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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
石德时 王桂枝 毕丁仁 覃雅丽 殷斌烈
采用改进的混合酸酐法合成的免疫原氯霉素琥珀酸酯牛血清白蛋白 (CAP HS BSA) ,经红外波谱鉴定后 ,免疫 5只家兔 ,3个月后 ,产生合格氯霉素抗血清 ,用双向琼脂扩散方法测定效价为 1:16。此氯霉素 (CAP)抗血清与氯霉素半琥珀酸酯和琥珀酸钠氯霉素的交叉反应率分别为 85 0 .0 %、80 0 .0 % ,与磺胺二甲嘧啶、磺胺 5 甲氧嘧啶、水溶性氟哌酸、青霉素、链霉素的交叉反应率均小于 0 .0 1%。
关键词：
氯霉素 人工抗原 抗血清
[期刊] 中国农业科学
[作者]
职爱民 李青梅 刘庆堂 刘宣兵 杨继飞 杨苏珍 柴书军 杨艳艳 邓瑞广 张改平
【目的】制备抗庆大霉素(gentamicin,GM)的高亲和力特异性单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性,为进一步研究GM快速检测试剂盒和试纸条打下基础。【方法】用EDC法将BSA和OVA分别和GM偶联作为免疫原或包被原,并经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。用合成的BSA-GM免疫Balb/c小鼠,经过4次免疫后,用间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠,选择高效价、敏感的小鼠进行抗原超强免疫;取其脾细胞应用杂交瘤技术与骨髓瘤细胞建立分泌GM单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株;用体内诱生腹水法制备GM mAb,对GM mAb的效价、敏感性...
关键词：
庆大霉素 单克隆抗体 杂交瘤 初步应用
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
余少梅 艾晓辉 甘金华 刘永涛 索纹纹
以人工合成的强力霉素-牛血清白蛋白(DC-BSA)为抗原免疫BALB/C小鼠,用间接ELISA和间接竞争ELISA法选择细胞融合的备用小鼠;应用杂交瘤技术建立分泌DC McAb的杂交瘤细胞株,用体内诱生法制备DC McAb,并对DC McAb的免疫学特性进行鉴定;应用DC McAb建立检测DC的ciELISA方法,并对其相关特性进行检测。结果表明:筛选后获得1株分泌特异性抗体的细胞3D1-H4,细胞培养上清效价为1∶(8×102),腹水效价为1∶(5.12×105),抗体为IgG1型免疫球蛋白,与四环素、土霉素和金霉素分别有8.87%、5.86%和2.74%的交叉反应率,与其他抑制物无交叉反应...
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘宣兵 滕蔓 张改平 杨艳艳 邓瑞广 侯玉泽 杨继飞
用碳二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-NEO和包被原OVA-NEO,用红外扫描(IR)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-NEO免疫BALB/c小鼠,间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术建立分泌NEOmAb细胞株,用体内诱生腹水法制备NEOmAb;对NEOmAb的效价、亲和性、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。结果表明,成功制备了BSA-NEO人工抗原;筛选出1E9、4E8、1G1共3株敏感特异的杂交瘤细胞,间接ELISA效价细胞培养上清分别为1∶2.56×103、1∶1.28×103、1∶5.12×103,腹水...
关键词：
新霉素 单克隆抗体 免疫学特性
[期刊] 华北农学报
[作者]
王自良 张改平 杨艳艳 张海棠 杨继飞 刑广旭 柴书军
以分泌抗氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞株的建立为基础,应用胶体金免疫层析试验(GICA)成功研制出CAP残留快速检测试纸(CAP_Strip),并对其性能进行了测定。结果表明,CAP_Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,目测检测限为0.5μg/L;与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应为160%,与其他酰胺醇类和抗菌药物无交叉反应;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100%;10 min内显示结果,具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合CAP残留快速检测的推广应用。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
罗利 张静 刘媛 余向阳 马志卿 冯俊涛 刘贤进 张兴
【目的】获得抗川楝素的高灵敏度,高特异性多克隆抗体,建立川楝素的间接竞争酶免疫测定(IC-ELISA)方法。【方法】采用酯化反应合成川楝素的半抗原并经HRMS,NMR及IR鉴定;用混合酸酐法和活化酯法分别合成人工免疫抗原与包被抗原;通过免疫动物获得多克隆抗体。【结果】合成了琥珀酸单酰川楝素(TS)和戊二酸单酰川楝素(TG)2种半抗原,与载体蛋白BSA和OVA分别偶联制备了2种免疫原TS-BSA和TG-BSA,及2种包被原TS-OVA和TG-OVA。免疫后获得的2种抗体效价达6.4×104和3.2×105。经4种不同包被原-抗体组合优化,以(TS-Ab,TG-OVA)组合建立的川楝素IC-ELI...
关键词：
川楝素 半抗原 多克隆抗体 ELISA
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张挪威 丁明星 刘国艳 宋巍巍 柴春彦
为制备特异性识别能力强的琥珀酸氯霉素分子印迹膜,进一步探索利用该膜进行电化学检测琥珀酸氯霉素残留的新方法,试验通过偶联的紫外光引发聚合和相转换成膜过程,制备了HS-CAP分子印迹聚砜膜,并通过紫外分光光度法和电化学方法研究了该膜的吸附特性。结果表明,本试验制备的分子印迹膜在用紫外分光光度法和电化学方法进行检测时,对琥珀酸氯霉素分子表现出了良好的特异性识别能力。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
刘庆玉 王永超 梅自力 冉毅 彭波 贺莉 王超
抗生素在人类医学和动物养殖业中广泛应用,滥用抗生素造成的环境污染是危害公共安全的潜在隐患,为实现水稻秸秆的资源化利用和修复氯霉素污染水体,使用ZnCl_2对水稻秸秆进行改性并制备生物炭以提高对氯霉素的吸附性能。借助比表面积及孔径分析仪(BET)、扫描电子显微镜(SEM)、X射线衍射(XRD)和傅里叶变换红外显微光谱仪(FT-IR)等技术手段对结构特征和理化性能给予表征,并探讨不同热解温度、初始溶液浓度、温度、pH值和离子强度的条件下生物炭对氯霉素的吸附效果的影响。同时对吸附动力学、等温线、热力学和扩散模型进行研究。结果表明:ZnCl_2改性生物炭在1h内对氯霉素具有良好的吸附效果,去除率达90%以上,且700℃下制备的ZnCl_2改性生物炭(Zn-BC700)效果最佳,在平衡时对100mg·L~(-1)氯霉素最大吸附容量为96.68mg·g~(-1),700℃下制备的ZnCl_2改性生物炭的BET比表面积和微孔体积分别为640.175m~2·g~(-1)和0.064cm~3·g~(-1),其在电镜下呈现丰富的管状和簇状结构;FTIR表征发现Zn-BC700上形成了酚羟基和芳香环等含氧官能团; Zn-BC700的XRD光谱上呈现多种含Zn化合物的特征峰,证明Zn粒子成功负载至Zn-BC700上。吸附过程受pH值和离子强度的影响较小,氯霉素在ZnCl_2改性生物炭上的吸附符合伪二级吸附模型和Elovich等温线,物理吸附和化学吸附同时进行,吸附机理涉及分子之间的氢键作用和电子给体受体作用。
关键词：
改性生物炭 氯霉素 吸附 秸秆资源化利用
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陶章生 徐雯 张苗苗 彭良才 丰胜求
将拟南芥CesA家族基因的高变区克隆到融合表达载体pGEX-4T-3中,构建重组质粒pGEX-AtCe-sAs,在大肠杆菌JM109中经IPTG诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白(GST-AtCESAs)。采用GST亲和层析法纯化GST-AtCESAs并制备了多克隆抗体。Western-blotting检测表明,抗体Anti-CESA4和Anti-CE-SA7存在明显的交叉反应,Anti-CESA1、Anti-CESA3、Anti-CESA6、Anti-CESA2、Anti-CESA5、Anti-CESA8均能在拟南芥原生质膜上检测到特异免疫条带,这为进一步深入研究拟南芥纤维素合成机制提供了有...
[期刊] 水产学报
[作者]
朱晓真 王俊亚 贾钊 王梓璇 王邦杰 邹钧
Ⅱ型干扰素，也称干扰素-γ（IFN-γ），是参与辅助性T淋巴细胞1（Th1）免疫应答的关键细胞因子之一。研究表明，鱼类与哺乳类Ⅱ型干扰素同源，不同的是真骨鱼类（Teleost）有两种Ⅱ型干扰素，即IFN-γ和干扰素-γ相关因子（IFN-γrel）。迄今，对鱼类IFN-γ基因的表达规律和功能已有大量报道，而对IFN-γrel的研究尚不深入，产生IFN-γ和IFN-γrel的细胞来源不清楚，它们是否有功能差异也存在争议。为此，本研究构建原核表达质粒，在大肠杆菌DE3中表达草鱼（Ci）IFN-γ和CiIFN-γrel重组蛋白。实验结果显示，重组CiIFN-γ蛋白为可溶性蛋白，而CiIFN-γrel蛋白则不可溶。通过亲和层析和分子筛层析获得了高纯度CiIFN-γ和CiIFN-γrel重组蛋白，免疫小鼠制备了单克隆抗体。通过Western Blotting筛选获得4株特异性高、亲和力强的抗体，结果表明CiIFN-γ单克隆抗体与CiIFN-γrel没有交叉反应，反之亦然，其中FITC标记的两株抗体可用于免疫荧光和流式细胞术分析。此外，Western Blotting分析显示草鱼IFN-γ和IFN-γrel单克隆抗体不识别斑马鱼的同源Ⅱ型干扰素蛋白。本研究制备了首个IFN-γrel的单克隆抗体，为深入研究草鱼Ⅱ型干扰素的产生和生物学功能奠定基础。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
陈松林 杨春 邓文涛 陈细华 夏盛芹
本文用大鳞大马哈鱼生长激素（ｓＧＨ）免疫日本大耳白兔制备了特异抗血清。应用常规酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）对抗血清效价和特异性进行了测定，结果表明ｓＧＨ抗血清只与ｓＧＨ特异反应，与草鱼ＧＨ、草鱼催乳素（ＰＲＬ）、牛ＧＨ及大群大马哈鱼促性腺激素（ｓＧｔＨ）等基本上没有交叉反应，该抗血清的效价约为１：７００００左右。应用ｓＧＨ抗血清，初步建立了ｓＧＨＥＬＩＳＡ检测方法。
关键词：
大鳞大马哈鱼,生长激素,抗体制备
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张苗苗 陶章生 陈婷婷 夏涛 彭良才 丰胜求
纤维素合酶是参与纤维素-β1,4-葡聚糖链延伸的主要催化亚基,为进一步研究水稻中纤维素合酶的作用机理,采用DNA重组技术,将纤维素合酶基因CesA1、CesA2、CesA3克隆入表达载体pGEX-4T-3,构建重组质粒。在大肠杆菌JM109中,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后在原核细胞中成功表达了3种纤维素合酶的融合蛋白,通过谷胱甘肽巯基转移酶(GST)纯化系统获得融合蛋白,以此作为抗原免疫家兔,制备出效价高、特异性强的多克隆抗体。
关键词：
水稻 纤维素合酶 融合蛋白 多克隆抗体
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王莹 郑浩 何成华 张爱华 冯璐璐 皇超英 张海彬
【目的】真菌毒素可导致严重的食品安全问题。本试验旨在制备可用于检测伏马菌素B1的特异性单克隆抗体。【方法】制备伏马菌素B1人工抗原,杂交瘤细胞法筛选杂交瘤细胞株制备腹水型单克隆抗体,并对其特性进行鉴定。【结果】筛选得到杂交瘤细胞株F3,分泌的单克隆抗体亚类为IgG1,轻链类型为κ链;10%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单抗蛋白重链分子质量约为50 kD,轻链分子质量约为25 kD;间接酶联免疫吸附法测定杂交瘤细胞F3细胞培养上清和腹水效价分别为1:3 200和1:51 200;亲和力常数为1.60×10-8 mol.L-1;IC50值可达3.589ng.mL-1;对其它真菌毒素不存在交叉反应;免疫...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
董国伟 王沫 刘贤进 余向阳
采用水溶性碳化二亚胺法 (EDC) ,将MTP与牛血清蛋白 (BSA)、人血清蛋白 (HSA)和鸡卵清蛋白(OVA)共价偶联 ,分别合成免疫抗原MTP BSA、MTP HSA和包被抗原甲胺磷 鸡卵清蛋白 (MTP OVA) ,用合成的免疫抗原对新西兰大白兔进行免疫 ,制得抗血清经鉴定确证为兔抗MTP多克隆抗体 (polyclonalantibody ,PAB) ,效价分别为 1∶15 0 0 0和 1∶12 0 0 0。
关键词：
农药残留 ELISA 甲胺磷
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张鸯 陶明亮 路保通 靳亚平
【目的】制备抗Zhangfei蛋白的单克隆抗体,并鉴定其特性。【方法】用Zhangfei融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0融合,筛选出阳性克隆,应用有限稀释法筛选抗Zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤株;采用腹水诱生法制备单抗腹水,用饱和硫酸铵法纯化腹水抗体;采用间接ELISA、单克隆抗体亚型检测试剂盒、免疫印记技术、曲线拟合方案等分别鉴定单抗效价、亚型、特异性和亲和力等特性。【结果】免疫小鼠的血清抗体效价达1∶5 000以上,细胞融合克隆率为98.96%,阳性克隆率为30.18%,筛选出2株抗Zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤细胞,其培养上清效价均达到1∶800,腹水单...
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