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[期刊] 中国水产科学
[作者]
胡晓 房文红 汪开毓 孙贝贝 胡琳琳 周帅 周俊芳
在分析了氟甲喹腹腔注射后对异育银鲫(Carassius auratus gibelio)主要药酶活性影响的基础上,从蛋白表达和mRNA转录水平探究了氟甲喹对CYP1A(EROD)的诱导机制。以氟甲喹剂量35mg/kg一次性腹腔注射异育银鲫24h后,肝微粒体的7-乙氧基异吩唑酮-O-脱乙基酶(EROD)活性为54.33pmol/(mg·min),显著高于对照组的34.00 pmol/(mg·min)(P
关键词：
细胞色素P450 异育银鲫 氟甲喹 诱导
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨丹 宋昕昊 季春雷 彭麟 高修歌 左儒楠 季辉 江善祥
[目的]研究鲫鱼肝脏细胞色素P450酶系对马度米星铵的响应。[方法]采用半静态染毒法，设置0.112、0.224、0.448 mg·L~(-1)的马度米星铵处理组和助溶剂对照组，在染毒后第7、14、21及28天，测定肝脏中细胞色素P450 1A(CYP1A)、3A(CYP3A)及4T(CYP4T)的mRNA表达水平，同时测定7-乙氧基异吩唑酮-脱乙基酶（EROD）、氨基比林-N-脱甲基酶（APND）、苯胺-4-羟化酶（AH）、红霉素-N-脱甲基酶（ERND）、NADPH-细胞色素C还原酶（NCCR）的活性及细胞色素P450（CYP450）的含量；通过体外肝微粒体孵育法评价马度米星铵对CYP1A活性的影响。[结果]马度米星铵对CYP1A、CYP3A和CYP4T的mRNA表达水平有一定诱导作用；0.448 mg·L~(-1)马度米星铵组CYP450含量在第21天显著低于对照组（P<0.05）；试验期间，马度米星铵组ERND活性均低于对照组；暴露于各染毒组的AH活性呈先升高后降低的趋势；体外肝微粒体孵育体系中，马度米星铵对CYP1A活性的抑制作用小于25%。[结论]马度米星铵对鲫鱼肝微粒体CYP1A活性无影响；马度米星铵对ERND活性的抑制作用可能与CYP3A的转录水平无关；ERND对马度米星铵较为敏感，适合作为马度米星铵污染水体的生物标志物。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杜金梁 秦建华 褚景生 徐丽娜 马玉忠
【目的】探讨复方益母生化散对奶牛子宫内膜炎的作用机理。【方法】体外实验:分离奶牛子宫内膜细胞,细菌脂多糖(LPS)诱导子宫内膜细胞炎症模型,复方益母生化散处理子宫内膜炎症细胞48h、72h,Western blotting法检测CYP450的表达;体内实验:复方益母生化散栓剂治疗患有子宫内膜炎的奶牛,检测血清中IgG、IgA含量的变化。【结果】复方益母生化散处理后,子宫内膜炎症细胞CYP450的表达随复方益母生化散剂量的增加而呈升高的趋势,血清中IgG、IgA的含量与对照组相比明显升高。【结论】2000μg·mL-1的复方益母生化散作用奶牛子宫内膜炎症细胞48h,CYP450的表达最明显。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张林林 徐鹿 韩召军
利用毒死蜱、吡虫啉和溴氰菊酯等3类不同药剂,通过毒力生测首先确定了田间灰飞虱对杀虫剂的低水平多重抗性特性;其次通过解毒酶活力测定,发现抗性品系的细胞色素P450氧化酶和酯酶明显升高;进而根据灰飞虱转录组数据进行引物设计,通过PCR克隆对转录组中的细胞色素P450及酯酶基因进行验证,在得到53条细胞色素P450基因序列及72条酯酶基因序列的基础上,利用半定量PCR比较这些基因在灰飞虱田间抗性品系和敏感品系间的表达差异。结果发现:细胞色素P450的CYP6家族中有10条,CYP4家族中有6条,这16条基因序列在抗性品系中的表达量明显高于敏感品系;酯酶中也有12条基因系列在抗性品系中的表达量明显高于...
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
王树芹 周洪琪
以壳聚糖为饲料添加剂,分5组(0％、0.3％、0.5％、1.0％、2.0％)对网箱养殖的异育银鲫(allogyogenetics silver crucian carp)进行不同添加剂量的饲养实验。经过2个月的饲养,分别从每组提取异育银鲫血清、脾脏和头肾上清液进行溶菌酶活性和白细胞吞噬活性实验,实验结果表明,添加0.5％或1.0％壳聚糖能有效地提高异育银鲫的溶菌酶活性(P<0.01)和白细胞的吞噬作用(P<0.01),该壳聚糖可被用作水产动物免疫增强剂,其在饲料中适宜添加量为0.5％。
关键词：
壳聚糖 异育银鲫 溶菌酶活力 吞噬作用
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
房加鹏 张琳 李茹 陈国奇 董立尧
[目的]本文旨在明确稗[Echinochloa crusgalli(L.)P.Beauv]对五氟磺草胺产生抗药性的机制。[方法]采用整株生物测定的方法研究3种细胞色素P450抑制剂(PBO、ABT和马拉硫磷)对抗五氟磺草胺稗HYYJ-1种群敏感性的影响;以敏感种群JLGY-3为对照,应用分子生物学等方法进行了抗性种群乙酰乳酸合成酶(acetolactate synthase,ALS)活性、ALS基因序列及ALS基因表达量的研究。[结果]发现P450抑制剂PBO、ABT和马拉硫磷均能显著提高抗性种群对五氟磺草胺的敏感性,鲜质量抑制中剂量(ED50,以药剂有效成分计),从27.16 g·hm~(-2)下降为3.44、6.06和3.23 g·hm~(-2);通过ALS基因序列比对,未发现HYYJ-1种群ALS基因发生氨基酸替换;抗性和敏感种群ALS离体酶活性及基因表达量差异不明显。[结论]抗性种群HYYJ-1对五氟磺草胺产生抗药性不是ALS靶标酶变化所致,而与细胞色素P450代谢作用加强有关。
[期刊] 水产学报
[作者]
朱磊 胡晓 房文红 胡琳琳 李新苍 李国烈 写腊月
根据5种硬骨鱼已知CYP3A序列保守区设计兼并引物,以异育银鲫cDNA为模板扩增得到CYP3A基因片段,根据得到片段序列设计特异引物并利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得全长cDNA。得到异育银鲫CYP3A基因全长为1 769 bp,开放阅读框为1 545个核苷酸,编码514个氨基酸。其预测蛋白质分子量为58.624 ku,理论等电点为6.30。将异育银鲫CYP3A序列理论编码氨基酸序列提交细胞色素P450命名委员会(Cytochrome P450 NomenclatureCommittee)并由其命名为CYP3A136。氨基酸序列分析显示,其与稀有鲫、草鱼、鲦同源性较高,并且具有高度...
[期刊] 海洋渔业
[作者]
喻文娟 李聃 王翔凌 张宁 邱军强 杨先乐
体外培养大口黑鲈(Micropterus salmoides)原代肝细胞,观察其在培养过程中的形态变化,同时检测培养上清液中的乳酸脱氢酶(LDH)、白蛋白(ALb)含量,从而判定肝细胞的增殖和代谢能力,进而应用于CYP450的诱导研究。结果表明:培养5 d后,肝细胞连接成片,分裂增多;培养至7 d,细胞渐至单层;14 d后,细胞停止生长,出现老化迹象。培养至第3~4天的细胞上清液中LDH的渗出量呈上升趋势,在第4天时达到峰值,随着培养时间的延长,肝细胞的酶渗出量逐渐减少。ALb的分泌量在第3~5天呈上升的趋势,第4~8天维持在较高水平,在第5天达到最高,此后随着培养时间的延长,ALb的分泌量呈...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吕敏 刘惠霞 吴文君
研究了细胞色素 P4 5 0含量及 NADPH-细胞色素 P4 5 0还原酶活性与苦皮藤素 对粘虫(Mythimna separata)和小地老虎 (Agrotisypsilon)选择毒性的关系。结果表明 ,对照组小地老虎中肠细胞色素 P4 5 0含量及 NADPH-细胞色素 P4 5 0还原酶活性均显著高于粘虫。苦皮藤素 处理后 ,小地老虎和粘虫中肠细胞色素P4 5 0含量均显著高于对照 ,粘虫中毒抽搐期及失水期中肠细胞色素 P4 5 0含量分别比对照升高 1 .4 6和 2 .2 6倍 ,NADPH-细胞色素 P4 5 0还原酶活性分别比对照升高 1 .2 6和 2 .5 6倍 ;处理...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
夏西超 王文锋 杨洪 宁黔冀
为探讨咪唑类物质KK-42促进凡纳滨对虾(Litopenaeaus vannamei)生长的分子机制,本研究克隆出与蜕皮和生长相关的CYP4V18基因的全序列,研究了该基因的时空表达,并结合测定血淋巴20-羟基蜕皮甾酮(20E)滴度。将体长3.5～5.0 cm凡纳滨对虾幼虾随机分为2组,分别用1.95×10-4mol/L的KK-42溶液或不含KK-42的溶液浸泡处理1 min,之后在相同条件下常规饲养。CYP4V18 mRNA水平定量分析采用real-time PCR,血淋巴中20E滴度测定采用反相高效液相色谱法。结果显示,CYP4V18开放阅读框为1 545 bp,编码515个氨基酸,包含C...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈爱华 孙修炼 赵秀云
采用实时荧光定量PCR,测定棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)细胞色素P450 CYP9A14基因在氯氰菊酯抗性棉铃虫中肠里的表达量,结果表明抗性棉铃虫是敏感棉铃虫中肠表达量的17倍。将棉铃虫中肠P450 CYP9A14基因的一个490bp反向重复片段以双链RNA干扰(double-stranded RNA interference,dsRNAi)的方法重组到棉铃虫核型多角体病毒(helicoverpa nuclear polyhedrosis virus,HaNPV)中,结果表明以该重组病毒注射氯氰菊酯抗性棉铃虫体内后,幼虫中肠CYP9A14基因的转录水平显著下降...
关键词：
棉铃虫 杆状病毒 基因转录 抗药性
[期刊] 水产学报
[作者]
杨光 秦真东 赵丽娟 詹凡玢 沈海洋 张梦兰 卢志杰 叶成凯 李凤麟 潘淦 林蠡
蜕皮是甲壳动物重要的生理活动,与其蜕皮激素的合成密切相关,细胞色素P450(CYP)302a1是甲壳动物蜕皮激素合成通路中的关键酶之一。本研究克隆了罗氏沼虾CYP302a1基因(Mr-CYP302a1),cDNA全长1 859 bp,开放阅读框(ORF)为1 629 bp,编码543个氨基酸(aa),分子量大小为61.09 ku,等电点为8.42。氨基酸序列分析显示CYP302a1基因的保守结构域含有5个P450基因家族特征保守区域:heme-binding、helix-K、helixC、helix-I及PERF。系统进化分析结果显示Mr-CYP302a1首先与绿虾CYP302a1聚为一支,然后与凡纳滨对虾及三疣梭子蟹等十足目甲壳动物的CYP302a1聚为一支,与甲壳动物的亲缘关系最近。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测表明Mr-CYP302a1在罗氏沼虾的多个组织中均有表达,其中在Y器官中的表达量最高,性腺中次之。同时研究发现,MrCYP302a1基因在罗氏沼虾的蜕皮后期(A期和B期)表达量很低,蜕皮间期(C期)表达量开始上升,在蜕皮前期D1亚期达到峰值。对Mr-CYP302a1进行蛋白表达及多克隆抗体制备,蛋白印迹法(Western blot,WB)检测表明Mr-CYP302a1蛋白在罗氏沼虾Y器官中的表达量最高,在蜕皮过程中的蜕皮前期D1亚期达到峰值。综上所述,该基因在罗氏沼虾的蜕皮过程中扮演着十分重要的角色。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
肖明松 鲍方印 崔峰 王松 桑宏庆 康健
选取相同生长阶段、体重均匀的异育银鲫160尾，随机分为5组，每组2个平行，每个平行 16尾。糖萜素的添加水平每千克饲料为0、 0． 5、 0． 9、 1． 2、 1． 5g。结果表明：试验2组异育银鲫日增重最 大，饲料系数最小，对照组异育银鲫日增重最小，饲料系数最大。试验1组和试验2组的日增重与对照组相 比差异显著(p＜0． 05) ，其他组与对照组相比差异不显著(P＞0． 05) ，试验2组异育银鲫的日增重比对照组 提高71． 14%。试验组异育银鲫的饲料系数与对照组相比显著下降(P＜0． 05) 。在适宜的温度范围内，试验 2组异育银鲫的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活力最高，对照组最低。由此可见...
关键词：
糖萜素 异育银鲫 生长性能 消化酶活力
[期刊] 中国农业科学
[作者]
任晓宇 杨美玲 高翠娥 张建珍 马恩波
【目的】研究飞蝗(Locusta migratoria)细胞色素P450(CYP450)第四家族(CYP4)中3个基因的功能。【方法】以飞蝗为材料,依据飞蝗EST数据库P450基因预测序列设计引物,利用RT-PCR技术克隆飞蝗细胞色素P450基因的cDNA全长序列,命名为CYP4C69、CYP4C73和CYP4DH1(GenBank登录号:KF857162、KF857163和KF857164)。采用实时定量PCR技术分析CYP4C69、CYP4C73和CYP4DH1在飞蝗各发育阶段以及不同组织中mRNA的表达水平。应用RNA干扰技术沉默CYP4C69、CYP4C73和CYP4DH1,实时定量P...
[期刊] 水产学报
[作者]
徐维娜 刘文斌 邵仙萍 蒋广震 张薇薇 王莹 张春暖
用含不同浓度维生素C(0,50,100,200,400和800μmol/L)的培养液培养异育银鲫原代肝脏细胞,待细胞融合后,测定细胞活性、细胞内维生素C含量,乳酸脱氢酶(LDH)活性。再将用维生素C培养的肝脏细胞经敌百虫胁迫24 h,测定细胞内总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)和丁酰胆碱酯酶(B-ChE)活性以及细胞内细胞色素P450(CYP450)含量。结果表明,与未添加维生素C组相比,在100μmol/L的维生素C剂量组,肝脏细胞活性显著高于较其它剂量组(P<0.05);细胞内维生素C的含量随着培养液中维生素C的增加而增加,且差异显著(P<0.05);在800μmo...
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