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[期刊] 华北农学报
[作者]
白辉 武鹏程 刘丽娟 李莉云 刘国振
在优化水稻叶片蛋白质提取方法的基础上,利用免疫沉淀对水稻中的XA21蛋白质进行了富集纯化,继而通过TCA-丙酮法脱盐,用尿素、硫脲溶解后进行双向电泳分离和Western检测,实现了对高分子量、低丰度表达的、可能的膜蛋白XA21的分离检测,为其翻译后修饰方式研究奠定了基础。
关键词：
水稻 免疫沉淀 双向电泳
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
曹孟良 郑用琏 张启发
将光敏核不育水稻农垦58S和正常可育农垦58N适时播种,使其光敏感期处于自然长日照控制下。于苗期、分蘖期、第二次枝梗分化期、雌雄蕊形成期、花粉母细胞形成期及减数分裂期分别在暗、光下取其幼穗及第一全展叶作蛋白质双向电泳分析,发现了17个特异的蛋白质组分。其中11个组分在可育与不育水稻间表现为有或无的差异;3个组分表现为表达量的变化;另3个组分表现为位置在双向电泳图谱上的平移。研究结果还表明低温和异常高温不仅可使光敏不育水稻的花粉育性出现部分恢复,而且高温处理还导致了电泳图谱上蛋白组分的相应改变。
关键词：
光敏感时期 幼穗 叶片 特异蛋白质
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
舒灿伟 陈健仪 赵美 王陈骄子 周而勋
为开展水稻纹枯病菌蛋白质组学的研究,采用TCA-丙酮法、SDS法和TCA-丙酮-酚/SDS联合抽提法对水稻纹枯病菌蛋白质提取质量进行比较,并建立了双向电泳体系。对电泳后的图谱用Quantity One软件进行分析,结果发现:TCA-丙酮法、SDS法和TCA-丙酮-酚/SDS联合抽提法所获得的蛋白质双向电泳图谱中,分别记录得到557、309和877个蛋白质点。SDS法提取的蛋白质样品杂质较多,存在盐离子和小分子物质干扰,得到的蛋白点较少;TCA-丙酮法提取的蛋白质样品呈黄色,有色素残留;而在TCA-丙酮法的
[期刊] 华北农学报
[作者]
邵媛媛 柳展基 王龙龙 毕玉平
以花生品种鲁花14为试验材料,提取叶片可溶性蛋白进行双向电泳分析。在三氯乙酸/丙酮沉淀法的基础上,对样品抽提、样品溶解、胶条pH范围选择、蛋白上样量、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等关键步骤进行改进,获得了蛋白点较多、重复性好的双向电泳图谱,为开展花生叶片蛋白质组研究奠定了基础。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
田邁 莫海波 常亚青 湛篧篧 陈百尧 伏光辉 安建
以刺参肠组织为材料,通过蛋白质提取方法、上样前处理方法、上样量以及聚焦条件的优化,建立了刺参肠组织蛋白质双向电泳技术体系。试验结果表明,采用TCA-丙酮沉淀法制备刺参肠组织蛋白质,能够得到高纯度的蛋白质提取液。刺参样品上样前不经过处理,等电聚焦电压1 000V,电流7mA,聚焦时间3h,平衡时间30min,最佳上样量25μg,pH 4~6.5、8.5cm的IPG胶条,银染能获得较好的双向电泳图谱。通过蛋白质双向电泳体系的优化,获得了刺参肠组织的蛋白质表达图谱,为进一步研究刺参差异表达蛋白的筛选及蛋白质组学研究提供技术保障。
关键词：
刺参 肠组织 蛋白质双向电泳
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
张小果 乔桂荣 李翠云 刘明英 蒋晶 李海营 邱文敏 卓仁英
林木抗逆机制的研究是林木抗逆育种的重要基础。为了解旱柳Salix matsudana耐盐机制,实验采用蛋白质双向电泳技术研究盐碱胁迫前后旱柳蛋白表达变化,分离鉴定旱柳耐盐相关基因,建立一套适合于旱柳根系蛋白质的双向电泳技术体系是蛋白质组学的基础。用改进的酚抽法抽提旱柳根总蛋白,此方法不仅能很好地分离蛋白,而且能有效去除样品中的盐分。通过比较分析了双向电泳不同条件对电泳结果的影响,确立了900μg.胶条-1的最佳上样量,10 min平衡时间以及10万V.h的聚焦时间的双向电泳条件。还比较了氯化钠胁迫后双向电泳图谱差异,发现了39个差异表达蛋白,其中15个下调,24个上调(11个新诱导表达),为下...
关键词：
林木育种学 旱柳 蛋白质组学 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
张曼 羊杏平 徐锦华 刘广 姚协丰 李苹芳
为建立高效、稳定的西瓜根系蛋白质双向电泳技术体系，对西瓜根系蛋白质样品等电聚焦（ＩＥＦ）条件、样品上样量、ＩＰＧ胶条Ｐ Ｈ值范围、染色方法等参数进行优化。结果表明，采用ＴＣＡ／丙酮法提取西瓜根系总蛋白，裂解液组成为７ ｍｏｌ／ｌ ＵｒＥＡ、２ ｍｏｌ／ｌ ＴＨｏＵＩｒＥＡ、４％ＣＨＡＰＳ（ｍ／Ｖ）、１％ＣｏＣｋＴＡＩｌ（Ｖ／Ｖ）、６５ ｍｍｏｌ／ｌ ＤＴＴ、２％Ｐ Ｈ值４～７ ＩＰＧ ＢＵＦＦＥｒ，上样量为８００μＧ，Ｐ Ｈ值４～７ ＩＰＧ（１３ Ｃｍ）胶条、ＩＥＦ条件为４８ ０００ ＶＨ，分离胶浓度为１２．５％，ＣＢＢ－ｒ２５０染色时，可获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱，该技术条件为适合．．．
关键词：
西瓜根系 蛋白质组 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
董婧 逯晓萍 吕二锁 薛春雷 李俊伟
为了优化玉米叶片双向凝胶电泳技术条件，通过比较３种总蛋白提取方法对玉米双向电泳结果的影响，并对蛋白质上样量、ＩＥＦ等电聚焦条件及ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶浓度等参数进行探索、优化；结果发现，与酚提取法和磷酸缓冲液法相比，采用改进的ＴＣＡ／丙酮法提取总蛋白操作简单、方便，所得的２－ＤＥ图谱中蛋白质点数量多、背景清晰，是一种适用于提取玉米苗期叶片总蛋白的有效方法；同时筛选出：第一向ＩＥＦ等电聚焦样品上样量为８００μｇ，聚焦条件为２０ ０００ Ｖ／ｈ，在浓度为１２．５％的ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，能够在１７ Ｃｍ的ＩＰｇ胶条上获得背景低、分辨率较高、重复性好的双向电泳图谱，该优化体系适用于玉米叶．．．
关键词：
玉米 叶片 蛋白质提取 双向电泳
[期刊] 水产学报
[作者]
胡秀彩 沈晓静 吕爱军 孙敬锋 YEONG Yiksung 宋亚娇 李莉 孔祥会
为了建立鱼类皮肤蛋白质组双向电泳图谱及质谱鉴定，以鲫为实验动物，采用蛋白双向电泳（２－ＤＥ）结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ－ＭＳ）技术，进行鲫皮肤的蛋白质组学研究。结果表明，当上样量为８００μｇ，采用１８ ｃＭ、ｐ Ｈ３～１０ Ｉｐｇ胶条，等电聚焦８０ ０００ ＶＨ，２－ＤＥ图谱检测为２１４个皮肤蛋白点，匹配率达８８％；对其中３１个蛋白点进行ＭＳ／ＭＳ鉴定为２２种蛋白，包括肌球蛋白、肌动蛋白、角蛋白、锌指蛋白５８５Ｂ、效应蛋白ＲＡＢ１５、卷曲螺旋结构域蛋白１６８、ＮｃＫ１相关蛋白，肌酸激酶、烯醇化酶、丙酮酸脱氢酶、腺苷酸激酶同工酶等；进行蛋白功能聚类（ｇＯ）分．．．
关键词：
鲫 皮肤 蛋白质组 双向电泳 质谱
[期刊] 林业科学研究
[作者]
占志勇 陈益存 韩小娇 崔琴琴 汪阳东
为奠定油桐蛋白质组学研究的基础,针对影响油桐种仁蛋白质分离效果的几个重要因素进行单因素优化实验,建立了油桐种仁蛋白质组分离效果良好的双向电泳技术平台。实验结果显示:采用TCA-丙酮结合酚抽法提取的油桐种仁蛋白质,经裂解液(7 mol.L-1尿素,2 mol.L-1硫脲,4%CHAPS,65 mmol.L-1DTT,2%IPG buffer)裂解之后,上样700μg聚焦70 000 Vh,经过SDS-PAGE电泳(分离胶浓度15%,恒功率5 W,电泳时间8 h)后有良好的分离效果,能满足开展后续蛋白质组学研究的实验要求。
关键词：
油桐 双向电泳 蛋白质组学
[期刊] 中国农业科学
[作者]
黄文 谢笔钧 王益 杨尔宁 罗锐
选用江苏省泰兴市大佛指白果为原料,采用盐溶和盐析的方法,从白果中分离制备出清蛋白(GAP)、球蛋白(GGP)和盐溶蛋白(GSP)。白果蛋白中以清蛋白和球蛋白为主,醇溶蛋白、碱溶蛋白和复合蛋白含量很少。化学成分分析表明,制得的GAP、GGP和GSP中以GAP的蛋白质纯度高,氨基酸组成丰富、合理,属于优质蛋白质。活性试验结果表明GAP的抗氧化活性远高于GGP。
关键词：
白果 盐溶 盐析 清蛋白 抗氧化
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
范吉星 邓用川 黄惜 林栖凤 罗越华
分别采用TCA-丙酮沉淀法、酚法、尿素法、周涵韬法和笔者建立的酚改良法,提取红海榄根部总蛋白质,并进行了SDS-PAGE分析和双向电泳体系的优化.结果表明,酚改良法提取红海榄根部总蛋白质的纯度最高,质量最好,为建立双向电泳分析体系提供了较为理想的蛋白样品,获得了良好的双向电泳图谱.该结果为盐生植物,尤其是盐生木本植物,建立了一套可靠的蛋白提取和双向电泳方法.
关键词：
红海榄 蛋白质 双向电泳
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
庄维兵 高志红 章镇 侍婷 邵静
以果梅花芽为材料,比较了TCA/丙酮法和酚抽法2种总蛋白质提取方法对蛋白质双向电泳(2-DE)的影响,同时对IPG胶条种类、凝胶浓度、蛋白质上样量及染色方法等环节进行了优化。结果表明:TCA/丙酮法比酚抽法在2-DE凝胶图谱上的蛋白质点数增多,图谱背景也比较清晰,没有明显的纵横条纹;采用17 cm pH 4～7的胶条、10%的凝胶浓度、1.5～1.8 mg的蛋白质上样量,经改良胶条考马斯亮蓝G-250染色后可获得背景清晰、重复性好、蛋白质分辨率高的2-DE图谱。高质量的果梅花芽蛋白质提取方法和蛋白质双向电泳体系的优化可为果梅蛋白质组学研究奠定技术基础。
关键词：
果梅 花芽 蛋白提取 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
石海波 王云生 冯勇 高聚林 白海 苏二虎 张来厚 赵瑞霞 刘志雄 黄灵忠 姜丽丽
为了获得玉米籽粒双向电泳中蛋白质提取的最佳方法,建立最佳的玉米籽粒蛋白双向电泳技术体系,对酚抽提法、三氯乙酸/丙酮沉淀法(TCA/丙酮沉淀法)和可溶性蛋白提取法3种不同提取方法得到的蛋白质进行了分析,并在相同条件下进行双向电泳比对分析,结果表明:可溶性蛋白提取法获得的蛋白纯度高、浓度适中、双向电泳蛋白质点最丰富,最适合双向电泳研究;利用可溶性蛋白提取法获得的蛋白,对第一向等电聚焦参数等条件,以及不同p H值范围的IPG预制凝胶条进行了比较分析,结果表明:采用p H值3~10的IPG预制凝胶条时,采取电压梯度上升的方式,总聚焦70 000 Vhs、上样量800μg效果最佳,采用p H值4~7的I...
关键词：
玉米 籽粒 蛋白组学 双向电泳
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王珊珊 郝宇涵 任婧祺 郭春深 朱延殊 范海延
双向电泳(2-DE)是蛋白质组学研究的重要支撑技术之一。为建立适于黄瓜根系蛋白质组分析的双向电泳技术,对黄瓜根系蛋白质样品提取方法、裂解缓冲液配方及SDS-PAGE分离胶浓度等参数进行研究。结果表明:采用TCA/丙酮法提取黄瓜根系中的蛋白质,裂解缓冲液为8mol·L-1尿素、2mol·L-1硫脲、2%IPG Buffer、4%CHAPS、1%TBP、65mmol·L-1DTT、2mmol·L-1EDTA、0.001%溴酚蓝和1%鸡尾酒,SDS-PAGE分离胶浓度为11%时,可获得分离效果较好的双向电泳图谱。该技术条件为适合黄瓜根系蛋白分离的较优双向电泳体系。
关键词：
黄瓜根系 蛋白质组 双向电泳
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