纹病毒 表达 体外结合
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈爱玲 林克剑 贺康 王桂荣 李飞
【目的】探讨利用RNA干扰技术切断灰飞虱体内水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)繁殖的可行性,研究RSV病毒不同基因间的互作关系。【方法】利用喂食的方法测定体外合成的dsRNA对灰飞虱体内RSV基因表达的抑制作用。根据RSV基因序列设计并合成3种dsRNA(dsRdRp、dsNSvc4和dsCP),分别喂食携带RSV病毒的2龄灰飞虱,96 h后利用荧光定量PCR技术同时检测灰飞虱体内RSV病毒不同基因RdRp、NSvc4和CP的表达量。【结果】经过特异性dsRNA喂食处理的灰飞虱体内RSV病毒靶基因NSvc4、CP的表达量大幅下调,下调幅度分别为93.2%和94.9%;靶...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
乐文静 史文琦 季英华 周益军
使用斑点免疫结合试验(DIBA)和PCR法分别对灰飞虱体内水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)和沃尔巴克氏体(Wolbachia)的感染特点进行研究。结果发现:灰飞虱体内广泛存在Wolbachia感染,但是灰飞虱体内Wolbachia的感染与其体内携带RSV的特点不存在明显的相关性,同时二者在经卵传播过程中也没有明显的相关性。这暗示了RSV和Wolbachia在灰飞虱体内虽然都可以垂直传播给下一代,但是二者在传播方式上或者在传播过程中可能是两个相对独立、相互间没有明显影响的过程。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
秦发亮 刘文文 李莉 王锡锋
【目的】筛选介体灰飞虱(Laodelphax striatellus,SBPH)中与水稻条纹病毒(RSV)病害特异蛋白(disease-specific protein,SP)可能发生相互作用的蛋白质,为明确介体灰飞虱传播RSV的分子机制及SP在传毒过程中的作用打下基础。【方法】提取高质量灰飞虱总RNA并通过TaKaRa D9086 OligtexTM-dT30 mRNA Purification Kit对mRNA进行纯化。利用SMART技术合成双链cDNA,利用Axygen的PCR纯化回收试剂盒将ds cDNA回收纯化,纯化后的ds cDNA再经SfiⅠ限制性内切酶处理纯化后与文库载体pPR...
[期刊] 华北农学报
[作者]
任春梅 程兆榜 季英华 熊如意 范永坚 周益军
对来自江苏、云南、山东、河北等地灰飞虱来源的21个水稻条纹病毒分离物的病害特异性蛋白(sp)基因进行了遗传多样性分析研究。序列测定表明,所有分离物的sp基因大小相同,均由537个核苷酸组成,编码178个氨基酸和1个终止密码子。采用DNAStar软件进行分析,21个RSV分离物核苷酸和推导的编码蛋白氨基酸序列同源性分别为96.1%~100%和95.5%~100%。与已报道水稻来源的27个RSV分离物一起进行序列同源性比较和系统进化树分析,结果表明,RSV-sp基因核苷酸序列变异相对较大,除灰飞虱来源的或者云南来源的分离物相对独立成组外无明显的规律性。从功能上分析,其遗传多样性首先与寄主相关,从寄...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
袁正杰 贾东升 吴祖建 魏太云 谢联辉
【目的】以水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)编码的NSvc4蛋白和CP蛋白的致病功能鉴定为切入点,研究RSV的致病机理。【方法】通过农杆菌介导在本氏烟中对RSV编码的6个蛋白进行细胞定位。采用双分子荧光互补(Bimolecular fluorescence complementation,BiFC)技术鉴定NSvc4蛋白与其余5个蛋白间的互作关系,并用酵母双杂交体系(Yeast two-hybrid,YTH)对NSvc4与CP蛋白间的互作再次验证。利用马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)系统在本氏烟叶片研究NSvc4蛋白和CP蛋白的致病性,采用实时荧光定...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
郑璐平 林辰 吴祖建 谢联辉
通过RT-PCR克隆获得水稻条纹病毒(RSV)编码的蛋白NS2和拟南芥柯浩体蛋白Atcoilin的cDNA,将两者分别与表达载体pEarley102(带青色荧光蛋白,CFP)和pEarley101(带黄色荧光蛋白,YFP)同源重组.将构建好的重组载体分别转化到农杆菌EHA105中,通过农杆菌接种法将两者共同注射到本氏烟叶片表皮细胞中进行表达.在共聚焦显微镜下观察,NS2-CFP与Atcoilin-YFP能重叠在一起,表明RSV NS2定位于柯浩体.
关键词：
水稻条纹病毒 NS2 柯浩体 细胞定位
[期刊] 西南农业学报
[作者]
任春梅 程兆榜 杨柳 缪倩 周益军
为揭示灰飞虱携带水稻条纹病毒（ｒｉｃｅ ｓｔｒｉｐｅ ｃｉｒｕｓ，ｒｓＶ）的Ｎｓ２和Ｎｓ３基因分子变异特征，采用单雌产卵法从江苏、云南、山东、河北等地获得２０个灰飞虱携带的ｒｓＶ分离物，ｒｔ－ｐｃｒ扩增出Ｎｓ２和Ｎｓ３基因特异片段，并对扩增产物进行克隆测序，再结合ＧｅＮｂａＮｋ中已报道的其他分离物序列，利用生物信息学软件分析不同寄主、地区分高物的分子变异特点及系统发育关系。序列测定表明，２０个分离物Ｎｓ２和Ｎｓ３ ２个基因核苷酸序列同源性分别为９６．５％～１００％（Ｎｓ２）和９５．４％～１００％（Ｎｓ３），推导编码的蛋白氨基酸序列同源性为９７．０％～１００％（Ｎｓ２）和９６．２％～１００％（Ｎ．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
邸垫平 苗洪芹 路银贵 田兰芝
采用沃尔巴克氏体(Wolbachia)表面蛋白基因(wsp基因)的通用引物81F和691R对河北曲阳和容城灰飞虱(Laodelphax striatellus)体内的Wolbachia进行PCR检测,结果表明,从灰飞虱DNA样品中可扩增出600 bp大小的wsp目的基因片段,证实河北曲阳和容城田间的灰飞虱种群有Wolbachia感染;对wsp目的基因片段的序列测定和同源性分析表明,河北的2个灰飞虱种群感染的Wolbachia与来自白背飞虱的wFur品系、灰飞虱的wStri品系亲缘关系较近,同属于WolbachiaB大组Con组。
关键词：
灰飞虱 沃尔巴克氏体 检测
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
蔡淼 岳喜庆 黄新
为建立5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸合酶(CP4-EPSPs)蛋白的石英晶体微天平(QCM)传感检测方法,采用在金片表面修饰抗原所对应的单克隆抗体的方法,利用QCM技术,对CP4-EPSPs蛋白进行检测研究。结果表明:该方法灵敏度达到500ng·mL-1,特异性好,重复性高,检测转基因玉米含量检出限为0.1%。该方法不足之处在于检测仪器不方便携带,在未来研究中考虑研发便携式QCM检测装置。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐圣 张怡萍 韩召军 吴敏
[目的]利用灰飞虱Laodelphax striatellus基因组和转录组数据鉴定灰飞虱G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptor， GPCR）基因。[方法]构建灰飞虱基因组和转录组本地数据库，以黑腹果蝇Drosophila melanogaster和豌豆蚜Acyrthosiphon pisum的GPCR基因为参照序列进行本地BLAST，去除冗余和不含有多跨膜螺旋结构的序列后获得灰飞虱GPCR基因；利用NCBI CD-Search对灰飞虱GPCR序列进行跨膜结构域分析，利用Clustal W进行序列比对，用MEGA 6软件构建灰飞虱GPCR系统发育树。[结果]鉴定了114个灰飞虱GPCR基因，它们分属于A、B、C和D这4个家族。灰飞虱A家族的GPCR数量最多，尤其是其中的神经肽和蛋白激素受体亚家族的基因数量达55个。与黑腹果蝇的GPCR相比，灰飞虱GPCR不仅种类丰富，而且有基因重复和可能的缺失现象。[结论]灰飞虱具有较为全面的GPCR系统，本研究完善了灰飞虱GPCR基因的信息，为进一步研究灰飞虱GPCR的功能奠定了基础。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
秦春香 谢芝勋 谢丽基 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤
将纯化好的两个ARV结构蛋白σ3和σ2作为包被用抗原,分别进行间接ELISA,并确定它们的最佳抗原包被浓度分别为9.5、12.0μg/mL;一抗血清的稀释度为1∶200;HRP酶标羊抗鸡IgG稀释度为1∶5000,初步建立了能检测ARV抗体的σ3-ELISA、σ2-ELISA以及σ3、σ2两个蛋白同时包被的σ3-σ2-ELISA检测方法。分别用上述3种方法对制备的ARV SPF鸡阳性血清进行检测,结果阳性检出率分别为90.91%、69.70%和100%。表明σ3-σ2-ELISA方法在ARV抗体检测方面具有较高的敏感性。
关键词：
禽呼肠孤病毒 结构蛋白 间接ELISA
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
葛猛 屈泰龙 罗维 李杰 周洪锐 余兴龙
为建立检测PCV2抗体的间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),将猪圆环病毒2(porcine circovirus type 2,PCV2)结构蛋白Cap(不含核内化信号肽)的基因克隆到原核表达载体pET 28a(+)中,并在大肠杆菌中表达,获得可溶性的重组蛋白(Cap⊿41),用Cap⊿41作为诊断抗原,确立了间接ELISA的最佳反应条件,并对来自4个猪场的394份血清进行检测。结果表明,与免疫荧光检测相比,建立的间接ELISA的检测敏感性和特异性分别为93.14%和95.72%,且建立的间接ELISA的批内与批间差异较小。此...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
章松柏 宋国威 杨靓 吴祖建 谢联辉
分别建立了水稻锯齿叶矮缩病毒(RRSV)病株的dsRNA基因组检测法和单头介体褐飞虱带毒的RT-PCR法,并结合生物学接种试验,对介体传毒特性进行了初步分析.结果显示:dsRNA基因组鉴定法可以从0.5 g病株样品中快速检测到RRSV,RT-PCR法可以灵敏地应用于褐飞虱带毒、传毒情况的检测;饲毒后褐飞虱成虫、若虫的带毒率分别为75.0%、68.2%,传毒率分别为50.0%、32.5%,说明褐飞虱种群传播RRSV的能力很强,是高度亲和的群体.
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
颜世敢 朱丽萍 张玉忠 周百成 张秀美 李雁冰
用适宜摩尔浓度的异型双功能交联剂SPDP将R-藻红蛋白与纯化的禽流感病毒H9亚型多克隆抗体交联,并经高效液相色谱纯化制备R-藻红蛋白标记抗体荧光探针。以溴化氰活化的琼脂糖微球为固相载体,采用双抗体夹心法建立固相免疫荧光检测法,以制备的R-藻红蛋白标记抗体荧光探针检测禽流感病毒H9尿囊毒。结果表明,阳性微球在蓝、绿光激发下发射桔黄色荧光,荧光明亮,无背景光干扰,特异性好,灵敏度高,可检测蛋白浓度为1.85×10-5mg.mL-1的H9亚型尿囊毒。R-藻红蛋白标记探针的检测灵敏度高于FITC标记探针,R-藻红蛋白可替代FITC或与FITC等荧光染料一起用于多色荧光免疫检测。
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