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[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
李海霞 张志毅 张谦 安新民 李琰 刘婷婷
该文采用农杆菌介导法将从毛白杨中克隆得到的TIR-NBS-LRR抗病基因(PtDRG01)导入烟草中,经抗生素筛选和PCR分子检测,获得了一批阳性转化植株。进而对这些阳性转化植株进行烟草花叶病毒接种实验,从表型观察结果发现,在接种病毒1周和6周后,转基因烟草株系TG-11的发病程度明显低于非转基因烟草。荧光定量分析结果显示,转基因烟草株系TG-11叶片中的烟草花叶病毒(TMV)数量显著低于非转基因植株,且该转基因株系中的PtDRG01基因转录水平显著高于非转基因植株。这些结果表明,毛白杨PtDRG01基因具有明显的抗病功能,其高效表达能够显著提高烟草的抗TMV能力。该文通过对烟草的遗传转化与病...
[期刊] 林业科学
[作者]
王冬梅 张志毅 安新民 李善文 何承忠
根据毛果杨AP3同源基因(PTD)设计一对PCR引物,以毛白杨基因组DNA为模板,通过PCR技术分离克隆了毛白杨AP3同源基因PtAP3。分析表明该基因全长1813bp(包括引入的酶切位点),包括7个外显子和6个内含子,编码238个氨基酸。在GenBank中进行blast检索,发现其氨基酸序列与大丁草、矮牵牛、百合、玫瑰、苹果、毛果杨AP3同源基因的氨基酸序列具有52%~82%的同源性。PtAP3蛋白具有非常保守的MADS-box序列,推测其为转录因子。Southern杂交分析发现,该基因在毛白杨雄株中为双拷贝,而在雌株中则为单拷贝。为进行功能分析,构建了正反义表达载体,通过农杆菌介导转化获得...
关键词：
毛白杨 AP3同源基因 克隆 转化
[期刊] 林业科学
[作者]
李春秀 齐力旺 史胜青 汪阳东 王建华 张守攻
克隆毛白杨纤维素合酶基因(PtoCesA1),全长为3215bp,与欧洲颤杨的PtrCesA1基因的同源性为97%,具有开放的阅读框,编码区在52~2988碱基之间,为2937bp。构建PtoCesA1基因的全长正义植物表达载体为pBIPA1,经酶切和PCR鉴定确认载体构建正确。通过农杆菌介导的方法将pBIPA1表达载体转入烟草中,转基因植株的纤维细胞壁厚度和木质部厚度都有不同程度的下降,形态表征为植株明显变矮,叶片变小。
关键词：
毛白杨 纤维素合酶基因 遗传转化
[期刊] 西南农业学报
[作者]
魏环宇 童文杰 蔺忠龙 莫笑晗 张丽芳 何元胜 郑元仙 王继明 许银莲 陈小龙 钟宇 余磊 邓小鹏
【目的】探索烟草NBS-LRR类基因在烤烟(红花大金元)抗病中的分子作用机制。【方法】利用生物信息学手段,参考已知植物抗病基因的NBS-LRR类保守结构域,筛选并合成简并引物,扩增烟草中的NBS-LRR类抗病基因。【结果】获得4条具有连续阅读框和NBS结构域的抗病基因同源序列(TRGAH:MN027515、MN027516、MN027517、MN027518);BLAST X分析显示,均与已知植物抗病基因的NBS区域具有高度相似性,氨基酸相似性为64%～98.89%;聚类分析结果表明,4条TRGAHs与已知植物R基因P-loop-GLPL区域氨基酸序列相似性为29%～52%,包含了non-TIR-NBS-LRR和TIR-NBS-LRR两大类抗病基因。【结论】该研究利用分子克隆技术获得烟草抗病基因同源序列,为进一步筛选和构建烟草抗病候选基因及抗病品种的选育提供科学依据。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
郭伟 赵树堂 卢孟柱
［目的］烟草具有典型的次生维管发育过程，为了阐明烟草可用于次生维管发育相关基因功能的研究，［方法］通过高通量测序技术获得了烟草维管组织发育的相关ＭＹＢ转录因子，比对毛白杨基因组数据库，得到烟草和杨树的直系同源基因。利用烟草和毛白杨的基因表达谱，分析了ＭＹＢ基因表达量变化，并进一步采用荧光定量ＰＣＲ进行了不同组织的表达分析。［结果］分析得到４８对烟草和毛白杨的ＭＹＢ直系同源基因，可分为２３个亚组。１５对ＭＹＢ同源基因在烟草和毛白杨中的表达模式相似。［结论］可以利用烟草所建立的快速基因鉴定系统分析ＭＹＢ转录因子在维管发育过程中的调控作用。
关键词：
烟草 毛白杨 MYB 次生生长
[期刊] 林业科学
[作者]
郭伟 卢孟柱
烟草具有典型的次生维管发育过程,与毛白杨在转录组水平上进行比较,有利于通过烟草来鉴定出次生维管发育相关的关键基因。通过高通量测序技术获得烟草维管组织的转录组数据,将NAC转录因子基因通过BLASTP程序比对毛果杨基因组数据库,共得到43对NAC直系同源基因,并根据序列同源性将其分为19个亚组。利用烟草和毛白杨的基因表达谱,分析NAC基因表达量变化,找到13对表达模式相似的烟草和毛白杨的同源基因。选取8对NAC同源基因通过相对荧光定量PCR进行不同组织的表达分析,结果表明这8对NAC同源基因在烟草和毛白杨中的表达模式非常相似。研究结果为利用烟草病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术研究NAC转录因子...
关键词：
烟草 杨树 NAC 维管发育
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
于来 安新民 曹冠琳 陈仲 张志毅
毛白杨是优良的绿化和用材树种,但是毛白杨雌株在蒴果成熟时有飞絮现象,给人们的生产和生活带来诸多不便。为获得不飞絮的不育毛白杨,将利用不育结构35S-PtAP3-IR-NOS对毛白杨进行转化,经PCR验证,共获得阳性转化植株12株,通过荧光定量检测转基因植株中外源基因AP3的表达量,发现不同株系间表达量一致,差异较小,相对表达量最高的株系为内参的4.96倍,最低的株系为内参的3.02倍。转基因植株中的上游基因LFY、PI的相对表达量与野生型对照相比下降明显,而下游基因SEP2、SEP3、SEP4的相对表达量与野生型对照比较没有太大变化。这些研究结果表明:转35S-PtAP3-IR-NOS不育结构...
关键词：
PtAP3 毛白杨 遗传转化 抑制开花
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
杨宁 杨雄 李国雷 陈仲
【目的】蔗糖转化酶作为植物蔗糖代谢过程中的关键酶，在植物生长发育过程中发挥着重要作用。本研究对毛白杨碱性/中性转化酶基因PtoNIN1进行同源基因克隆、生物信息学分析、基因表达分析和遗传转化研究，以期为进一步揭示毛白杨蔗糖代谢调控过程奠定基础。【方法】基于毛果杨同源基因PtrNIN1对毛白杨碱性/中性转化酶成员PtoNIN1进行同源克隆和生物信息学分析，采用实时荧光定量PCR的方法对不同组织部位（根、茎、叶和成熟叶）和不同发育时期下雌雄花芽中PtoNIN1的基因表达量进行分析，同时构建过表达载体，并对模式植物拟南芥开展遗传转化研究。【结果】PtoNIN1的编码区长度为2 073 bp，共编码690个氨基酸，蛋白分子量为77.80 kDa，含有糖苷酶超家族100(glycosyl-hydrolase-100 superfamily)的特征结构域，类属于线粒体型的转化酶成员，在根、茎、叶以及成熟叶和雌雄花芽中均具有明显表达，且随着雌雄花芽的发育呈现先下降后保持稳定的表达趋势。拟南芥遗传转化研究表明：PtoNIN1的过表达显著增加了转基因植株莲座叶、茎及角果的鲜质量，提高了茎及角果中蔗糖的含量，同时也提高了蔗糖代谢通路其他关键基因的表达。【结论】毛白杨PtoNIN1属于线粒体型转化酶家族成员，在毛白杨各个组织部位均具有明显表达，且在雌雄花芽的发育前期具有特异地高表达，在拟南芥中过表达PtoNIN1可显著增加生物量。该研究为杨树转化酶成员功能验证提供了借鉴，为揭示杨树蔗糖代谢过程奠定了基础。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
龙萃 庞晓明 曹冠琳 刘颖 张志毅
为了建立农杆菌介导的高效毛白杨遗传转化体系,并大量获得转MdSPDS1基因的转基因毛白杨,对MdSPDS1基因导入毛白杨的遗传转化体系中关键转化因子进行了优化。获得的优化转化体系如下:叶片预培养3d后,用OD600为0.4的菌液侵染7min,再共培养3d。卡那霉素抗性芽的二次筛选中,卡那霉素的选择压分别为20和50mg/L。实验获得毛白杨卡那霉素抗性植株共43株,经PCR检测,其中9株呈阳性,占抗性植株总数的20.9%,优化转化系统的阳性植株转化率达到9.38%。本研究为下一步鉴定基因功能和转基因植株耐盐性的分析奠定了基础。
关键词：
MdSPDS1 遗传转化 毛白杨 农杆菌
[期刊] 林业科学
[作者]
郑均宝 王峰 刘群录 卜学贤 陈维伦
毛白杨转基因植株的研究郑均宝，王峰，刘群录（河北林学院保定０７１０００）卜学贤，陈维伦（中国科学院植物研究所北京１０００４４）关键词毛白杨，Ｒ１０００和Ｒ１０００（ＰＴＶＫ８５），生根能力，生长量，形态变化农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）对植物的...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
翟晓霏 张文 赵旭勉 王琼 朱元娣
植物DELLA蛋白是赤霉素信号传导途径的反向调节因子,DELLA蛋白突变体导致植株矮化。苹果MdRGL1a是编码苹果DELLA蛋白家族的基因之一,为了研究该基因的生理功能,用从‘威赛克’苹果中克隆的MdRGL1a基因,分别构建GFP瞬时表达载体和植物表达载体。通过基因枪法轰击洋葱表皮细胞,激光共聚焦显微镜下观察MdRGL1a基因的亚细胞定位。利用农杆菌EHA105介导的叶盘法转化烟草(Nicotianna tabacumL.),对转基因烟草进行PCR扩增和GUS染色法检测,观察转基因烟草的形态学性状,利用ELISA方法测定烟草的内源激素水平。结果表明,MdRGL1a-GFP融合蛋白定位在细胞核...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
章镇 孙爱君 房经贵 盛炳成
通过根癌农杆菌介导手段 ,将来自发根农杆菌的rolC基因转化到烟草 (Nicotianatabacum )植株的基因组 ,并借助GUS组织化学法 ,PCR扩增法和Southern杂交进行了鉴定证实。rolC基因改变转基因烟草植株某些性状的特点 ,如植株高度变矮、花冠变小、雄蕊变短等 ,还发现rolC基因具有延迟转基因烟草植株花期的作用
关键词：
烟草 农杆菌 rolC基因 转化
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
贾香楠 李伟 沈俊岭 欧阳昆唏 陈晓阳
利用一套基于Cre/loxP重组系统的植物多基因表达载体系统将苏云杆菌毒蛋白基因(BtCryIAc)、甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)、GA20氧化酶基因(pttGA20ox)和rolB基因构建于植物表达载体pYL1305上,命名为pYL1305BBGR。采用农杆菌介导的叶盘法转化烟草,经PCR和Southern blot检测发现,多基因已成功转入烟草基因组中;经半定量RT-PCR检测证实,4个基因均能正常表达。
[期刊] 林业科学
[作者]
杨敏生 李志兰 王颖 王进茂 梁海永
建立三倍体毛白杨叶片再生体系,用部分改造BtCry1Ac基因与慈菇蛋白酶抑制剂(API)基因构建的双抗虫基因表达载体,通过农杆菌介导法转化三倍体毛白杨无性系,在含卡那霉素50 mg·L-1的分化培养基上诱导产生不定芽的叶片占18 %,在生根培养基上对转基因植株做进一步筛选,获得50个转化再生株系。PCR检测表明:80 %的植株呈现阳性反应,部分株系进行Southern Blot检测,证明外源基因已经插入杨树基因组中。用Bt毒蛋白抗血清进行ELSA检测,结果表明:7个转基因株系都有Bt杀虫蛋白表达,表达量最高的株系约占叶总可溶性蛋白的0·016 1 %。用经分子生物学检测的28个转基因株系叶片进...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
郭斌 刘军梅 李英 陈仲 李昊 叶梅霞 王佳 安新民
利用滤纸吸附噬菌体-PCR法,从毛白杨花芽cDNA文库中分离克隆了PtPCP-like基因cDNA全长序列,测序表明克隆得到的该序列全长595bp,包含一个完整的开放阅读框,编码91个氨基酸;经BLAST分析发现,该基因包含与拟南芥花粉外被蛋白基因相似的序列,命名为PtPCP-like。采用RT-PCR技术检测PtPCP-like基因在各个组织部位的表达模式,结果显示在毛白杨的根和雄花芽中表达丰度最高,而在雌花芽部位表达丰度最低。并且构建35S∶∶PtPCP-like植物表达载体,采用农杆菌介导法将PtPCP-like基因导入烟草中,获得了一批阳性转化植株。采用qRT-PCR技术检测PtPCP...
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