【目的】探究水栒子不同组织内生真菌多样性及其群落结构差异，为水栒子内生真菌的综合开发、利用提供一定的理论基础。【方法】利用高通量测序技术对水栒子不同组织内生真菌进行鉴定与分析。【结果】共获得1 590个OTUs序列，其中茎的OTUs数量最多(597个),其次为叶(545个),根最少(448个)。水栒子不同组织内生真菌的群落结构、丰度存在一定差异。各组织均以子囊菌门(Ascomycota)为优势菌门，其中，根、茎和叶的相对丰度分别为41.65%、22.29%和10.16%。球旋霉属(Spirosphaera,相对丰度8.89%)、Anguillospora(对丰度7.92%)、刺孢菌属(Subulicystidium,相对丰度2.10%)为根部优势属；亚隔孢壳属[Didymella(相对丰度2.52%)、Arthrocatena(相对丰度2.19%)]为茎部优势属；线黑粉酵母属(Filobasidium,相对丰度2.47%)、棘壳孢属(Pyrenochaeta,相对丰度2.05%)为叶部优势属。通过LEfSe分析发现，水栒子根、茎和叶都存在差异指示种，球旋霉属为根部差异指示种，Arthrocatena为茎部差异指示种，线黑粉酵母属为叶部差异指示种。【结论】水栒子不同组织内生真菌的种群结构存在差异；水栒子组织器官中内生真菌资源丰富。

以湖南省壶瓶山国家级自然保护区生长的9株(3组)不同树龄银杏为研究对象,应用IlluminaHiSeq高通量测序技术,分析银杏叶片组织内生真菌的多样性及群落结构。结果表明:银杏叶片内生真菌群落的多样性、群落结构与组成均存在显著性差异,且随着树龄的增加,叶片内生真菌群落结构差异增大;子囊菌门(Ascomycota)为绝对优势菌门;曲霉属(Aspergillus)、假丝酵母属(Candida)、球腔菌属(Mycosphaerella)等真菌为银杏叶内生真菌群落优势菌属;通过对银杏叶黄酮含量进行检测,发现不同树龄银杏叶的黄酮含量存在显著差异,且随着树龄的增加,3种黄酮醇苷(槲皮素、山奈酚和异鼠李素)含量均呈递减趋势;进一步分析表明,黄酮类化合物作为重要环境因子,可能通过影响优势菌门子囊菌中优势菌属的定殖与生长对内生真菌群落的形成与变化产生显著影响。

【目的】探究感病羊肚菌[Morchella esculenta (L.) Pers.]内生细菌的多样性、丰度及菌群功能。【方法】以健株羊肚菌为对照，提取感病程度为轻度、中度、重度及完全感病的羊肚菌内生细菌基因组总DNA，进行Illumina Miseq高通量测序，并对测序获得的内生细菌ASVs（Amplicon Sequence Variants）进行生物信息学分析，探究羊肚菌子实体感病过程中内生细菌的群落结构及其多样性。【结果】羊肚菌子实体内生细菌菌群丰度指数为：中度感病组>完全感病组>轻度感病组>重度感病组>健康组；多样性指数为：中度感病组>健康组>轻度感病组>重度感病组>完全感病组；均匀度指数为：健康组>重度感病组>轻度感病组>完全感病组>中度感病组。健株羊肚菌子实体内生细菌主要归类于变形菌门（Proteobacteria）和拟杆菌门（Bacteroidetes），其中假单胞菌属（Pseudomonas）和黄杆菌属（Flavobacterium）为健株羊肚菌内生细菌中的优势属，分别占健株羊肚菌子实体内生细菌总数的46.92%和41.07%。感病羊肚菌子实体中假单胞菌属相对丰度随感病程度增加呈上升趋势，至重度时超过95%，而黄杆菌属相对丰度呈下降趋势，至重度时低于3%。此外，所有感病子实体中均有厚壁菌门（Firmicutes）的内生菌。【结论】对羊肚菌子实体内菌群的平衡调控，如对假单胞菌属内生细菌的抑制及黄杆菌属内生细菌的促生，可能有助于降低羊肚菌大面积病害和减产，保障羊肚菌稳产。

【目的】陕西小叶杨主要分布在生态环境差异显著的陕北和秦岭北麓地区。研究小叶杨叶内生真菌群体特征，明确影响小叶杨生态分布的生态因素。【方法】通过对２种生境下小叶杨林分代表植株叶片定点、定时采集，在严格的表面消毒下，进行ＰＤＡ和纸培养，结合形态学和分子系统学技术对分离真菌进行鉴别，并用ＳＡＳＳ软件对内生真菌群体进行统计分析。【结果】宝鸡和榆林的小叶杨内生真菌相似系数较高（０．４４４ ５），优势种群相似。交链孢属、单隔孢属、茎点霉属真菌相对分离率分别为２３．１％，２２．５％，２８．４４％，皆为优势菌群，呈现明显的暗色有隔菌群特点，这可能与小叶杨树种旱生发育型相关。地区内的内生真菌群体相似系数大于地区．．．

种子是微生物从母本植物到子代植物的传播介质,将有益微生物代代相传。种子传播的微生物存在于植物不同部位,为寄主植物提供了一系列的益处。以往种子微生物研究主要集中于农作物,鲜有关于草地植物的研究。本研究利用Illumina-Miseq DNA测序技术,对青藏高原高山草甸8种优势植物的种子微生物群进行多样性分析。结果表明:8种草地植物的种子中有多种细菌和真菌(115个细菌属和135个真菌属),且细菌和真菌群落均存在显著差异(P <0.05)。8种草地植物的优势种细菌门和真菌门分别为Proteobacteria和Ascomycota。在8种草地植物的种子中均发现了细菌属Pseudomonas、Pantoea和Ochrobactrum及真菌属Botrytis、Bullera和Didymella。另外,在8种草地植物的种子中有其独特的细菌和真菌属。本研究表明,植物的个体特征是塑造种子微生物群落的重要因素,同时还发现了一些有利于寄主植物生长且可用于未来种子微生物组调控的微生物。

【目的】对半红树药用植物杨叶肖槿（Thespesia populnea）内生真菌的多样性及其抑菌活性进行研究，为开发生态友好型抗菌剂提供参考依据。【方法】采用形态学和分子生物学相结合的方法，对广西北部湾沿海杨叶肖槿茎、叶和树皮组织中的内生真菌进行分离鉴定。选用从柿树、核桃、荔枝中分离的炭疽菌（Colletotrichum）、香蕉枯萎病菌尖孢镰刀菌古巴专化型FOC1(Fusarium oxysporum f. sp. cubense 1）和FOC4（Fusarium oxysporum f. sp. cubense 4)、黄瓜瓜链格孢菌（Alternaria cucumerina）6种植物病原真菌、白骨壤内生真菌链格孢菌（Alternaria alternata）和罗非鱼海豚链球菌（Streptococcus iniae）为指示菌，通过平板对峙法和滤纸片法对杨叶肖槿内生真菌提取物进行抗真菌和抗细菌活性筛选。【结果】从杨叶肖槿中共分离纯化出60株内真生菌，分属于5个属25个种。其中，炭疽菌属（Colletotrichum）和间座壳属（Diaporthe）为优势菌属，分离率为48.33%和26.67%；其余菌属分别是葡萄座腔霉属(Botryosphaeria)、亚隔孢壳属(Didymella)和小隐孢壳属(Cryptosporella)，对应的分离率为15.00%、6.70%和3.33%。从杨叶肖槿树皮组织分离到的菌株最多，共分离到4个属23株菌，占总分离量的38.33%；其次为叶片组织（31.67%）和茎组织（30.00%）。发现12株内生真菌与NCBI数据库已公布ITS rDNA序列相似性低于95.00%，为潜在新种。抑菌结果表明，炭疽菌J1-20对8种指示菌均有较强的抑菌活性，对柿树炭疽菌、核桃炭疽菌、荔枝炭疽菌、香蕉枯萎病菌FOC1和FOC4、黄瓜瓜链格孢菌、白骨壤链格孢菌的抑菌率分别为39.39%、25.00%、19.10%、32.43%、28.20%、89.00%和74.19%，对罗非鱼海豚链球菌的抑菌圈为21.00 mm。【结论】杨叶肖槿内生真菌多样性丰富，分布较均匀。其中J1-20菌株对8种指示菌具有广谱抑菌性，有较好的开发潜力。

【目的】研究野生无距虾脊兰Calanthe tsoongiana在萌芽期、花期、果期、衰亡期根际土壤真菌和根系内生真菌多样性差异，旨在明确不同生长发育时期真菌多样性特征，为无距虾脊兰种群扩繁提供理论依据。【方法】采用内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)测序技术，分析野生无距虾脊兰4个时期根际土壤真菌与根系内生真菌群落的物种组成及相对丰度变化，找出各时期优势真菌。【结果】4个时期共获得307 288条优化序列，平均序列长度为643 bp，隶属16门68纲176目413属。萌芽期根际土壤真菌和根系内生优势真菌为分别被孢霉属Mortierella和红菇属Russula，花期优势真菌分别为青霉属Penicillium和粗糙孔菌属Trechispora，果期分别为Paraboeremia和蜡壳耳属Sebacina，衰亡期分别为Paraboeremia和镰孢属Fusarium。Alpha多样性指数显示：根系内生真菌多样性和相对丰度从萌芽期到果期依次递增，在果期达到顶峰，衰亡期又急剧下降。根际土壤真菌中花期多样性最高，其余3个时期变化相对平稳。【结论】无距虾脊兰根际土壤真菌和根系内生真菌多样性和丰富度在整个生长发育时期存在较大差异，花期和果期真菌多样性高于衰亡期和萌芽期。图5表2参34

在前期研究发现,韭菜处理可以减轻香蕉枯萎病和根结线虫病害的发生,推测韭菜中含有能抑制病原菌及致死根结线虫的生防菌。对韭菜根际真菌和内生(叶片和根系)真菌的种群结构及多样性进行比较分析,以期为分离鉴定韭菜中抑菌和杀根结线虫的生防真菌提供理论依据。通过Illumina平台对韭菜根际真菌和内生(叶片和根系)真菌样品中的18S rRNA序列进行测序,并进行生物信息学分析。结果表明:从韭菜根际土壤、根系、叶片中获得348 484高质量序列和123个操作分类单元(OTU)。根际真菌的Chao、ACE、Shannon指数显著高于内生真菌(叶片和根系),而Simpson指数则显著小于内生真菌。根际真菌群落主要由子囊菌门(Ascomycota)(67. 20%)和担子菌门(Basidiomycota)(24.44%) 2个菌门组成;而内生真菌主要由子囊菌门组成,在叶片和根系中含量分别为91. 39%和96. 60%。在检测到的5个菌门中,内生真菌中子囊菌门显著高于根际土壤,其他菌门则显著低于根际土壤。叶片和根系中内生真菌稍有不同,但是差异并不显著。该研究表明,韭菜根际真菌和内生真菌的种群结构存在显著差异,根际真菌的多样性及丰富性显著高于内生真菌。该研究为分离鉴定韭菜中抑制植物病原菌及致死根结线虫的生防真菌提供参考。

为揭示青钱柳内生真菌的分布、多样性及其代谢产物的抑菌活性,并筛选产黄酮的内生真菌,挖掘植物内生真菌新资源,采用组织分离的方法对青钱柳的枝、皮、叶、根部位的内生真菌进行分离,用马丁氏培养基、察氏培养基、PDA培养基对内生真菌进行培养,通过观察内生真菌的形态特征进行初步分类,同时提取其发酵产物,并以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌为供试病原菌对分离的内生真菌进行抑菌活性试验,通过显色试验和薄层层析试验筛选出产黄酮的内生真菌.试验共分离得到67株内生真菌,通过菌落形态和显微形态对分离得到的青钱柳内生真菌进行分类,其分别隶属于3纲4目6科10属;青钱柳不同组织中内生真菌的分离结果不同,其中根部分布的内生真菌从数量和种属上都占优势;马丁氏培养基培养的菌株种类少、数量多,而察氏培养基和PDA培养基培养的菌株种类较多、菌株较少;抑菌试验共得到13株具有抑菌作用的内生真菌,其中有2株内生真菌的发酵产物对供试菌株均表现出较强的抑菌活性,分别属于青霉属和链格孢属;并且筛选出7株菌株(PP03、PY01、PG11、PZ06、PY12、PP12和PP06)具有稳定的产生黄酮类化合物的能力.

兰科植物的生长发育离不开其根部内生真菌的共生。为探明羊耳蒜（Ｌｉｐａｒｉｓ ｊａｐｏｎｉｃａ）根部内生真菌种类和多样性规律，选取东北地区７个不同地理种群的羊耳蒜植株进行根部内生真菌的分离、培养，根据形态特征和ｉＴｓ序列进行种类鉴定及其多样性与环境因子的相关性分析。共分离到内生真菌９个类群２０１个菌株，其中大部分菌株属于ＴｕＬａｓｎｅＬＬａ和ｓｏｒｄａｒｉｏｍｙｃｅＴｅｓ真菌，在所调查的地理种群中均有分布，而其余７类真菌为稀有属。不同地理种群羊耳蒜根部内生真菌的多样性无显著差异，但ｃＢｓ种群分离得到的真菌类群较少。各地理种群根部内生真菌的类群数量和多样性均与羊耳蒜株高呈显著正相关，推测内生真菌种．．．

【目的】研究山苍子可培养内生细菌的多样性。【方法】利用添加植物组织浸提液的营养琼脂培养基分离山苍子根、茎、叶及果实中的可培养内生细菌,采用16SrDNA序列鉴定法对分离获得的山苍子可培养内生细菌进行鉴定。同一组织内,对16SrDNA序列及形态完全一样的菌株合并冗余,用Clustalx对分离得到的菌株16SrD-NA进行排序,构建Neighbor-Joining系统进化树,并计算Jaccard指数和多样性指数。【结果】共分离得到52株山苍子可培养内生细菌(根23株、茎8株、叶7株、果实14株),分属于芽孢杆菌属(Bacillus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、Paenochrob...

【目的】研究降香黄檀心材和边材中真菌群落结构和多样性及其与木材内环境因子的关系,为降香黄檀内生真菌价值评价和资源利用提供依据,为指导降香黄檀人工促进心材形成提供参考。【方法】采用高通量测序技术,结合木材理化性质,研究降香黄檀心材和边材内生真菌的群落结构和多样性,并采用方差分析、冗余分析等手段分析其与降香黄檀内环境因子的关系。【结果】经过高通量测序,共获得2 193 336条序列,碱基总数为761 438 850 bp,有效序列平均长度为385 bp。得到3 621个OTUs,分属26纲67目116科167属186种。纲水平上,心材内生真菌优势菌群为伞菌纲、粪壳菌纲和散囊菌纲,边材内生真菌优势菌群为粪壳菌纲、座囊菌纲、伞菌纲、地舌菌纲和银耳纲;属水平上,心材内生真菌优势菌群为暗枝顶孢壳属、镰刀菌属、孢子丝菌属、黑酵母样真菌属和球托霉属,边材内生真菌优势菌群为镰刀菌属、毛色二孢属、枝孢属、念珠菌属、德巴利酵母属和木霉属;种水平上,心材内生真菌优势菌群为孢子丝菌环境种、卵形孢球托霉菌和尖孢镰刀菌,边材内生真菌优势菌群为可可毛色二孢菌、酵母菌和镰刀菌。方差分析、冗余分析等结果表明,p H、灰分和钾元素与降香黄檀内生真菌属水平的群落结构呈负相关,热水抽提物、镁和钙元素与大部分属真菌群落呈正相关,与少量属真菌群落呈负相关。含水量、热水抽提物、矿质元素钙和镁与多样性指数Chaol、Shannon和Simpson指数呈正相关,p H、灰分和钾元素与其呈负相关。【结论】降香黄檀心材和边材含有丰富的内生真菌群落,群落结构丰度和多样性均为心材大于边材。引起心材和边材内生真菌群落结构性差异的主要木材内环境因子为p H、灰分和矿质元素钾,引起多样性差异的主要木材内环境因子为p H、含水率、矿质元素钙和钾,且含水平影响最大。

红树林是生长在热带和亚热带潮间带河口地带的耐盐植物群落,分布在南纬30°与北纬30°之间,具有盐胁迫、高矿物组成、强还原性、频繁的潮汐等特征,也使植物对营养、空间的竞争异常激烈,特殊生境使红树林植物内生真菌多样性丰富,必然会造成不同于其他生态系统的良好生物活性、独特化学结构的活性功能分子。红树属是红树林植物中分布较广泛的一个属,包括8个种,分别是红海榄、红树、红茄苳、美洲红树、Rhizophora harrisonii、R.racemosa、树冬红树和萨摩红树。迄今为止,从红树属分离出内生真菌类群已达23目41科64属,其中对拟盘多毛孢属、青霉属和毛霉属的内生真菌代谢产物研究的最为广泛;从红树属内生真菌中分离鉴定出195种天然产物,包括生物碱类、萜类化合物、香豆素类、色酮类化合物、醌类化合物、杂氧蒽醌类化合物、肽类、酚酸类化合物、内酯类等化合物,从红树属植物中发现许多结构新颖的次生代谢产物,从中国南海红树林红茄苳内生拟盘多毛孢真菌中发现一系列罕见的具有亲脂性取代基的新色酮类化合物pestalotiopsones A-F (107—112),从拟盘多毛孢属JCM2A4中发现2个具有柔性结构的补身烷型倍半萜-环青霉醛酸的新骨架化合物pestalotiopens A和B (83, 84)。此外,许多化合物显示出良好的抗肿瘤、抗菌和抗氧化等生物活性,如化合物pestalpolyol 1(119)具有很强的抑制作用,对小鼠淋巴瘤L5178Y细胞的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))值为4.10μmol·L~(-1)。从内生真菌毛霉QEN-189中分离到的吲哚生物碱rhizovarins A,B和F(46, 47, 50)对肺癌细胞A549抑制作用强,IC_(50)值分别为11.5、6.3和9.2μmol·L~(-1),对白血病细胞HL-60有强抑制作用,IC_(50)值为9.6、5和7μmol·L~(-1)。

以红树林植物红海榄Rhizophora stylosa和秋茄Kandelia candel为对象,研究了2种植物的内生真菌的多样性。结果表明:红海榄和秋茄的枝、叶中分别分离到内生真菌30株和27株,内生真菌的优势属分别是茎点霉属Phoma和拟盘多毛孢属Pestalotiopsis;同种植物的枝和叶中内生真菌的定殖率差异显著;红海榄和秋茄内生真菌的Shannon-Wiener多样性指数分别为1.7890和1.7473,Pielou均匀度指数分别为0.5260和0.5302。2种红树林植物的内生真菌显示出丰富的多样性。