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[期刊] 海洋水产研究  [作者] 苏来金  柳淑芳  李振  刘琦  周德庆  
针对检测过程中影响病毒富集的主要因素,按正交试验设计了9种不同的病毒富集方法,利用RT-PCR对富集方法进行检测和分析评价。结果表明,吸附缓冲液pH对NVs富集有显著影响(P0.05)。在吸附缓冲液中性环境(pH7.5)下,以苏氨酸作为吸附剂吸附两次,用PEG6000与PEG8000混合沉淀两次为最优富集方法,病毒回收率为23%,检测灵敏度为150pgRNA。利用此法对青岛地区贝类样品进行了检测,阳性检出率为12.5%,表明优化的富集方法可以满足实际检测的要求。
[期刊] 上海海洋大学学报  [作者] 贾添慧  董蕾  王永杰  喻勇新  
为了解决目前巢式PCR法检测牡蛎样品中GⅡ型诺如病毒时存在的非特异性扩增、假阴性等问题,本研究对NCBI数据库中在线获得的所有GⅡ型诺如病毒序列进行系统分析,重新设计出针对GⅡ型诺如病毒检测的通用型巢式PCR引物(NG2OF/NG2OR),并从基因型覆盖度、特异性、灵敏度和实际样品检测的稳定性几个方面对新设计的引物进行评估。结果显示:(1)新引物的特异性好,只对GⅡ型诺如病毒进行有效扩增,且不受牡蛎样品本底的影响。(2)新引物灵敏度高,最低可检测至26.4个拷贝。(3)在对92个牡蛎样品进行检测时,新引物的阳性检出率为28.3%,比经典引物高出7.5%。因此,新建立的GⅡ型诺如病毒巢式PCR检测方法在检测牡蛎样品时特异性更强,灵敏度更高,为牡蛎中诺如病毒的检测提供了一种新的、可靠的技术手段。
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 曲梦  江艳华  李风铃  姚琳  逄凤娇  王联珠  翟毓秀  
RNA提取是诺如病毒检测的关键步骤,而目前贝类中诺如病毒RNA提取、检测方法的比较与评价常囿于缺乏量值明确、无生物安全隐患的标准样品作为参考依据。本研究将前期制备的GⅡ型诺如病毒装甲RNA (3.0×10~(10)拷贝)作为标准样品,人工污染牡蛎(Ostrea gigas tnunb)消化腺匀浆物,用4种常见RNA提取方法:TRIzol试剂、Viral RNA Kit、High Pure Viral Nucleic Acid Kit、柱式病毒RNAOUT试剂盒,分别提取RNA,经实时荧光RT-PCR检测后,利用标准曲线进行定量分析,分别计算4种方法对装甲RNA的回收率。结果显示,对于匀浆样本,TRIzol法对装甲RNA的回收率最高(6.80±0.89)%,显著高于Viral RNA Kit (4.51±2.28)%,二者的回收率又显著高于High Pure Viral Nucleic Acid Kit (0.24±0.05)%与柱式病毒RNA_(OUT)试剂盒(0.11±0.02)%(P
[期刊] 海洋水产研究  [作者] 尚德荣  翟毓秀  宁劲松  盛晓风  张翠  
无机砷是水产品质量检验中主要的安全卫生指标,目前国际上ISO和CAC标准中尚无测定水产品中无机砷的方法标准。在各种砷化物中,无机砷比多数有机砷的急性毒性大,用食品中无机砷的限量标准来评价食品的质量较为适合。食品中的砷可能以不同的化学形态存在,包括无机砷和有机砷,在6mol/L盐酸水浴下,无机砷以氯化物形式被提取,实现无机砷和有机砷的分离,在2mol/L盐酸条件下,测定无机砷。
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 柳淑芳  李振  周德庆  
从2006年1月至2007年1月,在青岛市内3区5个主要水产品批发市场连续采集贝类样品,其中太平洋牡蛎Crassostrea gigas 208个、毛蚶Scapharcasubcrenata169个、杂色蛤Venerupis variegata169个,采用RT-PCR方法检测诺如病毒(Novoviruses,NV)的感染,旨在为贝类食品的安全监控提供基础数据资料。研究结果表明,太平洋牡蛎和毛蚶样品中NV检出率分别为10.1%和5.3%,而杂色蛤未检出,NV流行的季节主要是11月至次年3月,感染部位主要分布于贝类的消化道。
[期刊] 上海海洋大学学报  [作者] 曹爱英  吴成业  刘海新  
研究了利用高效液相测定水产品中甲苯咪唑残留的检测方法。采用乙酸乙酯-氨水作为提取剂,提取液蒸干后的残留物用二氯甲烷进行溶解,并采用S iliaBond NH2SPE柱进行净化,净化后蒸干洗脱液,用流动相溶解最后的蒸干物,过0.45μm滤膜,最后利用高效液相进行测定。色谱条件:RP18色谱柱,用磷酸溶液和乙腈为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温35℃;247 nm下紫外检测器检测。结果表明:采用本方法对水产品中甲苯咪唑的残留进行测定,平均回收率为80%~98%,相对标准偏差为0.5%~2.5%;方法定量检测限(信噪比S/N=3)为10μg/kg。
[期刊] 西南农业学报  [作者] 吴明媛  韦信贤  童桂香  兰柳春  杨姝丽  
优化改进液相色谱-串联质谱法测定水产品组织中硝基呋喃类代谢物残留的方法,用0.3 mol/l盐酸对样品进行水解,2-硝基苯甲醛进行衍生化,37℃避光振荡16 h后用磷酸氢二钾与氢氧化钠混合溶液调节水解液p h为7.0~8.0,利用乙酸乙酯进行萃取。萃取液氮吹至干,用甲醇溶液定容,用作hplC-mS/mS测定。结果表明,4种硝基呋喃代谢物在1~500 ng/m l范围内线性关系良好,加标回收率为92.1%~103.0%,相对标准偏差均小于10.0%。方法检测下限为0.1μg/kg。试验证明,该方法稳定可靠,提高了样品处理效率,解决了阳性样品检测值偏低的问题。
[期刊] 淡水渔业  [作者] 李谷  黄正  范玮  刘红艳  
[期刊] 沈阳农业大学学报  [作者] 黄珊  李新华  张金玲  
以稳定米糠为原料,研究其水溶性提取物中VE的富集。通过对不同工艺条件的研究以及添加各种乳化剂和酶制剂的单因素分析,确定采用二次提取工艺;料水比1∶4;提取温度为60℃;乳化剂采用蔗糖脂肪酸酯(SE=13),添加量为0.4%;酶采用木瓜蛋白酶,添加量为米糠蛋白含量的1.2%;使VE得到最大限度的富集。
[期刊] 淡水渔业  [作者] 凌去非  杨彩根  
近年来,我国水产业尤其是特种水产品养殖业发展极为迅速,一些地区名特优水产品养殖已逐步向基地化、集约化、规模化和集团化方向发展。但是,多数特种水产品属于肉食性动物,如鳜、鲈、乌鳢、鳖;少数属于杂食偏动物性动物,如罗氏沼虾、日本沼虾、黄鳝、河蟹。在大规模...
[期刊] 淡水渔业  [作者] 陶健  徐黎明  刘淼  赵景壮  曹永生  卢彤岩  尹家胜  刘红柏  
以传染性造血器官坏死病毒Sn1203株(IHNV-Sn1203)基因组RNA提取物为模板,利用生物信息学软件分析,通过RT-PCR一步法扩增截短的G蛋白基因序列(约375 bp),将其克隆到表达载体p ET-27b中,构建重组表达质粒p ET-27b-IHNV-short G,通过大肠杆菌Rosetta表达菌株获得高效表达。在IPTG浓度为0.25 mmol/L时,37℃诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析显示目的蛋白相对分子质量约为14 000,符合预期大小,并以包涵体的形式表达,4 h时目的蛋白表达量最大。蛋白经变性、复性处理后获得不带任何标签的纯化蛋白,并利用该蛋白制备兔抗血清。ELIS...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 岑剑伟  李来好  杨贤庆  魏涯  刁石强  辛少平  周婉君  石红  
以鲀科鱼类为研究材料,采用超声波法提取,C18-WCX联用固相萃取纯化,使用高效液相色谱紫外检测方法测定水产品中河鲀毒素含量,通过探索提取方法和色谱条件对检测结果的影响,并确定和优化色谱分离和紫外检测条件,建立了一种高效液相紫外检测测定水产品中河鲀毒素的方法。该检测方法稳定性好,可操作性强,加标回收率在75%~82%之间,相对标准偏差小于15%,检出限达到0.02mg/kg。与现行河鲀毒素检测方法相比,该方法具有对仪器要求低、操作简便的特点,易于推广应用。
[期刊] 海洋水产研究  [作者] 张海燕  周德庆  
在目前我国海洋生物中石油烃检测方法(GB17378.6-1998)基础上,对方法中的皂化温度和时间、萃取剂和溶剂的选择以及萃取过程的优化进行了研究。将海洋生物样品于38℃烘箱中经NaOH皂化10 h,能确保样品皂化完全且不受室温限制;用石油醚(30~50℃)代替氟里昂萃取,其效果更佳且减少了对环境的污染;蒸干后的残留物用石油醚(60~90℃)溶解,去水后用荧光分光光度计进行测定。分析结果表明,本方法的检测限为0.26 mg/kg,比目前采用的国标方法高3倍多;相对标准偏差不超过7.7%,加标回收率结果在88.5%~108.9%之间,适合于水产品中石油烃的检测。
[期刊] 清华大学学报(自然科学版)  [作者] 汪向伟  梁漫春  李钢  何水军  
铀的利用是核能开发的重要内容,然而,铀及其化合物进入水体会对环境和人类健康造成严重危害,因此水中铀的分析以及处理备受关注。该文从实验室水中铀分析以及环境含铀水体治理两方面对当前水中铀分离富集主流方法进行了阐述,详细介绍了各种方法最新研究进展以及当前存在的问题。最后总结了目前水中铀分离富集方法优缺点和应用现状,并对水中铀分离富集方法发展趋势进行了展望。
[期刊] 上海水产大学学报  [作者] 刘辰麒  王锡昌  丁卓平  
用高效液相色谱法同时分离检测水产品中的多组分生物胺。这些生物胺包括:色胺,章鱼胺,2-苯乙胺,腐胺,尸胺,组胺,5-羟色胺,酪胺,亚精胺和精胺。高氯酸溶液提取,丹酰氯衍生,再用氨水去除尸胺干扰峰。C18反相色谱柱,用醋酸胺和乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL/m in,柱温40℃;254 nm下紫外检测器检测。结果表明:平均回收率是79.59%~111.10%;相对标准偏差为2.6%~15.8%;方法检测限(信噪比S/N=3):腐胺、亚精胺0.8μg/g;尸胺、组胺、酪胺、精胺1μg/g;章鱼胺、5-羟色胺2μg/g;2-苯乙胺3μg/g;色胺5μg/g。
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