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[期刊] 中国农业科学
[作者]
王姝婷 桂文君 郭逸蓉 杨挺 朱国念
【目的】研制出一种适合于氯霉素残留快速测定的金标试纸条,并对该试纸条的保护剂进行研究,使得研制出的试纸条保存期足够的长。【方法】根据竞争性金免疫层析法原理,研制了氯霉素速测金标试纸条,并选择了蔗糖、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙二醇(PEG)、牛血清蛋白(BSA)、表面活性剂Tween20、防腐剂等物质,采用经验尝试法配制了一系列的配方,对试纸条不同部位进行处理,通过37℃和60℃下热稳定性测试,并与未经稳定剂处理的对照进行比较,筛选出适宜的试纸条保护剂。【结果】经该复合保护剂处理的氯霉素速测金标试纸条,在4℃、37℃和60℃下分别保存180 d、30 d和10 d,显色基本不变,对于...
关键词：
氯霉素 胶体金 试纸条 保护剂
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘晓敏 柴同杰 邹明强 黄蓉 张明亮
【目的】研制魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条,为魏氏梭菌病的快速诊断提供新方法。【方法】采用分子生物学方法制备魏氏梭菌α毒素,将其免疫家兔制备多克隆抗体。用制备的抗魏氏梭菌α毒素多克隆抗体作为胶体金标记抗体和检测线上的捕获抗体,制备魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条,对其特异性、敏感性、稳定性和重复性进行检测。用制备的魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条对临床样品进行检测,比较其检测结果与PCR检测结果的符合率。【结果】成功制备了魏氏梭菌α毒素多克隆抗体。成功研制了α毒素快速诊断金标试纸条,其检测线上抗体的最适包被质量浓度为0.06μg/mL。研制的试纸条仅与魏氏梭菌α毒素发生反应,且不同批次的试纸...
关键词：
魏氏梭菌 胶体金 免疫层析 α毒素
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王自良 王建华 杨艳艳 杨继飞 张海棠 范国英 张改平
以BSA-CAP-HS免疫Balb／C小鼠,用细胞融合技术筛选抗氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞,体内诱生腹水法制备cAP mAb,并鉴定其免疫学特性;依据胶体金免疫层析试验(GICA)原理,以CAP mAb 为金标抗体,研制CAP残留快速检测金标试纸(CAP-Strip),并对其性能进行测定。结果表明,筛选出了3株杂交瘤细胞,其中最好的4F9-B2株间接ELISA效价细胞培养上清为1:1 280,腹水为1:640 000,亲和常数(Ku)为 1．84×1010 L/mol,对CAP的半数抑制浓度(IC50)为0．88μg/L,与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应(CR%)为150%,与其他...
[期刊] 华北农学报
[作者]
王自良 张改平 杨艳艳 张海棠 杨继飞 刑广旭 柴书军
以分泌抗氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞株的建立为基础,应用胶体金免疫层析试验(GICA)成功研制出CAP残留快速检测试纸(CAP_Strip),并对其性能进行了测定。结果表明,CAP_Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,目测检测限为0.5μg/L;与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应为160%,与其他酰胺醇类和抗菌药物无交叉反应;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100%;10 min内显示结果,具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合CAP残留快速检测的推广应用。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵丹丹 杨国平 刁有祥 陈浩 提金凤 张璐 张英 李川川
【目的】鸭瘟（ＤＰ）是由鸭瘟病毒（ＤＰＶ）引起的一种急性、败血性传染病，以头颈肿胀、食道黏膜和泄殖腔黏膜出血、黄白色溃疡，头颈部皮下有黄白色胶冻样渗出为特征。该病一旦发生，发病急、死亡快、死亡率高，对养鸭业危害严重。快速诊断是控制鸭瘟的重要措施之一，可以及时确定病原，以便采取有效的防制手段。试验旨在建立鸭瘟病毒（ＤＰＶ）胶体金快速检测方法。【方法】利用生物学软件Ｐｒｏｔｅａｎ分析，选择鸭瘟病毒抗原表位较多的一段序列设计引物，ＰＣｒ扩增目的基因。连接到载体ＰＭＤ－１８ｔ上，测序正确后再连接到原核表达载体Ｐｅｔ－２８ａ上。将获得的重组质粒转化至ｒｏｓｅｔｔａ感受态细胞中进行诱导表达。表达的蛋白经纯．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
樊海新 李寒松 李复辉 马良友 朱平 吴金节 王希春
[目的]建立用于快速检测伏马菌素B1(FB1)的胶体金免疫层析试纸条。[方法]首先制备了FB1单克隆抗体和FB1-OVA偶联抗原,然后将FB1单克隆抗体与胶体金制成金标抗体包被在金标垫上,将FB1-OVA抗原和羊抗鼠Ig G包被在硝酸纤维素膜(NC膜)表面分别作为检测线和质控线。采用间接竞争法检测待检样品中的FB1与NC膜上的FB1-OVA抗原竞争结合金标抗体中的FB1单克隆抗体情况,并以检测线和质控线显示检测结果。[结果]本试验优化了金标抗体、检测抗原及羊抗鼠Ig G的包被量,检测FB1的灵敏度可达到2 ng·m L-1,最佳判定质量浓度为40 ng·m L-1。[结论]本试验制备的检测试纸...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
夏武强 胡叶军 孙琛 张美珍 王伟萍 桑丽雅
通过研究胶体金免疫层析技术，建立了一种快速检测水产品中甲基睾酮含量的方法。将待测样品中的甲基睾酮和试纸条检测线上包被的人工抗原（ＭＴ－ＢＳＡ）竞争性结合金标结合垫上包被的胶体金－甲基睾酮单抗聚合物，根据检测线呈现的红色线条深浅来判定样品的阴阳性。结果显示：试纸条上ＭＴ－ＢＳＡ抗原工作浓度为１．０Ｍｇ／Ｍ Ｌ，羊抗鼠二抗工作浓度为１．５ Ｍｇ／Ｍ Ｌ，试纸条的最低检测限达到１０μｇ／ｋｇ，与甲基睾酮类似物的交叉反应率低；使用甲醇提取，４倍ＰＢＳＴ稀释，整个检测所需时间仅１０～１５ Ｍｉｎ，适用于大规模样品筛选。
[期刊] 水产学报
[作者]
辛志明 樊海平 吴斌 张新艳
采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体分泌细胞株,获取抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体,柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金颗粒,选择直径20 nm的胶体金颗粒,标记抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体并制备胶体金垫。将胶体金垫与喷涂有抗豚鼠气单胞菌兔多克隆抗体和羊抗鼠抗体的硝酸纤维素膜及样品吸收垫等组装成免疫层析试纸条,建立豚鼠气单胞菌的快速检测方法。用灭活细菌与血清混合的模拟样本测定试纸条的特异性、灵敏度,结果显示,试纸条对嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、荧光假单胞菌、副溶血弧菌等13种常见病原菌没有交叉反应,与豚鼠气单胞菌显示特异性反应,检测灵敏度为1×106CFU/mL,结果显示时间小...
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘庆堂 职爱民 邓瑞广 杨艳艳 杨继飞 柴书军 张改平
建立了分泌抗链霉素单克隆抗体(STRmAb)杂交瘤细胞株并生产了STRmAb,采用胶体金免疫层析试验(GICA)技术成功研制出STR残留快速检测试纸(STR-Strip),并对其性能进行了鉴定。结果显示,目测检测限为12.5μg/kg;与氯霉素等药物无交叉反应;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100%。研制的快速检测试纸可以在10min内显示结果,具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合STR残留的现场快速检测。
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
黄巧莲 金庆日 章先 周一媚 陈彦永 徐露凝 杨永春 程昌勇 田广燕 桂海娈 方维焕 宋厚辉
针对霉菌毒素精准检测技术的开发对于保障食品安全至关重要。利用胶体金与赭曲霉毒素Ａ单抗偶联物和赭曲霉毒素Ａ－ＢＳＡ偶联物（ＯＴＡ－ＢＳＡ），开发了一种快速检测赭曲霉毒素Ａ的方法。研究结果表明：１当ＯＴＡ－ＢＳＡ配制终质量浓度为４．８ ｇ·Ｌ～（－１），质控线用羊抗鼠Ｉｇｇ配制终质量浓度为１．５ ｇ·Ｌ～（－１），硝酸纤维素（ＮＣ）膜的包被量为１．０μＬ·Ｃｍ～（－１）时呈现最清晰、最均匀的条带。２赭曲霉毒素Ａ胶体金快速检测试纸条的灵敏度达到１．０μｇ·Ｌ～（－１），检测时间仅为５ ｍＩＮ，非常适合现场快速检测。该检测试纸条具有携带方便、灵敏度高、特异性强等优点。由于本方法检测时间短，灵敏度高，与．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
潘莹 杨家辉 彭发永 黄友华 秦启伟 黄晓红
为建立一种快速灵敏、可视化的适用于临床样品检测新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)的方法，本研究针对SGIV特异基因ORF014L序列设计特异性引物及探针，建立重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术及结合侧流层析试纸条(lateral flow dipstick,LFD)(RPA-LFD)的SGIV检测技术。RPA反应使用10μmol/L的引物浓度，在40.1°C恒温反应20 min即可完成特异性病毒的检测，最低检测限为10~2个/μL标准质粒。RPA-LFD反应在42°C恒温反应8 min可将检测结果通过试纸条可视化呈现，最低检测限为10~1个/μL标准质粒，且不与其他常见水生动物病原发生交叉反应，临床样品检测结果也与PCR检测结果一致。RPA、RPA-LFD均能特异性检测SGIV，两者的检测限均比常规PCR灵敏。RPA-LFD法具有快捷简单、结果可视化的特点，在临床应用具有较好的应用前景。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
胡思顺 郑兴华 蔡开妹 彭伏虎 张文泽 李自力 肖运才 刘梅 毕丁仁
【目的】结合胶体金免疫层析技术建立一种适合养鸡业基层生产人员使用的便捷的快速诊断禽流感病毒感染鸡群的方法。【方法】将含禽流感病毒非结构基因ns1的表达载体KG-NS1转化入BL21(DE3)感受态细胞,筛选阳性克隆进行诱导表达,表达产物用GST亲和层析柱进行纯化和Western-blot分析;以NS1重组蛋白为诊断抗原,抗鸡IgFc的单抗标记的胶体金为示踪物,结合免疫层析技术,组装禽流感病毒NS1抗体的免疫胶体金鉴别诊断试纸条,评价其灵敏度和特异性,并对试验感染和临床采集的血样进行检测。【结果】NS1重组蛋白分子量约为52kD,具有免疫学活性。在25min内用肉眼观察到禽流感病毒感染鸡血清和N...
关键词：
禽流感 NS1蛋白 胶体金试纸条
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
刘莹莹 卢瑛 赵勇 潘迎捷
为能够快速检测水产品中副溶血性弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ），本研究首先制备了副溶血性弧菌多克隆抗体，然后将其标记在磁珠上形成特异性磁纳米探针，再分别以副溶血性弧菌多克隆抗体和山羊抗兔ｉｇ ｇ作为检测线ｔ线和质控线ｃ线，建立了双抗夹心模式的磁性免疫层析试纸条。利用正交试验设计的方法，从ｔｗｅｅｎ－２０、ｂｓａ、蔗糖３种因素对层析体进行优化分析，结果表明这３个因素对层析检测的影响效果为ｔｗｅｅｎ－２０＞ｂｓａ＞蔗糖；当ｔｗｅｅｎ－２０含量为５％（Ｖ／Ｖ），ｂｓａ浓度为０．２ ｍｇ／ｍ ｌ，蔗糖浓度为０ ｍｇ／ｍ ｌ时，阳性信号最强，检测的准确性和灵敏度达到最优，通过单纯的．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
钟国华 何玥 刘萱清 胡美英 高燕
【目的】优化毒死蜱高效降解酶液保护剂组成配方,明确其在不同条件下降解毒死蜱的稳定性。【方法】在自主筛选毒死蜱高效降解真菌Cladosporium cladosporioides(菌种保藏号CCTCCM207111,ITS序列分析GeneBank登陆号EF405864)的基础上,发酵提取其胞外酶,采用"通用旋转回归法"筛选了酶活性保护剂的最佳配方,并进行验证;利用所得配方进行制剂贮藏实验,利用HPLC检验其降解性能稳定性。【结果】所得酶活性保护剂最佳配方为0.70%氯化钠,0.35%甘氨酸,0.03%苯甲酸钠,0.17%凯松,8.38%甘油,所配制降解酶保护剂在贮藏温度20～50℃,贮藏5个月以...
关键词：
毒死蜱 降解酶保护剂 配方优化 稳定性
[期刊] 水产学报
[作者]
杨先乐 湛嘉 胡鲲
建立了尼罗罗非鱼血浆内氯霉素的反相液相色谱测定法(RT HPLC),并研究了以50mg·kg-1剂量的氯霉素单次给药后,不同水温、不同年龄尼罗罗非鱼血浆中药代动力学的差异。结果表明,RT HPLC法检测血浆中的氯霉素基线走势平稳,药峰与杂质峰分离良好,在空白血浆样品中添加0.25,2.5和12.5μg·mL-1标准品,3个水平的平均回收率可达(90.47±3.42)%,且变异系数小于10%;日内精密度和日间精密度均较高,平均变异系数分别为1.199%和1.770%。研究揭示,水温和年龄对氯霉素在尼罗罗非鱼血浆中的药代动力学有一定的影响。水温升高,氯霉素在罗非鱼血浆中吸收、分布和消除速度则明显加...
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