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[期刊] 中国农业科学
[作者]
王梅 于福清 吴培福 赵德明 苏敬良 韩博
【目的】探讨氟对成骨细胞骨钙素(OCN)基因表达的影响。【方法】应用酶消化法分离初生小鼠头盖骨成骨细胞,取第3代成骨细胞,加入不同浓度(0～10-3mol·L-1)氟化钠,提取细胞总RNA,通过实时荧光定量PCR方法,观察成骨细胞OCN基因表达的变化。【结果】各浓度NaF均能刺激体外培养成骨细胞OCN基因的表达呈剂量依赖关系,当浓度为5×10-4mol·L-1时OCN基因表达量的增加最为明显,约为对照组的30倍。【结论】各浓度的NaF均能在基因水平刺激OCN的表达,OCN在氟中毒所致的骨相损害中起着重要的作用。
关键词：
氟化钠 成骨细胞 骨钙素 荧光定量PCR
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘俊栋 顾建红 翟必华 刘学忠 卞建春 刘宗平
【目的】探讨不同浓度骨保护素(osteoprotegerin,OPG)对破骨细胞(osteoclasts,OC)生成和活化的影响。【方法】通过成骨细胞(osteoblasts,OB)与脾细胞共培养的方法在体外诱导脾细胞转化为OC。采用形态学观察、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色计数、扫描电镜观察象牙片吸收陷窝方法检测OC的生成和活化。【结果】随着OPG浓度(5、10、25、50、75ng·ml-1)的增加,TRAP阳性OC数逐渐减少,各试验组与对照组比较差异均极显著(P<0.01);象牙片吸收陷窝的数目和面积也逐渐减少,OPG浓度为50ng·ml-1、75ng·ml-1时观测不到吸收陷窝。【...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王建舫 曲伟杰 吴培福 吴清民 刘金华 韩博
为探讨氟化钠对小鼠成骨细胞中核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)和骨保护素(OPG)mRNA表达比率的影响,选取新生小鼠颅盖骨,用胰蛋白酶-胶原酶消化法分离培养成骨细胞。取其第3代成骨细胞,在实验组培养液中加入不同浓度的氟化钠(10-7、10-6和10-5mol/L),并分别培养24、48、96和144 h,从细胞板贴壁细胞中提取总RNA,应用荧光定量RT-PCR方法检测细胞中RANKL与OPG mRNA表达比率的变化。结果显示,氟化钠增加了RANKL/OPG mRNA的表达比率,且呈明显的时间剂量效应关系。对照组和实验组在培养48 h时,RANKL与OPGmRNA的表达比率显著增加(P...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
邹磊 冀红芹 刘禹含 孙会 秦贵信
【目的】研究日粮钙水平对仔猪血清碱性磷酸酶活性、骨钙素质量浓度、血清钙浓度及胫骨钙含量和密度的影响,为钙调控仔猪成骨细胞活性提供依据。【方法】采用单因子完全随机分组设计,将60头杜长大仔猪(体质量(21.8±2.1)kg)分成6个处理,每处理设10个重复,每重复1头猪。各处理分别饲喂钙水平为0.30%,0.45%,0.60%,0.75%,0.90%和1.05%的玉米-豆粕型日粮。预饲期为7d,正式试验期28d,并在正式试验的14和28d屠宰仔猪,测定其血清钙浓度、血清活性标志物碱性磷酸酶活性和骨钙素质量浓度及胫骨钙含量和密度,分析钙水平对仔猪成骨细胞活性和胫骨性能的影响。【结果】随着日粮钙水平...
[期刊] 水产学报
[作者]
林茂 杨先乐 纪荣兴
为了建立以CYP1A cDNA为探针的水环境毒理学细胞模型,以β-萘黄酮(BNF)作为诱导剂,通过半定量PCR技术研究CYP1A在草鱼不同细胞系及其对应组织中的诱导表达情况。在半定量PCR反应参数研究中,对关键的退火温度和循环次数进行了优化,结果显示退火温度为57℃,循环次数为30次较为合适,该条件下Gauss迹量的CYP1A/ACT比值能更准确的反映CYP1A的表达水平。对照组和诱导组草鱼细胞中ACT和CYP1A cDNA扩增结果表明,细胞中CYP1A的基础表达量较低,而BNF诱导使GCL、CIK和CO细胞中CYP1A的表达水平得到显著的提高。GCL、CIK和CO细胞三者之间诱导后CYP1A...
关键词：
草鱼 细胞 CYP1A cDNA 诱导
[期刊] 华北农学报
[作者]
杜晨光 彭春霞 刘永斌 王昆
为揭示Ghrelin在绵羊卵母细胞的表达情况,运用实时定量RT-PCR技术检测不同培养系统中绵羊卵母细胞Ghrelin mRNA的相对表达量。结果表明,以M199和血清为基础培养基添加不同激素后培养的卵母细胞GhrelinmRNA相对表达量均显著上升,仅以M199为基础培养基添加不同激素后培养的卵母细胞Ghrelin mRNA相对表达量均显著下降。在不同基础培养基中添加不同激素后,E2较FSH和LH有促进Ghrelin mRNA相对表达量升高的趋势。绵羊卵母细胞Ghrelin mRNA的表达以及在不同培养系统动力学变化,提示了这一新型分子在卵母细胞成熟过程中受激素潜在的调控作用。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈秀霞 邓益锋 周振雷 朱捷 李晓兰 陈金丽 陶庆树 侯加法
为探讨雌激素和雄激素对鸡胚额骨成骨细胞(OB)增殖、凋亡、细胞周期及其受体mRNA转录的影响,用雌激素(17β雌二醇)和雄激素(十一酸睾酮)单独以及联合处理鸡胚额骨成骨细胞,MTT法测定细胞增殖率,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化,荧光定量PCR检测成骨细胞中雌激素受体(ER)及雄激素受体(AR)mRNA的转录。结果显示:一定浓度的雌激素或雄激素在24h内均能促进成骨细胞的增殖,促进成骨细胞的细胞周期进程,但对细胞凋亡无明显作用。雌激素单独或联合雄激素作用能上调ERmRNA的转录,对ARmRNA的转录无明显作用。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姚静 钱存忠 张皎 张建峰 侯加法
从18日龄鸡胚长骨(股骨和胫骨)中机械分离破骨细胞于盖玻片和骨片上培养,以建立鸡胚破骨细胞体外培养方法。结合倒置相差显微镜、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、甲苯胺蓝染色及透射电镜(TEM)和扫描电镜(SEM)对其形态和功能进行观察鉴定。结果表明,直接分离的细胞具有典型的破骨细胞的形态特点:属多核大细胞,TRAP染色阳性,能在骨片表面形成吸收陷窝。结论:鸡胚长骨机械分离法可获得一定数量并具有骨吸收活性的破骨细胞。
关键词：
鸡胚 破骨细胞 培养 鉴定
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
付佳 梁金逢 阴银燕 杨倩
为建立鸡骨髓源树突状细胞(DC,dendritic cells)体外培养方法,用重组鸡粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rGM-CSF)和重组鸡白细胞介素4(rIL-4)体外诱导鸡骨髓细胞分化为DC,然后通过形态观察、表型鉴定及功能分析来初步鉴定所培养的DC。试验结果表明:培养7 d后,光学显微镜下观察到细胞表面不规则,有显著的树突状突起,呈典型的DC形态,流式细胞仪测得细胞表面CD11c和MHCⅡ分子的表达量分别为69.3%和63.0%。经脂多糖或CpG-ODN刺激24 h后的DC,其表面成熟分子标志CD40和CD86上调表达,同时其刺激同种异体T细胞增殖的能力显著增强(P<0.01)。结论:本...
关键词：
树突状细胞 体外培养 鉴定
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王建起 Selvaraj J.NIMAL 曹文广
为研究体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞Bmp8a和Bmp8b基因的表达情况,用10IU PMSG皮下注射21～23日龄健康雌性ICR小白鼠,48h后刺破卵泡获取颗粒细胞,置入10%FBS的DMEM/F12中体外培养5d,用Trizol提取总RNA,RT-PCR验证后切取目的 DNA片段进行测序。RT-PCR测序结果表明体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞可扩增BMP-8atranscript variant 2和BMP-8b的mRNA序列,不扩增BMP-8atranscript variant 1的mRNA序列。结果显示体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞可表达BMP-8atranscript variant 2和Bm...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李连歌 曹哲明 陶易凡 张丽 马俊蕾 李鸣霄 包景文 朱昊俊 徐跑 强俊
钙敏感受体(calcium-sensing recceptor, CaSR)在Ca~(2+)刺激下可参与调控细胞凋亡等生理过程,在机体适应逆境胁迫中发挥重要作用。为研究吉富罗非鱼(Genetically Improved Farmed Tilapia, GIFT)CaSR基因的特点及其在缺氧胁迫下参与细胞凋亡的调控机制。本研究利用RT-PCR技术克隆了吉富罗非鱼CaSRcDNA全长序列,利用qRT-PCR技术分析了该基因在不同组织中的表达模式,并进一步检测了缺氧胁迫下(0.55mg/L)肝脏中该基因和细胞凋亡相关基因mRNA的表达变化,同时利用ELISA法检测了肝脏中抗氧化酶活性的变化,以及通过HE和TUNEL染色法分别观察了肝细胞的形态变化和凋亡情况。结果显示,吉富罗非鱼CaSR cDNA序列全长3265 bp,包括21 bp 5′非编码区、2823 bp开放阅读框和421 bp 3′非编码区,编码940个氨基酸。CaSR基因mRNA在不同组织中均有表达,其中肌肉中表达量最高,肾脏次之;组织切片观察发现缺氧可导致肝脏组织结构损伤,促进肝细胞凋亡;与对照组(5.0mg/L)相比,缺氧可增强SOD、CAT和GSH-Px抗氧化酶活性,上调CaSRmRNA的表达,并引起Bcl-2、Caspase-3和P53凋亡基因mRNA的表达变化。研究结果表明, CaSR可能通过介导Ca2+调控细胞凋亡,从而参与吉富罗非鱼的缺氧应对机制。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姚文 唐梓进 汪岱迪 金卫红 孟群 曹平
ＮＩＨ小鼠孕期连续服用牛初乳提取物（ＢＣＥ）、活性钙和蒸馏水，孕后第１８天解剖母鼠，检查胎鼠骨骼发育情况。结果表明，ＢＣＥ能显著促进胎鼠骨骼的生长发育，比单纯补钙更有效。用离体培养的新生大鼠头盖骨成骨细胞检测不同浓度的ＢＣＥ和表皮生长因子（ＥＧＦ）的促细胞增殖作用时发现，ＢＣＥ浓度在２μｇ／ｍＬ至２０ｍｇ／ｍＬ之间递增时，其促细胞增殖作用随之加强，继续提高浓度则对细胞增殖产生抑制作用；不同浓度的ＥＧＦ也有促细胞增殖作用，但ＥＧＦ的剂量曲线比较平缓，提示ＢＣＥ的促细胞增殖作用是多种生长因子协同作用的结果。实验结果表明ＢＣＥ具有促进骨骼发育的作用。
[期刊] 华北农学报
[作者]
张金吨 王标 李云霞 陈杨林 刘黎明 戴雁峰 李喜和
为研究过表达ｃｄｃ２０基因对绒山羊卵母细胞体外成熟的影响，构建了Ｍｙｃ－ｃｄｃ２０载体，在体外转录成ｃＲＮＡ后显微注射到绒山羊卵母细胞中，观察其对绒山羊卵母细胞体外成熟过程的影响。结果表明，在对照组卵母细胞体外培养的过程中，卵母细胞培养到８ ｈ后发生ＧＶＢｄ，１８ ｈ后进入ＭⅠ期，直到２４ ｈ后，约７５％的绒山羊卵母细胞排出第一极体。卵母细胞在ＧＶ期时显微注射Ｇ Ｍｙｃ－ｃｄｃ２０ ｃＲＮＡ，培养１０ ｈ后，通过ＷｅｓｔｅＲＮ ＢｌｏｔｔｉＮＧ的方法检测到了Ｍｙｃ－ｃｄｃ２０融合蛋白的表达。但统计结果显示，试验组卵母细胞各阶段发育时间和成熟率与对照并无显著差异。因此，单独过表达ｃｄｃ２０基因不．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王红芳 刘红云 杨维仁 刘建新 杨在宾
【目的】旨在观察反-10,顺-12,共轭亚油酸(t10c12 CLA)对牛乳腺上皮细胞中甾醇调控元件结合蛋白(SREBP-1)基因的表达和蛋白质加工的影响。【方法】本试验使用组织块培养法获得奶牛乳腺上皮细胞,使用不同浓度t10c12 CLA处理乳腺上皮细胞后,用油红染色法检测胞质内的脂滴分布,Trizol法提取细胞总RNA,荧光定量PCR法测定相关基因的表达量,试剂盒法提取细胞总蛋白,进行Western blotting。【结果】随t10c12 CLA添加量的增加,细胞质内甘油三酯的含量逐渐降低。与对照组相比,75、112.5和150μmol.L-1 t10c12 CLA均对胞质内甘油三酯的积...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘杨 顾丹丹 许俊旭 丁艳锋 王强盛 李刚华 刘正辉 王绍华
【目的】研究细胞分裂素(CTK)和分蘖相关基因表达在调控水稻分蘖芽生长过程中的相互关系,探讨水稻分蘖芽生长的分子机理。【方法】以南粳44为材料,利用氮(N)和生长素(IAA)调控水稻分蘖芽萌发,分析OsTB1、OsD3、OsD10和OsD27的表达和CTK含量的变化。【结果】外源40 mg.L-1N增加了分蘖节和分蘖芽中CTK含量,抑制了分蘖芽中OsTB1、OsD3、OsD10和OsD27的表达,促进了分蘖芽的萌发生长,外源喷施IAA则逆转了氮的作用。分蘖芽中OsTB1的表达受CTK调控,而OsD3、OsD10和OsD27的表达可能不受CTK调控。【结论】外界因素对分蘖芽生长的调控至少存在2条...
关键词：
水稻 细胞分裂素 分蘖芽 分蘖相关基因
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