为评估氯己定碘溶液对奶牛乳头消毒效果,90头泌乳奶牛被平均分成3个组:Ⅰ组和Ⅱ组奶牛在挤奶前后分别使用氯己定碘溶液和聚维酮碘溶液来对乳头进行药浴消毒,Ⅲ组奶牛不做任何消毒处理。试验持续至12周。结果表明,1)与试验前相比,Ⅰ组和Ⅱ组奶牛日均奶产量和体细胞数(SCC)差异不显著,Ⅲ组奶牛的日均奶产量极显著下降(P<0.01),SCC值极显著升高(P<0.01);2)持续用药12周后,Ⅰ、Ⅱ组奶牛乳房检出菌株数明显减少,头感染率(33.3%、46.7%)和乳区感染率(11.7%、26.7%)均发生极显著或显著

[目的]酮病是高产奶牛常发的代谢性疾病，本试验旨在通过分析奶牛泌乳早期的生产性能DHI(奶牛群体改良)以及外周血的血细胞成分分析数据，阐明酮病发生与以上指标的相关性，及早预警牧场牛群酮病的发展。[方法]连续3年(2018—2020年)追踪江苏省境内某规模化牧场高产奶牛产后前3个月酮病高发期的生产性能数据，筛选出25头健康和20头酮病奶牛，进一步采集2020年产后第1个月的外周血进行血细胞分析；通过二元Logistic回归模型分析各指标对酮病的预警作用，通过受试者工作特征(ROC)分析确定各指标对酮病的预警值。[结果]奶牛生产性能的回归分析结果显示：乳脂率与酮病显著正相关，乳糖率与酮病显著负相关；奶牛血细胞成分分析结果表明：淋巴细胞数和嗜酸性粒细胞数是与酮病正相关的指标；进一步相关分析发现：鲜牛乳中乳脂率和血液中淋巴细胞数两项联合指标对奶牛酮病具有显著的预警作用，其中乳脂率的最佳分界值为4.21%,淋巴细胞数的最佳分界值为4.815×10~9 L~(-1)。[结论]生鲜奶中的乳脂率和外周血中的淋巴细胞数可作为奶牛产后发生酮病的预警依据，用于指导牧场及时做好调控管理。

为避免生物实验室废弃活细胞对实验室以及环境的污染,通过CCK-8实验观察梯度有效氯含量的84溶液对生物实验室常用的肿瘤细胞的杀伤能力,探究出一种生物实验室废弃细胞灭活及细胞室改良消毒方法。结果表明:在786-0细胞株中,84溶液对肿瘤细胞最佳杀伤力的时间和有效氯浓度为1 min、100 mg/L (P <0.05);不同肿瘤细胞证实了实验结果(P<0.05)。此方法对细胞的杀灭作用最为明显且稳定,可作为一种生物实验室废弃细胞灭活以及细胞室改良消毒方法应用于日常实验中。

奶牛乳房炎发病率较高、病因复杂,是影响世界奶牛业发展的主要常见疾病之一。由金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌等病原体引起的临床和隐形乳房炎对动物性食品安全及畜牧业的正常发展构成巨大安全隐患,全球每年因奶牛乳房炎导致的经济损失多达数十亿美元。近年来随着测序技术的不断突破和测序成本的不断降低,生命科学的研究进入了多组学时代,其在畜牧业中的应用也越来越广泛。对奶牛乳房炎来说,传统的组织病理学筛查、体细胞计数、牛乳pH检测、牛乳电导率检测、酶活检验、红外热显影等诊断技术由于其自身的局限性难以充分全面地阐明其发病机理,已不能满足科研人员的需求。组学技术即Omics,主要包括基因组学技术、蛋白质组学技术和代谢组学技术等。通过基因组学研究不仅能从转录层面上揭示奶牛乳房炎复杂性状的表型变异及遗传基础,还能从转录后调控(miRNAs、LncRNAs等)和表观遗传学修饰(DNA甲基化、组蛋白修饰等)层面挖掘出相关的DNA和RNA变化及多分子间的相互作用规律,能够帮助我们更好地了解奶牛乳腺组织对病原体的免疫应答机制,筛选鉴定出乳房炎抗性的信号通路及关键候选基因,从而提高基因组预测或选择的准确性。利用蛋白质组学技术能够对不同环境不同状态的牛乳及乳腺组织的蛋白质种类、表达丰度、蛋白互作、翻译后修饰等进行比较分析,对差异表达的蛋白质经过COG功能注释、数据库比对、GO和Pathway富集分析,可以从蛋白水平揭示乳房炎发生及防御过程中的复杂调控机制,同时还能发现乳房炎诊断的标记分子,进而为乳房炎治疗药物的研发提供潜在的精准靶点。代谢组学是系统生物学的重要组成部分。通过代谢组学研究,能够同时对机体在内、外环境等复杂因素作用下及特定生理时期内所有低分子量代谢产物(如氨基酸、脂类、碳水化合物等)进行精准、高效的定性和定量分析,从而阐明相关的代谢途径;其作为基因表达的最下游,能使基因和蛋白质表达的微小变化在代谢物水平上得到放大,进而可以更充分地反映细胞功能。将代谢组学技术应用到奶牛乳房炎研究中,能够分析出差异代谢物、鉴定出相关的生物标志物,进而揭示奶牛乳腺的生理及病理变化过程。总之,将各组学技术及多组学整合关联分析应用到奶牛乳房炎研究中可以更深入地揭示其病原防御机制,进而为乳房炎的预测、诊断和治疗提供有价值的参考和借鉴。本文就最近几年组学技术在奶牛乳房炎领域的研究进展进行综述,以期为我国奶牛健康及奶业安全发展提供指导。

在乳制品的开发过程中，乳蛋白是评估牛乳营养价值的重要指标。饲料配方优化是当下实现奶牛生产提质增效的重点工作之一。目前，饲喂过瘤胃氨基酸虽是提高奶牛乳蛋白合成最直接且高效的途径，但多数研究仅限于单一的限制性氨基酸，忽略了对氨基酸营养平衡体系的认识。在奶牛机体内，氨基酸营养作为乳蛋白合成的底物与信号物质，影响着乳腺对血液氨基酸的吸收与利用，但其分子代谢机制尚不明晰。本研究主要从氨基酸对奶牛乳腺蛋白合成的影响及调控两方面进行分析，首先概述了乳蛋白合成的基本途径，必需氨基酸、非必需氨基酸、组合必需氨基酸对乳蛋白产量及浓度的影响；其次详细介绍了必需氨基酸与组合必需氨基酸的供给对奶牛采食量、血液氨基酸浓度、血流量、乳腺细胞的影响，同时在细胞分子角度讨论了乳腺细胞培养所需氨基酸的最优添加剂量，以及必需氨基酸对氨基酸转运载体和信号通路的特异性调节。综上，通过对奶牛乳腺蛋白合成影响因素和分子调控机制的探讨，有助于优化饲料中理想的氨基酸配比与科学的生产模式，为氨基酸营养提高乳蛋白合成的相关研究提供理论参考。

【目的】旨在研究干扰素ε（Interferon epsilon，IFNE）基因在奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells，bMECs）炎症中的表达模式及其潜在的分子功能。【方法】通过PCR和测序技术得到IFNE基因的编码区（Coding sequence，CDS）序列，并采用生物信息学方法分析IFNE基因及其蛋白质的特性；利用RNAi和qPCR技术检测IFNE、干扰素β（Interferon beta，IFNB）、干扰素κ（Interferon κ，IFNK）、半胱天冬酶3（Cystathione aspartase 3，CASP3）、半胱天冬酶9（Cystathione aspartase 9，CASP9）等基因在脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导bMECs炎症反应中的表达量。【结果】IFNE基因的CDS长度为582 bp，可编码由193个氨基酸组成的具有亲水性且不稳定的非分泌蛋白。与对照组（0 h）相比，在LPS诱导3、6、12和24 h的bMECs中白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）和白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）的表达量均显著上调（P<0.05），白细胞介素-8（interleukin-8，IL-8）的表达量极显著上调（P<0.01），表明成功构建了炎症细胞模型。在炎症细胞模型构建成功的基础上，采用qPCR检测bMECs内IFNE基因的表达量结果表明，与对照组（0 h）相比，IFNE基因在LPS诱导bMECs第3、6、12和24 h的表达量均极显著上调（P<0.01），且在诱导6 h的表达量最高。RNAi实验结果表明，干扰IFNE可使得炎症性bMECs内的IL-8、IFNB、IFNK和白细胞介素-10受体亚基β（interleukin-10 receptor subunit β，IL-10RB）基因的表达量均显著上调（P<0.05），IL-6、IL-1β、CASP3、CASP9和BAD基因的表达量均呈极显著上调（P < 0.01）。【结论】IFNE基因在LPS诱导的bMECs炎症反应中的表达量极显著上调（P<0.01），干扰IFNE基因可通过调控IL-6、IL-8、IL-1β、IFNB、IFNK、CASP3和CASP9等基因的表达而缓解bMECs炎症反应，为奶牛乳房炎的分子治疗和抗乳房炎分子育种奠定了理论基础。

[目的]本文旨在从患乳房炎的奶牛乳液中分离鉴定病原菌。[方法]收集患乳房炎奶牛的乳液病料后分别接种绵羊血液平板和麦康凯鉴别培养基,置于37℃培养箱过夜。观察获得的单菌落形态并接种含有血清的液体培养基富集培养,然后煮沸法提取细菌纯培养物的基因组,以该基因组为模板通过PCR扩增未知细菌的核糖体RNA序列并对产物进行测序分析。以不同培养时间测定菌液D_(600)并绘制细菌的生长曲线。用倍比稀释法在96孔板上测定细菌对不同药物的最小抑菌浓度。[结果]从病料中分离到一株革兰阴性菌,命名为JS20170427COW。

为研究提高奶牛乳脂率与乳蛋白含量的营养调控技术,选择体况、胎次、产犊时间、产奶量相近的泌乳盛期中国荷斯坦奶牛27头,采用L9(34)正交试验设计,进行了中性洗涤纤维(NDF)、小肠可消化蛋白(IDCP)、添加过瘤胃保护脂肪酸(RPFA)、过瘤胃保护氨基酸(RPAA)对泌乳盛期奶牛乳脂率与乳蛋白含量的影响试验。结果表明,日粮干物质(DM)中NDF 41%、IDCP按我国《奶牛饲养标准》推荐量92%、脂肪酸钙150 g/d、过瘤胃保护蛋氨酸8 g/d+过瘤胃保护赖氨酸32 g/d,可有效提高奶牛泌乳盛期的乳脂率与乳蛋白含量。

为了构建HSP72慢病毒表达载体,建立稳定表达HSP72的牛乳腺上皮细胞系。以牛HSP72基因序列为模板,设计并合成引物,PCR扩增目的基因,连接到慢病毒表达质粒中,用包装获得的慢病毒感染牛乳腺上皮细胞,经一定浓度的嘌呤霉素筛选,Hochest33342法对细胞核定位,倒置荧光显微镜下观察转染效率,用免疫组化和Western Blot方法验证感染细胞是否稳定表达HSP72。结果显示,携带HSP72基因的慢病毒滴度约为1. 0×109TU/m L;确定嘌呤霉素的最佳筛选浓度为2μg/m L;牛HSP72慢病毒感染细胞表达HSP72,感染的奶牛乳腺上皮细胞在倒置荧光显微镜下可看到绿色荧光,转染效率可达90%以上;免疫组化结果表明,正常细胞和空载体感染细胞,HSP72呈现低表达,转染携带HSP72目的基因载体细胞,HSP72高表达,呈现颜色较深的棕色; Western Blot方法检测证实与正常转染细胞相比,慢病毒空载体转染的奶牛乳腺上皮细胞HSP72表达稍有降低,但无统计学差异,而携带HSP72基因的慢病毒载体转染的细胞HSP72呈现高表达,且差异极显著(P

[目的]本试验旨在探究乳腺炎奶牛乳腺组织中是否存在细胞程序性坏死。[方法]采集健康和乳腺炎奶牛乳腺组织,HE染色后进行形态学观察,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测炎性相关因子基因(IL-1β、IL-6、TNF-α)和程序性坏死相关因子受体相互作用蛋白基因(RIPK3、RIPK1)、混合谱系激酶结构域样蛋白基因(MLKL)和Caspase8基因表达,Western blot检测MLKL和磷酸化MLKL蛋白(p-MLKL)表达。[结果]程序性坏死标记蛋白MLKL在乳腺炎乳腺组织中表达;IL-1β、IL-6、TNF-α和RIPK1 mRNA的表达量极显著升高(P0.05),但p-MLKL蛋白表达量显著增加(P<0.05)。[结论]根据程序性坏死相关因子的表达变化,可以推断出在乳腺炎乳腺组织中存在细胞程序性坏死。

【目的】采用比较蛋白质组学技术分析、检测了临床健康与乳房炎奶牛乳腺组织中的差异表达蛋白,以寻找药物治疗目标,探讨奶牛乳房炎的发生机理。【方法】采用二维凝胶电泳分离临床健康与乳房炎奶牛的乳腺组织蛋白,考马斯亮蓝染色,PDQuest7.4软件自动匹配检测差异表达蛋白斑点,高效液相色谱串联离子阱质谱分析鉴定。【结果】凝胶图谱中检测出15个差异蛋白斑点,串联质谱分析后有12个蛋白斑点可搜索到相应的结果,对应于10种蛋白质,主要涉及结合、运输和催化活性等分子功能,参与细胞、代谢及生物调节等生理过程。【结论】临床健康与乳房炎奶牛的乳腺组织中蛋白的表达模式存在差异,表达差异蛋白与奶牛乳房炎的发生相关,对其分...

【目的】通过分析临床健康和乳房炎奶牛乳腺组织膜蛋白的差异表达,以期在蛋白质水平探索奶牛乳房炎的发生机理。【方法】采用二维凝胶电泳技术分离了临床健康和乳房炎奶牛的乳腺组织膜蛋白,经考马斯亮蓝染色后PDQuest 7.4软件匹配、检测凝胶中差异表达的蛋白点,对12个差异蛋白点采用高效液相色谱串联离子阱质谱分析,SEQUEST软件搜索NCBInr数据库。半定量RT-PCR分析差异表达蛋白的mRNA水平。【结果】12个差异蛋白点鉴定为11种蛋白质,其中9个蛋白点在临床型乳房炎奶牛乳腺组织膜蛋白中表达量上调而3个蛋白点表达量下调,主要涉及细胞膜骨架系统、信号转导、物质结合和传递等生物学功能。半定量RT-...

【目的】研究乳房炎奶牛单剂量乳房灌注1%恩诺沙星(50ml/头)后乳中药物浓度的变化规律。【方法】采用HPLC法测定乳中恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星的浓度,用统计矩原理处理药物浓度—时间数据。【结果】在给药区恩诺沙星和代谢产物环丙沙星均于给药后2h左右乳中浓度达到最高值,分别为(13.16±3.10)μg·ml-1和(2.79±0.94)μg·ml-1,然后逐渐下降;12h后检测不到恩诺沙星,24h已检测不到环丙沙星。对于非给药区,恩诺沙星给药后1h左右乳中浓度达到最高值(0.19±0.02)μg·ml-1,然后逐渐下降;6h后检测不到恩诺沙星,而代谢产物环丙沙星于给药后4h乳药浓度可达最高峰...

【目的】对甲酚纳米乳消毒剂进行质量评价和消毒功效研究。【方法】分别利用肉眼观察和离心法检测甲酚纳米乳消毒剂的外观性状和物理稳定性，染色法和稀释法鉴别其结构类型，透射电镜观察其微观形态，激光粒度分析仪测定其粒径大小，加速试验考察其稳定性，最后通过载体定量杀菌试验和物体表面现场消毒试验研究甲酚纳米乳消毒剂的消毒功效。【结果】甲酚纳米乳消毒剂外观澄明、均一，离心不分层，为水包油型纳米乳，乳滴呈规则的球形，平均粒径为（３４．８９±３．５６）ｎｍ，粒径呈正态分布；在３７℃贮存９０ｄ，主药甲酚的平均含量下降了９．６２％，稳定性良好。体积分数０．５％和１．０％的甲酚纳米乳消毒剂分别作用３和１ｍｉｎ以上时，对．．．

从培养基、细胞接种浓度、冻存液三方面对奶牛乳腺上皮细胞体外培养条件进行了优化。采用台盼兰染色计数方法绘制细胞生长曲线,评定细胞体外生长增殖。结果表明,使用DMEM/F12培养基细胞生长状况最好,DMEM培养的细胞较DMEM/F12生长缓慢,F12其次,RPMI1640培养细胞生长最慢;以1×104的接种浓度于24孔板,细胞生长状态最好,细胞的生长周期经历了潜伏期、对数生长期、稳定期、衰亡期4个生长阶段,生长曲线符合"S"型生长规律;采用胎牛血清(90%FBS+10%DMSO)和培养基(70%培养基+20%FBS+10%DMSO)两种冻存液冻存奶牛乳腺上皮细胞,细胞复苏培养后,胎牛血清冻存的细胞...