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[期刊] 华中农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张新灿 李小定
以20～35 g克氏原螯虾为研究对象，随机分为4组，每组60尾，在基础饲料中分别掺拌0(C0组)、10(C10组)、20(C20组)、30 mg/kg(C30组)氟苯尼考喂养20 d，再改用基础饲料喂养15 d进行消除试验，测定肝胰腺Ⅰ相药物代谢酶7-乙氧基香豆素-O-脱乙基酶（ECOD）、7-乙氧基异吩恶唑酮-O-脱乙基酶（EROD）、苯胺-4-羟化酶（AH）、红霉素-N-脱甲基酶（ERND）、氨基比林-N-去甲基化酶（AND）和Ⅱ相药物代谢酶谷胱甘肽S-转移酶（GST）、磺基转移酶（SULT）、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGT）活力变化，以及细胞色素P450(CYP450)、GST、热休克蛋白HSP70和金属硫蛋白（MT）mRNA表达水平的变化。结果显示，氟苯尼考显著抑制Ⅰ相药物代谢酶活力，但能诱导Ⅱ相药物代谢酶活力升高（P
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
宋昕昊 杨丹 季春雷 王佩蓉 张静静 彭麟 高修歌 季辉 江善祥
[目的]旨在探究马度米星铵对克氏原鳌虾肝胰腺药物代谢酶的影响。[方法]将192尾成年雄性克氏原鳌虾（体质量21 g左右）随机分为四组（每组48尾）。除对照组外，各处理组的克氏原螯虾分别采用低剂量（0.7 mg·L~(-1)）、中剂量（3.5 mg·L~(-1)）和高剂量（7 mg·L~(-1)）的马度米星铵连续药浴给药28 d。分别在给药后7、14、21和28 d各处死12尾克氏原鳌虾，取其肝胰腺，制备微粒体后，测定细胞色素P450（CYP_(450)）、细胞色素b5（CYP b5）含量，I相药物代谢酶红霉素-N-脱甲基酶（ERND）活性、氨基比林-N-脱甲基酶（APND）活性和苯胺-4-羟化酶（AH）活性以及II相药物代谢酶谷胱甘肽S-转移酶（GSTs）、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGTs）、N-乙酰基转移酶（NATs）的活性，并采用实时荧光定量PCR方法测定了CYP_(450)、gst、CYP b5基因的mRNA的表达水平。[结果]在28 d内，7 mg·L~(-1)处理组各时间段CYP_(450)含量与对照组相比显著增高（P < 0.05），CYP b5无显著变化（P > 0.05）；与对照组相比，7 mg·L~(-1)处理组的I相药物代谢酶ERND、APND、AH活性和II相药物代谢酶GSTs、UGTs和NATs活性均显著升高（P < 0.05），3.5 mg·L~(-1)处理组的ERND、UGTs和NATs活性显著升高（P < 0.05），0.7 mg·L~(-1)处理组ERND活性显著升高（P < 0.05）；马度米星铵对肝药酶相关的gst、CYP_(450)基因表达均显著上调（P < 0.05），CYP b5基因除第7 天显著上调（P < 0.05），其余时间无显著变化（P > 0.05）。[结论]马度米星铵可以诱导克氏原鳌虾肝胰腺药物代谢酶，其中ERND和GSTs对马度米星铵较敏感，可以作为早期马度米星铵污染水体的生物标记物。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
岳刚毅 吴志新 于艳梅 杨倩 曲艺 谢玲玲 陈孝煊
建立了克氏原螯虾(Procambarus clarkii)血淋巴、肌肉、肝胰脏中氟苯尼考及氟苯尼考胺的高效液相色谱检测方法。采用Agilent Eclipse XDB-C18(250mm×4.6 mmi.d,5μm)反相色谱柱,以A液(乙腈):B液(0.04 mol/L NaH2PO4、0.004 mol/L十二烷基硫酸钠和0.10%三乙胺)(体积比为30∶70)为流动相,225 nm紫外检测波长完成分析。结果显示:本方法在0.025~20 mg/L范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系;组织的加标回收率为78.8%~94.2%,相对标准偏差小于8.16%,氟苯尼考在血淋巴、肌肉、肝胰脏的检出限分...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
石宝通 钱照君 王辉 陆伟 牛东红 李家乐
利用RACE技术获得了UB-E2基因c DNA全长,通过RT-PCR技术研究UB-E2基因在不同组织、发育时期的表达量和17α-羟孕酮激素刺激后UB-E2表达量及性腺发育情况。结果表明:该基因序列全长3 943bp,开放阅读框675 bp,编码224个氨基酸,相对分子量23. 93 ku,等电点8. 61,82～219位氨基酸序列为泛素结合酶家族特有的结构域。氨基酸序列比对发现,克氏原螯虾UB-E2基因与节肢动物UB-E2基因有较高的同源性;系统进化分析表明,UB-E2基因与凡纳滨对虾和斑节对虾聚为一支。荧光定量结果显示,UB-E2基因在克氏原螯虾卵巢组织中的表达量显著高于其他组织(P
关键词：
克氏原螯虾 性腺 UB-E2 表达
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
钱照君 祝天谅 姜虎成 石宝通 李家乐
为了解泛素结合酶Ｅ２ｒ基因在克氏原螯虾性腺发育中的作用，利用ｒＡＣＥ技术得到了Ｃ ＤＮＡ全序列，命名为ＰＣ－ＵＢＥ２ｒ。该基因序列全长为３ ６７１ ＢＰ，包含泛素结合酶的特有结构域，以及半胱氨酸残基活化位点。开放阅读框为７２９ ＢＰ，编码２４２个氨基酸，预测蛋白分子量约为２７．６ ｋＵ。ＢＬＡＳＴ比对发现，克氏原螯虾ＵＢＥ２ｒ基因与节肢动物ＵＢＥ２ｒ基因具有较高的同源性。系统进化分析表明，ＰＣ－ＵＢＥ２ｒ基因与日本囊对虾聚为一枝。ｑｒＴ－ＰＣｒ研究表明，ＰＣ－ＵＢＥ２ｒ基因在性腺中的表达量显著高于其他组织（Ｐ＜０．０５）。在卵巢中，ＰＣＵＢＥ２ｒ基因的表达量在未发育期最低，在卵黄发生前期表达量．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
周一凡 孙存鑫 刘波 周群兰 李正中 徐骁迪 王爱民
为探究饲料中茶树油与虾青素对克氏原螯虾(Procambarusclarkii)生长性能、抗氧化能力及免疫相关基因表达的影响,设计了6组等氮等能饲料,分别为基础饲料组(CT)、50 mg/kg虾青素组(AS50)、50 mg/kg虾青素与50 mg/kg茶树油组(AS50+AST50)、50 mg/kg虾青素与100 mg/kg茶树油组(AS50+AST100)、50 mg/kg虾青素与200 mg/kg茶树油组(AS50+AST200)、50 mg/kg虾青素与400 mg/kg茶树油组(AS50+AST400),进行了8周的养殖实验。添加了虾青素后,AS50组与CT组相比,饵料系数显著降低(P0.05),血淋巴及肠道中总抗氧化能力(T-AOC)显著提高(P<0.05),肠道丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05),Crustin、Astacidin、CuZnSOD以及HSP70基因表达显著升高(P<0.05)。添加了虾青素与茶树油后,AS50+AST100组末均重,增重率,特定生长率,总抗氧化能力(T-AOC)均显著高于AS50和CT组(P<0.05),肠道丙二醛含量显著低于AS50组和CT组(P<0.05)。HSP70表达量随茶树油含量的提高与对照CT组差异显著(P
[期刊] 淡水渔业
[作者]
杨长庚 苏富强 文华 刘伟 魏开金
为探讨饲料中不同蛋白源(菜籽粕、发酵豆粕、鸡肉粉、肉骨粉)替代50%鱼粉对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)生长、消化酶活性及生长轴基因表达的影响。以克氏原螯虾(9.84±0.49)g为研究对象,将其分为5组(对照组、菜籽粕组、发酵豆粕组、鸡肉粉组、肉骨粉组),分别投喂不同蛋白源的实验饲料,养殖周期6周。结果显示:发酵豆粕组的增重率最高,但与对照组差异不显著;菜籽粕组的增重率显著低于对照组。发酵豆粕组、鸡肉粉组和肉骨粉组的肝胰脏蛋白酶活性与对照组差异不显著,菜籽粕组肝胰脏蛋白酶活性显著性低于对照组;发酵豆粕组脂肪酶活性最高,但与对照组差异不显著。发酵豆粕组小肠的胰岛素生长因子受体(IGF1R)相对表达量与对照组差异不显著,但显著高于其他三组;菜籽粕组、发酵豆粕组和肉骨粉组肝脏的IGF1R相对表达量显著高于对照组。结果表明:比较4种蛋白源替代50%鱼粉,发酵豆粕效果最佳,肉骨粉和鸡肉粉次之,菜籽粕最差。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
韩一鸣 鲁苏皖 许志强 徐宇 林海 潘建林 杨家新 李旭光
虾青蛋白(Crustacyanin， CRCN)在甲壳动物脂类代谢及低氧胁迫应激调控等方面具有重要的功能。为获取虾青蛋白在克氏原螯虾(Procambarus clarkii)性腺发育和低氧胁迫应答中的作用，本研究在克氏原螯虾肝胰腺组织中鉴定出1个类虾青蛋白PcCRCN-L基因的cDNA序列，分析了PcCRCN-L基因的结构特征和进化模式，研究了PcCRCN-L基因在不同组织与性腺不同发育时期的表达特征，探讨了PcCRCN-L在低氧–复氧胁迫下的表达响应模式。结果显示，PcCRCN-L基因cDNA序列长2 700 bp，其开放阅读框(ORF)长度为1 587 bp，编码528个氨基酸残基；DNA序列长6 130 bp，位于克氏原螯虾基因组的第12号染色体，包含5个外显子和4个内含子，内含子/外显子剪接方式符合GT-AG规则。PcCRCN-L具有1个完整的lipocalin结构域，包含典型的序列保守区Ⅰ(SCR1)序列G-X-W、保守区Ⅱ(SCR2)序列T-D-Y和保守区Ⅲ(SCR3)序列精氨酸R。多序列比对与系统进化分析结果显示，PcCRCN-L独立于传统虾青蛋白A和C亚族，单独聚为一支。PcCRCN-L在克氏原螯虾多个组织中均有表达，在肝胰腺中表达量最高；在性腺不同发育时期，肝胰腺以及卵巢组织中的PcCRCN-L基因表达量显著降低；低氧胁迫下，肝胰腺组织中PcCRCN-L表达量显著降低，复氧后显著升高。研究结果表明，PcCRCN-L与克氏原螯虾性腺发育密切相关，并参与了克氏原螯虾的低氧–复氧胁迫应激调控。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
江红霞 李屹铮 张冉 王磊 张猛 于淼 乔志刚 李学军
为了阐明克氏原螯虾(Proambaus clarkii)核糖体蛋白S24(ribosomal protein S24,RPS24)基因序列特征及其在卵巢发育中的作用,本研究利用RACE方法克隆获得了克氏原螯虾RPS24(PcRPS24)基因全长cDNA序列,并利用实时荧光定量PCR(QPCR)方法对该基因的表达模式进行了分析。结果显示:PcRPS24 cDNA序列全长438 bp,编码136个氨基酸,并具有11个磷酸化位点和1个RPS24e标志序列;克氏原螯虾与八棘多刺鱼的RPS24氨基酸序列相似性最高,与昆虫纲动物在进化上的亲缘关系最近;PcRPS24基因表达量在克氏原螯虾发育过程中逐渐升高,在卵巢发育至Ⅰ期的成虾中达到最大值;在成虾的不同组织中,PcRPS24基因在肝胰腺和卵巢中的表达量较高;在Ⅰ-Ⅵ期的卵巢中,PcRPS24基因在Ⅰ期卵巢中的表达量最高。结果表明PcRPS24可能在克氏原螯虾早期卵巢发育中起重要作用。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
祝孟茹 问露洁 占铭 公洁 席昌俊 闻海波 沈怀舜
为了解自噬相关基因Atg2在克氏原螯虾(Procambarus clarkia)先天免疫中的作用，本研究克隆了克氏原螯虾Atg2 (PcAtg2)基因全长序列。生物信息学分析显示，PcAtg2蛋白编码序列全长为9966 bp，推测其编码2189个氨基酸。组织定量表达分布显示，PcAtg2在克氏原螯虾的各个组织中均有表达，其中在肝胰腺中表达最高，在眼柄中表达最低。在白斑综合征病毒(WSSV)感染实验中，PcAtg2基因表达量在不同组织中均呈现显著上调趋势。RNA干扰(RNAi)实验显示，PcAtg2基因沉默后，WSSV在克氏原螯虾体内的增殖明显被抑制，同时自噬相关基因的表达量上调。透射电镜分析结果显示，在WSSV感染后，PcAtg2基因沉默组中克氏原螯虾肝胰腺组织中的自噬小体多于对照组。本研究结果可为了解克氏原螯虾应对WSSV胁迫下的调控机制提供理论参考。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
谢玲玲 吴志新 袁娟 刘佳佳 彭小云 朱旭 陈孝煊
采用高效液相色谱法,研究25℃下黄鳝单次口灌氟苯尼考(20mg/kg)后其体内的药物代谢和连续3d口灌(20mg/(kg.d))氟苯尼考后的药物残留消除规律。试验结果表明,氟苯尼考在黄鳝体内吸收迅速、组织分布广泛。血浆、肝脏、肾脏和肌肉中氟苯尼考的达峰质量浓度(Cmax)和达峰时间(Tmax)分别为6.07μg/mL、7.57、9.34、5.87μg/mg和3.67、4.45、2.01、9.28h。各个组织消除半衰期t1/2β)的大小顺序为肾脏(29.26h)>肝脏(19.32h)>肌肉(17.22h)>血浆(10.84h)。氟苯尼考胺在黄鳝体内代谢缓慢,肾脏中的消除半衰期和代谢率(MR)最高...
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
陈大健 冯秀娟 江善祥
用以氯唑沙宗为底物探针的药动学方法研究了氟苯尼考和乙醇对鲫细胞色素P450 2E1活性的影响,为临床合理用药提供参考及鱼类CYP2E1的相关研究提供技术方法和理论数据。将鲫随机分为3组,即对照组、氟苯尼考组和乙醇组。实验组鲫分别每日经口给予氟苯尼考100 mg/kg.bw和乙醇1 g/kg.bw,连续5 d后,与对照组鲫同时一次性腹腔注射氯唑沙宗10 mg/kg.bw,用高效液相色谱法测定氯唑沙宗在鲫体内不同时间点的血药浓度,并计算药动学参数。结果表明氯唑沙宗在三组鲫体内的药时数据均符合二室模型;与对照组相比,氟苯尼考组和乙醇组氯唑沙宗的半衰期分别增加了5倍和0.9倍(P<0.01),药时曲线...
[期刊] 水产学报
[作者]
卢志杰 叶成凯 Sarath Babu V 张晓君 刘晓丹 赵丽娟 潘淦 林蠡
谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase, GS)是一种广泛分布在动植物体内的酶,并参与细胞多种代谢调控。在甲壳动物中,GS在能量代谢和渗透压调节过程中起着重要作用。实验克隆了罗氏沼虾GS基因。GS基因cDNA全长1 965 bp,开放读码框(ORF)为1 086 bp,编码361个氨基酸(aa),分子量大小为40.75 ku,等电点为5.81。进化树分析发现,罗氏沼虾GS基因与凡纳滨对虾、斑节对虾和中国明对虾GS聚为一支,氨基酸相似性达到95%。氨基酸多序列比对分析结果显示,罗氏沼虾GS属于无脊椎动物分支的GSⅡ群,有5个保守区域。实验对罗氏沼虾GS蛋白进行表达并制备了多克隆抗体。采用荧光定量PCR技术(qRT-PCR)和免疫印迹(Western blot)对罗氏沼虾蜕壳前后的不同组织GS表达进行检测。qRT-PCR结果显示,GS基因在所检测的8个组织中均有表达;蜕壳前,其相对表达量顺序为:肝胰脏>肌肉>胃>肠>鳃>心脏>脑>血淋巴。蜕壳后和蜕壳前GS基因在组织中的差异表达比较结果显示,除了在肝胰脏表达下调外,其他7个组织都表达升高,其相对表达量的差异顺序为:脑>鳃>胃>肠>肌肉>心脏>血淋巴。Westernblot结果显示,蜕壳后GS蛋白在鳃和肌肉组织表达量上调,与其mRNA表达一致。此外,罗氏沼虾蜕壳后肝胰脏GS酶的活性和谷氨酰胺的含量下调,而其在鳃、肌肉和血淋巴中上调,结果与其基因表达一致。研究表明,GS基因在不同组织中表达的差异可能和罗氏沼虾的能量代谢、渗透压调节有关。
关键词：
罗氏沼虾 谷氨酰胺合成酶 组织表达 蜕壳
[期刊] 淡水渔业
[作者]
李青松 范文浩 王乾 阮国良 郑维友 方刘
为探讨光照度和水温对克氏原螯虾标准代谢率的影响，本研究在2020年9～12月开展了相关研究。克氏原螯虾幼虾规格为(2.0±0.3) g,分别在不同温度(18、22、26和30℃)及各温度在不同光照度(0、500、1 000 lx)条件下进行了标准代谢率的测定。结果显示：氨氮排泄率(R_N)和耗氧率(R_O)均随温度升高而增大，其关系式可表示为：R_N=2.380 7e~(0.084 4T);R_O=0.134 5e~(0.047 7T)。在同一温度下，随着光照度增强，幼虾R_O显著性降低；但光照度的变化对R_N没有显著相关性。在3个光照度下，耗能率随温度升高均显著增大；在4个实验温度下，随光照度增大耗能率均显著降低。温度、光照度变化对幼虾代谢底物消耗影响不显著，幼虾主要以脂肪、蛋白质及碳水化合物为代谢主要供能物质，其中碳水化合物供能占比较大。在实验设置条件下最小温度系数(Q_(10))出现在(18～22)℃,耗氧率最大值均出现在0 lx。因此实验推测，温度在(18～22)℃、光照度为0 lx时最适克氏原鳌虾幼虾的生长。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘振兴 陈昌福 高宇 王美珍 谭晶晶 李革雷
将嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)用灭菌生理盐水调节至1.5×104cfu/mL(Ⅰ组)和1.5×106cfu/mL(Ⅱ组)的浓度后,注射法接种克氏原螯虾(Procambarus clarkii)(人工感染),定时检测供试克氏原螯虾的总血细胞数量(THCs)、淋巴液中酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)、溶菌酶活性和抗菌活力等免疫相关因子活性的变化状况。结果表明,注射不同浓度的A.hydrophila后的8~48 h之间,供试克氏原螯虾的免疫相关因子的活性发生了显著变化。2个试验组的克氏原螯虾在注射A.hydrophila后8~48 h内,THCs和SOD活性显著...
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