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[期刊] 渔业科学进展
[作者]
何玉英 李少飞 王清印 李健
采用ＲＡＣＥ技术克隆获得中国明对虾（ＦＥｎｎＥＲｏｐＥｎＡＥｕｓ ＣｈｉｎＥｎｓｉｓ）谷氨酸脱氢酶ＧＤｈ基因（ＦＣ ＧＤｈ）。ＦＣ ＧＤｈ基因全长１７７９ ｂｐ，包括１个１６５９ ｂｐ的开放阅读框（ｏＲＦ），编码５５２个氨基酸，预测分子量大小为６１．３ ｋ ＤＡ，理论等电点为６．５４。同源性分析显示，ＦＣ ＧＤｈ氨基酸序列与其他动物高度保守，其中，与凡纳滨对虾最为相似，高达９８％，其次为中华绒螯蟹，为８９％。系统进化树分析显示，ＦＣ ＧＤｈ氨基酸序列与凡纳滨对虾ＧＤｈ聚为一支，之后依次为：中华绒螯蟹、黑腹果蝇、埃及按蚊。组织表达分析发现，ＦＣ ＧＤｈ基因在肌肉、鳃、肝胰腺、胃、肠、淋巴和血淋巴．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
周发林 陈劲松 黄建华 杨其彬 邱丽华 马振华 江世贵
采用ｃＤＮＡ末端快速扩增技术（ｒＡｐｉＤ ＡｍｐｌｉｆｉｃＡｔｉｏＮ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅＮＤｓ，ｒＡｃｅ）获得了斑节对虾（ｐｅＮＡｅｕｓ ｍｏＮｏＤｏＮ）谷氨酸脱氢酶基因（ｐｍＧＤＨ）的ｃＤＮＡ序列。该序列全长２３８６ ｂｐ，开放阅读框（ｏｒｆ）为１６７７ ｂｐ，３＇非编码区（ｕｔｒ）为６８８ ｂｐ，包括含有２７个碱基的ｐｏｌｙ（Ａ）尾，５＇非编码区（ｕｔｒ）为２１ ｂｐ。ｏｒｆ可编码５５８个氨基酸，预测分子量为６１．８３７ ｋ Ｄ，理论等电点为６．５７。序列含有ｅｌｆＶ ＤｅＨｙＤｒｏＧ Ｎ与ＮＡＤ ｂｉＮＤ １ Ｇｌｕ ＤＨ两个保守结构域，３７个磷酸化位点，３个糖基化位点。通过同源性、相似．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
姚万龙 何玉英 刘萍 李健 王清印
为初步研究中国明对虾MKK4的生物学功能,采用RACE技术克隆获得中国明对虾MKK4基因全长c DNA序列,并对该序列进行分析。结果显示,中国明对虾MKK4基因全长为2 064 bp,开放阅读框长1 221 bp,5'非编码区长214 bp,3'非翻译区长629 bp。将该基因命名为Fc MKK4。推测该基因编码406个氨基酸,预测分子量为45.94 ku,理论等电点为8.50。同源性和系统进化分析发现Fc MKK4与肩突硬蜱和印度跳蚁的同源性分别为80%和78%,与其他节肢动物MKK4聚为一支。荧光定量RT-PCR结果表明,Fc MKK4基因在肌肉中的相对表达量最高,其次为肝胰腺。氨氮胁迫后...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
姚万龙 何玉英 刘萍 李健 王清印
采用ＲＡＣＥ技术克隆获得中国明对虾（ＦＥｎｎＥＲｏｐＥｎＡＥｕｓ ＣｈｉｎＥｎｓｉｓ）丝裂原活化蛋白激酶激酶３（ＭＫＫ３）基因全长Ｃ ＤｎＡ序列，并对该序列进行分析。结果表明，该基因全长为１４３４ ｂｐ，开放阅读框长１０１１ ｂｐ，５′非编码区长３３ ｂｐ，３′非编码区长３９０ ｂｐ，将该基因命名为ＦＣ ＭＫＫ３。推测该基因编码３３６个氨基酸，分子量为３７．８９ Ｋ Ｄ，理论等电点为６．０８。同源性和系统进化分析表明，ＦＣ ＭＫＫ３基因与丽蝇蛹集金小蜂（ｎＡｓｏｎｉＡ ｖｉｔＲｉｐＥｎｎｉｓ）和地中海实蝇（ＣＥＲＡｔｉｔｉｓ ＣＡｐｉｔＡｔＡ）的相似性分别为６９％和６８％，与其他节肢动物ＭＫＫ．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李少飞 何玉英 李吉涛 李健 刘萍 葛倩倩
利用RACE技术克隆获得中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)天门冬氨酸转氨酶GOT基因(Fc GOT)。Fc GOT基因c DNA全长为1 910 bp,其中,开放阅读框1 284 bp,编码427个氨基酸。同源性分析表明,中国明对虾天门冬氨酸转氨酶GOT氨基酸序列与其他节肢动物高度保守,与克氏原螯虾(Procambarus clarkii)和桔粉蚧壳虫(Planococcus citri)的同源性分别为78%和73%。系统进化分析表明,Fc GOT基因氨基酸序列与克氏原螯虾GOT聚为一支。组织表达分析发现Fc GOT基因在肝胰腺、鳃、血细胞、肌肉、心脏、淋巴中均有表...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张积森 郭春芳 王冰梅 张木清 陈由强 陈如凯
【目的】筛选并克隆与水分胁迫相关的基因,通过对目的基因的表达分析进一步解析植物的抗旱机制,为甘蔗抗逆育种提供候选基因和理论依据。【方法】应用消减文库技术结合cDNA芯片技术筛选水分胁迫诱导的基因的EST序列,根据筛选到感兴趣的上调表达基因的EST序列,用RACE技术获得SSADH的全长cDNA序列,并通过实时荧光RT-PCR技术对该基因的表达特征进行分析。【结果】通过消减文库技术结合cDNA芯片技术筛选的EST中含有4个推测为基因SSADH的EST,其在水分胁迫处理的斑茅中均明显上调表达。通过RACE扩增获得甘蔗SSADH全长cDNA序列为1914bp,其中5′端非编码区25bp,开放阅读框为...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王芸 李健 张喆 何玉英 常志强 陈萍 李吉涛 刘德月
研究了pH、氨氮胁迫对中国对虾Fenneropenaeus chinensis血细胞、肝胰腺、鳃和肌肉组织HSP90基因时空表达的影响。分别将中国对虾暴露于pH 7.0、9.0的水体中148h和不同氨氮浓度的水体中96h,结果表明,pH(7.0,9.0)胁迫条件下中国对虾鳃、肌肉和血细胞HSP90基因表达均上调,肝胰腺HSP90基因表达对两种pH胁迫差异明显:pH 7.0胁迫条件下,HSP90基因表达3h达峰值后明显降低;pH 9.0胁迫时,HSP90基因表达水平逐渐升高,整个胁迫过程中均显著高于对照组(P
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
陈劲松 周发林 江世贵 杨其彬 马振华 邱丽华 傅明骏 李运东 黄建华
根据本实验室构建的斑节对虾（Ｐｅｎａｅｕｓ ｍｏｎｏｄｏｎ）ｃ ｄｎａ文库得到的ｅｓＴ序列，利用Ｒａｃｅ技术获得了斑节对虾谷氨酰胺合成酶基因（Ｐｍ Ｇｓ）的ｃ ｄｎａ全长序列，进行了相关生物信息学分析，在此基础上采用荧光定量的方法研究了Ｐｍ Ｇｓ基因在斑节对虾不同组织、氨氮胁迫过程中差异表达情况。该序列全长１ ４２０ｂＰ，开放阅读框（ｏＲＦ）为１ ０８６ ｂＰ，３＇非编码区（ｕＴＲ）为２９４ ｂＰ，包括含有２７个碱基的Ｐｏｌｙ（ａ）尾，５＇非编码区（ｕＴＲ）为４０ ｂＰ。ｏＲＦ可编码３６１个氨基酸，预测分子量为４０．４２３ ｋｕ，理论等电点为６．１９。序列含有一个谷氨酰胺结合结构域（Ｇｌｎ－ｓ．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李政道 李健 葛倩倩 王佳佳 何玉英 王培春
为研究钠/氢交换体(Na+/H+-exchanger,NHE)在中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)响应pH胁迫过程中发挥的作用,首先采用静水毒性实验方法确定了中国明对虾酸碱半致死pH,然后利用RACE技术克隆了中国明对虾Na+/H+-exchanger isoform 3(命名为FcNHE3)基因,并通过荧光定量PCR及RNA干扰技术分析了其在pH胁迫下的表达特征及功能。结果显示,72 h酸性半致死pH和碱性半致死pH分别为5.2和9.1。克隆获得FcNHE3基因(Gen Bank:MF373587)cDNA序列全长3508 bp,开放阅读框2805 bp,编码934个氨基酸,具有信号肽和12个跨膜结构域;蛋白同源分析发现,FcNHE3与青蟹(Carcinus maenas)同源性最高,达到74%;系统进化分析显示,FcNHE3与三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)和青蟹亲缘关系最近。荧光定量PCR分析表明,FcNHE3基因在鳃组织中表达量显著高于其他组织(P
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
姚万龙 何玉英 刘萍 李健 王清印
应用ＲＡＣＥ克隆技术获得中国对虾（ＦＥｎｎＥＲｏｐＥｎＡＥｕｓ ＣｈｉｎＥｎｓｉｓ）ｐ３８ ＭＡｐＫ基因全长Ｃ ＤｎＡ序列，并对该序列进行分析。结果显示，中国对虾ｐ３８ ＭＡｐＫ基因全长为１５６３ ｂｐ，开放阅读框长１０９８ ｂｐ，５＇非编码区长１２２ ｂｐ，３＇非编码区长３４３ ｂｐ，将该基因命名为ＦＣｐ３８。氨基酸序列分析推测，该基因编码３６５个氨基酸，分子量为４１．７７ Ｋ ＤＡ，理论等电点为５．６８。同源性分析表明，ＦＣｐ３８基因与凡纳滨对虾和日本囊对虾的ｐ３８相似性最高，为９８％。通过比对发现，该基因除含ｐ３８家族特有的标志性ＴｈＲ－Ｇｌｙ－ＴｙＲ双磷酸化位点和底物结合位点ＡｌＡ－Ｔ．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王芸 李健 李吉涛 何玉英 常志强 刘德月
研究了pH胁迫对中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)抗氧化系统的影响,将中国明对虾暴露于pH7.0、9.0的水体中148 h,于胁迫后0、3、12、24、48、72、96、120、148 h测定鳃、肝胰腺、肌肉和血淋巴总抗氧化活力(T-AOC)、抗超氧阴离子活力、过氧化氢酶(CAT)活力和CAT、过氧化物还原酶(Prx)基因表达的影响,以pH8.2作为对照。结果显示,pH胁迫12~24 h,对虾各组织T-AOC、抗超氧阴离子、CAT酶活力及CAT基因表达均增加,pH胁迫120~148 h上述指标受到抑制。对虾肝胰腺和肌肉Prx基因表达随胁迫时间增加逐渐升高,鳃和血淋巴...
[期刊] 华北农学报
[作者]
张艳敏 丁占生 温之雨 蒋春志 李辉 霍云谦 朱至清 陈受宜 郭北海
对盐、旱逆境下转BADH基因小麦品系99T6的生长发育、甜菜碱醛脱氢酶活性及甜菜碱积累等进行了研究分析,结果表明,转BADH基因株系在盐逆境下具有明显的生长优势,耐盐能力达到100mmol/L;电导率和质膜相对透性表明转基因株系抗膜损伤能力增强;甜菜碱醛脱氢酶活性的增强和甜菜碱积累的增加,说明转基因株系的盐旱逆境抗性是通过甜菜碱积累这一长期、持久的方式解除渗透胁迫,而不是通过脯氨酸积累这种临时的应急反应;以甜菜碱作为靶标性状采用基因工程方法提高植物盐旱耐性是可行的。
关键词：
小麦 转基因 甜菜碱醛脱氢酶活性 耐盐性
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李亚伦 何玉英 王琼 管晨惠 周玉洁 李朝霞
为探究急性盐碱胁迫下中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis) ABC转运蛋白(ATP-binding cassette transporter) G5基因的表达特征，本研究应用RACE克隆技术获得中国明对虾ABCG5基因，并将其命名为FcABCG5。该基因cDNA全长为2 718 bp，开放阅读框1 923 bp，共编码640个氨基酸，预测的蛋白分子量为71.39 kDa，理论等电点为9.12，预测基因位于内质网上，为疏水性蛋白，包含一个NBD和一个TMD结构域，不包含信号肽。同源性与系统进化分析结果显示，FcABCG5转运蛋白保守性强，与斑节对虾(Penaeus monodon) ABCG5蛋白同源性最高，达到98.91%。组织特异性分析结果显示，FcABCG5在各组织中均有表达，鳃中表达水平最高(P<0.05)，眼柄中最低(P<0.05)。盐碱胁迫下，FcABCG5在鳃组织中的表达量呈先升高后下降的趋势，胁迫6 h时达最高值(P<0.05)，比对照组高2.12倍，利用dsRNA干扰实验对该基因进行敲降，盐碱胁迫下，沉默FcABCG5基因会使对虾的死亡率高达60%，显著高于对照组40% (P<0.05)，说明该基因的表达量越高，对中国明对虾的存活越有利。本研究中受胁迫的中国明对虾FcABCG5表达量高，可能是由于鳃在直接接触盐碱水环境后，通过FcABCG5介导的物质转运启动渗透压调节，应对渗透压失衡。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
梁忠秀 李健 任海 葛倩倩 葛红星 李吉涛
选择在中国分离得到的一株能产生麻痹性贝毒(Paralytic Shellfish Poison,PSP)的赤潮甲藻塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense)ATHK株,研究其对中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)鳃组织氧化胁迫和Caspase基因(FcCasp)表达的影响。将中国明对虾分别暴露于200 cells/mL和1 000 cells/mL塔玛亚历山大藻中,于胁迫后3、6、12、24、48、72和96 h测定鳃的超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性、丙二醛(MDA)含量和FcCasp基因相对表达量,以不加藻的过滤海水作...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
魏威 何玉英 李朝霞 周雨欣 李健 谢拥军
采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得中国对虾(Fenneropenaeus chinensis) ATG5基因cDNA全长，命名为FcATG5。利用实时荧光定量技术分析了FcATG5的组织表达及其在pH和碳酸盐碱度胁迫下的表达特征，并利用RNAi技术验证其功能。基因分析显示，FcATG5 cDNA全长为2225 bp，开放阅读框为810 bp，编码269个氨基酸，预测其编码的蛋白质分子量为31.10kDa，理论等电点为5.59，为疏水性蛋白，包含一个APG5自噬相关蛋白结构域，无跨膜结构，不包含信号肽。同源性和系统进化分析显示，FcATG5具有高度保守性，与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)同源性最高，达98.14%。组织表达分析显示，FcATG5在中国对虾各组织中均有表达，其中，肌肉中表达量最高(P<0.05)，血淋巴细胞中最低(P<0.05)，表明该基因的表达量越高，越有利于中国对虾存活。结果表明，FcATG5在pH、碳酸盐胁迫下的表达量均显著升高(P<0.05)，推测自噬可能参与中国对虾应对非生物胁迫的调控。本研究结果对水生动物特别是甲壳动物中细胞自噬研究具有重要的借鉴意义，有助于推进中国对虾盐碱水养殖的研究进程。
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