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[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 刘红林  孟繁星  
氧化应激被认为是影响动物繁殖性能和造成人类不孕不育的重要因素,氧化应激诱导卵泡颗粒细胞凋亡,进而诱发卵泡闭锁是其影响动物繁殖性能的重要途径。近年来,针对氧化应激对有腔卵泡闭锁的影响研究取得了系列进展,主要包括:氧化应激对卵泡闭锁具有重要调控作用;叉头盒转录因子O1(FoxO1)是氧化应激诱发卵泡闭锁的关键性调控因子;卵泡液因子能够调控卵泡颗粒细胞氧化损伤的发生与程度。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 林鹏飞  剧世强  罗碧平  郝元斌  王利勤  芮荣  靳亚平  
【目的】研究猪有腔卵泡发育和闭锁中颗粒细胞凋亡与卵泡液类固醇激素的变化,为了解猪有腔卵泡发育与闭锁的调控机理提供参考。【方法】从猪卵巢分离完整有腔卵泡,按质量分为健康卵泡、早期闭锁卵泡和晚期闭锁卵泡3类;再按卵泡直径大小分为大卵泡组(>5 mm)、中卵泡组(3~5 mm)和小卵泡组(
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 程颖  魏全伟  王喆  雷坤  吴昊泽  夏雨婷  茆达干  石放雄  
[目的]本文旨在通过对猪卵泡颗粒细胞进行转录组测序了解卵泡闭锁相关基因的表达谱并确定闭锁卵泡的潜在分子标记物。[方法]通过HE染色对卵泡及颗粒细胞进行形态学观察;抽取健康卵泡和晚期闭锁卵泡的颗粒细胞,进行转录组测序分析,最后采用实时荧光定量PCR检测差异表达基因的相对表达水平。[结果]转录组数据表明,与闭锁卵泡颗粒细胞相比,健康卵泡颗粒细胞中有771个差异基因,其中204个为上调基因,567个为下调基因;GO功能富集分析显示,差异基因显著富集到320个生物进程中,主要与细胞增殖和血管生成有关;KEGG通路分析表明,差异基因富集到48条信号通路中,主要参与氧化应激、激素合成和能量代谢等方面的信号通路;实时荧光定量PCR结果表明,CYP1B1、PDE10A、NUPR1、NOX4、LDLR、LHCGR和CYP19A1表达趋势与测序结果一致。[结论]氧化应激、血管生成、能量代谢以及激素合成等多方面因素综合调控猪卵巢中颗粒细胞的凋亡,继而影响卵泡闭锁现象的产生。
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 刘楠乔  蔡亚非  许家玉  周军智  杨帆  范睿  
为了揭示caspase-3等细胞凋亡相关基因及DNA甲基化水平在小鼠卵泡闭锁中的作用,小鼠经注射10 IU hCG后,在0、12、24、48、72和96 h解剖取出卵巢,用HE染色、DNA电泳、免疫组化、RT-PCR技术、甲基化酶切等试验方法,研究在卵泡发育及闭锁过程中caspase-3等凋亡相关基因的表达及DNA甲基化水平的变化。结果表明:bax、caspase-3的表达量在48 h以前持续减少,在48 h达到最低值,在72 h显著增多(P
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 张金璧  林飞  潘增祥  马雪山  李齐发  刘红林  
以猪卵泡为试验材料,在总结各种分类方法的同时,通过具体的试验分析了几种可持续跟踪研究的分类方法(外观形态、颗粒细胞密度、孕酮(P4)和雌二醇(E2)的比值)间的关系。经过对239个卵泡的分离和检测,以及对在不同闭锁阶段各20个共60个在各个判定指标上都达到一致的卵泡进行分析和比较,检验各判定指标与猪卵泡闭锁的关系,形成了合理的综合判定标准:在外观判定基础上将颗粒细胞数小于2 500μL-1、2 500~10 000μL-1、大于10 000μL-1分别定义为健康、早期闭锁及晚期闭锁卵泡,而相应的P4/E2值分别为小于5、5~20及大于20。
[期刊] 中国农业科学  [作者] 杨昌沛  王乃秀  汪锴  黄子晴  林海烂  张莉  张晨  冯露秋  甘玲  
【目的】研究外源性γ-氨基丁酸(GABA)抵抗仔猪氧化应激的作用效果,及海马神经元 GABA 受体调节凋亡信号通路在其中可能的介导作用,为 GABA 作为动物应激调节剂的应用提供科学依据。【方法】基于成功构建的仔猪活体和大鼠海马神经元氧化应激模型,考察外源性 GABA 对仔猪血清及海马组织中氧化/抗氧化相关指标、仔猪日增重、脑海马 GABA 受体以及大鼠海马神经元中 GABA 受体及凋亡信号通路相关基因表达水平的影响。【结果】低、中、高浓度的 GABA 灌喂组(LD+OS;MD+OS;HD+OS)仔猪血清的 MDA 含量均极显著低于氧化应激(OS)组(P0.05)。氧化应激组海马组织的 MDA含量极显著高于对照组和 HD+OS 组 (P
[期刊] 水产学报  [作者] 刘旭佳  黄国强  彭银辉  
为研究不同溶氧变动模式对鲻生长、能量代谢和氧化应激的影响,实验设计5种溶氧变动模式,分别为一直维持正常溶氧N处理(7.0 mg/L)、正常溶氧-低氧变动N-L处理(7.0→1.5 mg/L)、超饱和溶氧-正常溶氧变动S-N处理(14.0→1.5 mg/L)、超饱和溶氧-正常溶氧-低氧变动S-N-L处理(14.0→7.0→1.5 mg/L)和一直维持超饱和溶氧S处理(14.0 mg/L)。实验选择初始体质量为(16.07±0.11)g的鲻,在循环水装置中养殖56 d,然后测定其特定生长率、鲻血浆、肌肉、肝脏和鳃组织的乳酸(LD)含量、过氧化物歧化酶(SOD)活力、总抗氧化能力(T-AOC)、抗超...
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 李根瑞  任利华  孙国华  杨建敏  韦秀梅  刘兆存  李尚俊  姜汉  
为探明低氧胁迫对刺参(Apostichopus jAponicus)抗氧化能力的影响以及刺参的低氧逆境响应机制,给低氧环境条件下的刺参养殖提供指导,本研究通过设置低氧胁迫实验,将刺参在水体低氧[(2.0±0.2)mg/L]8 h处理后恢复常氧[(7.0±0.2)mg/L]2.5 h,取低氧和常氧不同时间段的刺参肌肉、呼吸树和消化道组织,对各组织的乳酸(LD)、丙二醛(mDA)和抗氧化酶系等应激参数进行测定和变化趋势分析。结果显示,与对照组相比,在低氧胁迫8 h内,随着低氧暴露时间的延长,刺参肌肉、呼吸树和消化道等组织中的LD含量、抗氧化能力(t-Aoc)、过氧化氢酶(cAt)、谷胱甘肽-s-转...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 权青  陶勇  章孝荣  姚桂东  汪金菊  
研究在培养液中添加不同浓度(0.000、0.001、0.010、0.100、1.000 mmol/L)一氧化氮供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对猪腔前卵泡体外培养的影响。结果表明,SNP对猪腔前卵泡存活、发育和腔的形成、卵母细胞正常发育有一定促进作用,但高浓度会产生抑制作用。体外培养后,各处理组卵泡直径差异不显著(P>0.05);处理第4天,0.001 mmol/L SNP处理组卵泡存活率(85.28%)显著高于1.000 mmol/L SNP处理组(70.60%,P
[期刊] 中国农业科学  [作者] 陈慧芳  黄绮亮  胡智超  潘晓婷  吴志胜  白银山  
【目的】通过分析成熟卵泡液外泌体(mature follicular fiuid Exosomes, mffEXs)和闭锁卵泡液外泌体(atretic follicular fiuid Exosomes, affEXs)miRNA的表达差异,探索卵泡液外泌体(EXs)miRNA在卵泡发育和闭锁过程中的调控作用。【方法】本研究通过抽提4—6 mm猪成熟发育和闭锁卵泡的卵泡液分离外泌体,进行粒径分析及Western Blot检测对EXs进行鉴定,接下来对特征性EXs携带的miRNA测序和功能富集分析,筛选关键信号通路和差异基因。最后,将mffEXs和affEXs作为添加剂进行颗粒细胞培养,利用Q-PCR检测技术分析关键基因的表达,验证两类卵泡液内EXs miRNA在卵泡发育中的调控功能。【结果】成功分离了mffEXs和affEXs,对比mffEXs测序结果,affEXs中有90个miRNA上调表达,220个miRNA下调表达,表明了卵泡液中的miRNA表达水平与调控卵泡发育有关;KEGG富集分析结果显示两类卵泡的差异信号通路主要集中在Ras、cAMP、P53和MAPK等信号通路,涉及调控卵母细胞发育、减数分裂以及颗粒细胞细胞周期等生物学功能。在闭锁卵泡中,上调表达的ssc-let-7a和ssc-miR-133a-3p分别潜在靶向调控细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK1)和胰岛素生长因子(IGF1),抑制了G1和G2/M期的运转和类固醇激素代谢,促使颗粒细胞周期运转受阻和颗粒细胞凋亡,引起卵泡闭锁的发生;下调的ssc-miR-21-5p潜在靶向肿瘤抑癌基因(P53),抑制细胞周期运转,促使颗粒细胞凋亡。在体外培养的颗粒细胞中分别添加mffEXs和affEXs,Q-PCR结果显示CDK1在mffEXs中显著上调表达,而P53显著下调表达,表明了测序分析结果的可靠性。这些结果均显示了affEXs中miRNA表达水平的变化促使颗粒细胞凋亡和细胞周期阻滞,引起卵泡闭锁。【结论】猪affEXs携带miRNA增加了对CDK1、IGF1和P53的表达调控,抑制颗粒细胞细胞周期运转和类固醇激素代谢等信号通路,引起颗粒细胞凋亡,导致卵泡闭锁。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 张佳鑫  陈继发  
选取80只3月龄康乐黄鸡,随机均分为4组,每组5个重复,每个重复4只。对照组(CON组)和应激组(STR组)饲喂基础饲粮,酵母硒组(SY组)和酵母硒+应激组(SY_STR组)饲喂在基础饲粮中添加0.5 mg/kg酵母硒的试验饲粮。预试期7 d,正试期21 d。试验第21天时,给STR组和SY_STR组肉鸡腹腔注射15 mg/kg敌草快,CON组和SY组注射等量生理盐水,24 h后,每个重复选取1只鸡,采集盲肠内容物样品,用于肠道菌群分析,研究酵母硒对氧化应激肉鸡盲肠微生物多样性、菌群结构及物种丰度的影响。结果表明:盲肠菌群α多样性指数在各组间的差异均无统计学意义(P>0.05);β多样性分析显示,与CON组和SY_STR组相比,STR组盲肠菌群结构分布相对零散,物种相似度较低;与CON组相比,STR组厚壁菌门与拟杆菌门相对丰度之比(F/B)、肠球菌属和埃希氏菌属–志贺氏菌属相对丰度显著(P<0.05)升高,毛螺旋菌属和嗜胆菌属相对丰度显著(P<0.05)降低;与STR组相比,SY_STR组和SY组拟杆菌门相对丰度显著(P<0.05)降低;与STR组相比,SY_STR组Muribaculaceae未明确属相对丰度显著(P<0.05)升高,肠球菌属相对丰度显著(P<0.05)降低;LEfSe分析显示,与CON组相比,STR组梭菌目vadinBB60群、Monoglobus、丹毒丝菌科显著富集,与STR组相比,SY_STR组拟杆菌门、普雷沃氏菌科_UCG–001、拟普雷沃氏菌属、帕拉普氏菌属显著富集。可见,氧化应激能引起肉鸡盲肠微生物多样性和菌群结构的改变,添加酵母硒能够缓解氧化应激对肉鸡肠道菌群结构造成的负面影响。
[期刊] 农业现代化研究  [作者] 高运苓  吴信  周锡红  李铁军  耿梅梅  黄瑞林  印遇龙  
本文比较研究了日粮中添加精氨酸(L-Arginine,Arg)和精氨酸生素(Arginine activator additive,AAA)对早期断奶仔猪氧化应激的影响。试验选用84头21日龄断奶的长×大仔猪(5.56±0.07kg),共12栏,分为3个处理组(4栏/处理,7头/栏)。分别饲喂基础日粮(SD)、SD+AAA(0.08%)或SD+Arg(0.6%),试验期为7d。结果表明:与对照组相比,Arg和AAA添加组中血清Arg浓度、平均日增重(ADG)及肠道重均显著增加(P<0.05),血清皮质醇(COR)、丙二醛(MDA)及尿素氮(BUN)浓度显著降低(P<0.05);与对照相比,AA...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 张佳鑫  陈继发  
选取80只3月龄康乐黄鸡,随机均分为4组,每组5个重复,每个重复4只。对照组(CON组)和应激组(STR组)饲喂基础饲粮,酵母硒组(SY组)和酵母硒+应激组(SY_STR组)饲喂在基础饲粮中添加0.5 mg/kg酵母硒的试验饲粮。预试期7 d,正试期21 d。试验第21天时,给STR组和SY_STR组肉鸡腹腔注射15 mg/kg敌草快,CON组和SY组注射等量生理盐水,24 h后,每个重复选取1只鸡,采集盲肠内容物样品,用于肠道菌群分析,研究酵母硒对氧化应激肉鸡盲肠微生物多样性、菌群结构及物种丰度的影响。结果表明:盲肠菌群α多样性指数在各组间的差异均无统计学意义(P>0.05);β多样性分析显示,与CON组和SY_STR组相比,STR组盲肠菌群结构分布相对零散,物种相似度较低;与CON组相比,STR组厚壁菌门与拟杆菌门相对丰度之比(F/B)、肠球菌属和埃希氏菌属–志贺氏菌属相对丰度显著(P<0.05)升高,毛螺旋菌属和嗜胆菌属相对丰度显著(P<0.05)降低;与STR组相比,SY_STR组和SY组拟杆菌门相对丰度显著(P<0.05)降低;与STR组相比,SY_STR组Muribaculaceae未明确属相对丰度显著(P<0.05)升高,肠球菌属相对丰度显著(P<0.05)降低;LEfSe分析显示,与CON组相比,STR组梭菌目vadinBB60群、Monoglobus、丹毒丝菌科显著富集,与STR组相比,SY_STR组拟杆菌门、普雷沃氏菌科_UCG–001、拟普雷沃氏菌属、帕拉普氏菌属显著富集。可见,氧化应激能引起肉鸡盲肠微生物多样性和菌群结构的改变,添加酵母硒能够缓解氧化应激对肉鸡肠道菌群结构造成的负面影响。
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 周艺琳  王正磊  许媛媛  韩先干  PHOUTHAPANE Vanhnaseng  苗晋锋  
[目的]本试验旨在探讨白藜芦醇对乳房链球菌感染引起乳腺细胞氧化应激的影响及机制。[方法]先用15 μmol·L~(-1)白藜芦醇(resveratrol)处理小鼠乳腺上皮细胞(EpH_(4)-Ev)4 h,再加入乳房链球菌(MOI = 10)共孵育3 h,收集样品;通过生化试剂盒(硝酸还原酶法、比色法、微量法等)、流式细胞术、显微镜观察、Western blot、RT-qPCR等方法检测相关指标的变化。[结果] S.uberis感染可显著提高EpH_(4)-Ev细胞活性氧(ROS)水平和一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、乳酸脱氢酶(LDH)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低总抗氧化能力(T-AOC)水平。白藜芦醇预处理后可显著降低ROS水平、NO含量、iNOS、LDH、NAGase活性,显著提高T-AOC水平,进一步提升SOD活性。在分子水平上,S.uberis感染显著提高EpH_(4)-Ev细胞血红素加氧酶1(HO-1)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)mRNA与核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白的表达水平,而白藜芦醇预处理对其有进一步提升作用。显微镜观察发现白藜芦醇预处理可以明显改善由S.uberis感染引起的小鼠乳腺上皮细胞发生皱缩。[结论]白藜芦醇可以有效缓解乳房链球菌感染引起乳腺细胞的氧化应激,这可能与白藜芦醇激活Nrf2蛋白并促进其下游抗氧化基因表达相关。
[期刊] 中国农业科学  [作者] 杨晓岚  张敏红  冯京海  翟利利  姜礼文  
【目的】研究高温诱导蛋鸡氧化损伤及对卵泡发育的影响,探讨环境高温抑制蛋鸡卵泡发育、降低产蛋量的机制。【方法】试验分两部分进行:试验一,将180只27周龄的海兰褐蛋鸡随机分为3个处理组,分别饲养于人工环境控制舱内,3个处理组分别为常温组(23℃,饲喂基础日粮)、日循环高温组(28—35—28℃,饲喂基础日粮)和高温补充VE组(28—35—28℃,饲喂基础日粮+250 IU·kg-1 VE),试验期14 d;试验二,分离蛋鸡F1和F2卵泡颗粒层并制备颗粒细胞悬浮液,将颗粒细胞分别在39或44℃下培养。【结果】试验一结果显示,日循环高温显著抑制蛋鸡卵泡发育,表现为产蛋数量下降(P<0.05)、卵巢重...
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