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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
罗小春 梅景良 王全溪 邓红玉 温亚萍
应用组织化学与电镜技术对欧鳗脾脏和肾脏中黑色素巨噬细胞中心(MMCs)进行研究。结果表明:脾脏和肾脏中均存在MMCs,它们呈圆形、卵圆形或不规则形状;脾脏MMCs有邻血管分布的特点,而肾脏MMCs的分布无此特点;脾脏和肾脏中的MMCs均含有铁血黄素、黑色素及脂褐质3种色素,但脾脏MMCs以铁血黄素为主,肾脏以黑色素和脂褐质为主;脾脏MMCs中存在色素颗粒和细胞碎片。初步推测,欧鳗脾脏MMCs与肾脏MMCs的功能有可能是不相同的。
[期刊] 水产学报
[作者]
朱杰 张秀梅 高天翔 柳广东 杨原文
对大菱鲆早期变态发育及体表黑色素细胞的形成过程进行了研究。绘制了 1～ 6 0日龄大菱鲆鱼苗形态发育图 ,同时观察拍摄不同发育时期体表黑色素细胞的形态变化。 14～ 17℃水温时 ,大菱鲆早期变态发育约需6 0d。 1～ 14日龄主要为器官发育 ;14～ 40日龄主要为形态变化 ,2 5日龄左右开始变态 ;40～ 6 0日龄变态基本完成。变态前 ,鱼苗体表的幼体黑色素细胞对称分布 ,色素细胞密度先增加后减少。变态开始后 ,鱼体两侧体色出现不对称。有眼侧体表幼体黑色素细胞减少 ,逐渐由成体黑色素细胞替代 ,体色变深 ;无眼侧幼体黑色素细胞逐渐消褪 ,未出现成体黑色素细胞 ,体色逐渐变为白色。若有...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
彭康康 张博 鲍宝龙 龚小玲
牙鲆无眼侧色素沉着过多的黑化现象,在人工养殖群体中普遍存在,目前对于牙鲆黑化产生的机制尚不清楚。为了深入研究牙鲆黑化现象的作用机制,对黑色素细胞和鳞片的形态描述和比较分析是必要的。通过对黑化牙鲆各部位皮肤的黑色素细胞和鳞片形态学观察发现:(1)黑化牙鲆的无眼侧白色皮肤未发现黑色素细胞存在,但无眼侧黑化皮肤出现了"成体型黑色素细胞",并存在"仔鱼型黑色素细胞",无眼侧黑色素细胞的密度显著低于有眼侧正常皮肤(P<0.05);(2)黑化牙鲆的无眼侧黑化皮肤的鳞片为栉鳞,无眼侧正常皮肤的鳞片为圆鳞;黑化牙鲆有眼侧正常皮肤栉鳞栉齿数都在5栉齿以上,而无眼侧黑化部位的栉鳞栉齿数都在5栉齿以下,具有显著性差异(P<0.05);(3)黑色素细胞的密度和栉鳞栉齿数显著相关(P<0.05),黑色素细胞密度越高,栉齿数量越多;(4)采用荧光定量的方法检测了黑化牙鲆无眼侧黑化皮肤和无眼侧正常皮肤中视黄酸合成酶相关基因(RALDH1、RALDH2、RALDH3)的表达,发现RALDH1和RALDH3在无眼侧黑化部位的表达量显著高于无眼侧正常部位(P<0.05),RALDH2则无显著性差异(P<0.05)。研究结果表明牙鲆黑色素细胞形成与栉鳞发生存在相关性,与视黄酸合成酶RALDH1、RALDH2的表达有关。
关键词：
牙鲆 黑化 黑色素细胞 鳞片 视黄酸
[期刊] 中国农业科学
[作者]
聂瑞强 杨玉静 谢建山 范瑞文 高文俊 董常生
【目的】ＭＩＴＦ和β－ｃａＴｅｎＩｎ是黑色素生成通路中重要的调节基因，而Ｐａｘ６通过调控ＭＩＴＦ和β－ｃａＴｅｎＩｎ来调控黑色素细胞的黑色素生成，通过对只含有正常Ｐａｘ６ ＰａＩｒｄ ｄｏＭａＩｎ的前１０２个氨基酸的Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ）的研究，来探究Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ）是否还有生物学功能，以及Ｐａｘ６对其下游基因的作用机理。【方法】根据ｎｃＢＩ查找到的Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ）基因序列设计Ｐｃｒ引物，克隆Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ），收集所得基因片段送华大基因测序确认。后通过对Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ）和慢病毒表达载体的序列分析来筛选合适的酶切位点，通过分析选取Ｓａｌ Ｉ和ｘＢａ Ｉ作为酶切位．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
聂瑞强 杨玉静 谢建山 范瑞文 许冬梅 于秀菊 段志成 董常生
【目的】高度保守的ＰＡＸ转录因子家族在黑色素细胞的分化和黑色素的生成中起重要的作用，其家族共有的ＰＤ结构域是其与下游基因结合的主要位点，而ＰＤ结构域氨基端的ＰＡＩ亚结构域在其与下游基因的结合过程中发挥重要的作用。研究表明ＰＡＸ６在视网膜上皮黑色素细胞的分化中发挥至关重要的作用，本试验借助研究ＰＡＸ６ ＰＡＩ亚结构域的功能来对ＰＡＸ转录因子家族共有的ＰＤ结构域和ＰＡＩ亚结构域进行研究。【方法】首先通过ＰｓＩＰｒｅＤ对ＰＡＸ６ ＰＤ结构域的结构进行分析，使用ＮＣＢＩ对ＰＡＸ６ ＰＤ结构域与下游基因的结合位点进行分析，使用ＪＡｓＰＡｒ对ＭＩＴＦ、ＴＹｒ、ＴＹｒＰ１和ＴＹｒＰ２启动子中ＰＡＸ６ ＰＤ结．．．
关键词：
PAI亚结构域 Pax6 黑色素
[期刊] 中国农业科学
[作者]
马淑慧 薛霖莉 徐刚 侯亚琴 耿建军 曹靖 赫晓燕 王海东 董常生
【目的】证明miR-137通过调控MITF而间接影响小鼠黑色素细胞TYRP-1和TYRP-2的表达,从而影响黑色素的生成。【方法】通过细胞转染技术在细胞水平过量表达miR-137,对黑色素细胞中黑色素含量进行了测定,经RT-PCR以及western blot检测转染后细胞TYRP-1和TYRP-2在mRNA和蛋白水平的变化。【结果】黑色素含量明显减少,在mRNA水平,TYRP1显著降低至0.4倍,TYRP-2显著降低至0.6倍。在蛋白水平,TYRP-1显著降低至0.61倍,TYRP-2显著降低至0.73倍。【结论】过量表达miR-137会通过调控MITF而使黑色素细胞TYRP-1和TYRP-2...
[期刊] 水产学报
[作者]
殷国俊 Geert Wiegertjes LI Yue-ming Johan Schrama Johan Verreth 徐跑 周洪琪
用密度梯度离心分离鲤头肾中的巨噬细胞和嗜中性粒细胞。用RPMI细胞培养液对分离的细胞进行原代培养,在细胞培养液中加入不同浓度的黄芪水提取液来研究黄芪对鲤头肾中免疫细胞非特异性免疫应答的影响。黄芪水提取液单独使用时能刺激鲤头肾中巨噬细胞的增殖,但不能刺激巨噬细胞的氮暴发活性。用黄芪和脂多糖(LPS)混合刺激巨噬细胞和中性粒细胞时,黄芪水提取液能显著提高脂多糖刺激所产生的一氧化氮的产量。研究结果表明,黄芪不仅能刺激巨噬细胞数量的增加,而且能协同脂多糖增强头肾中免疫细胞的功能,从而对机体的非特异性免疫起调节作用。
关键词：
鲤 黄芪 巨噬细胞 免疫应答
[期刊] 中国农业科学
[作者]
贾小云 金雷皓 苗潋涓 丁娜 范瑞文 董常生
【目的】预测和验证羊驼TGF-β1是mi R-663的靶基因之一,并对mi R-663介导的TGF-β1在黑色素生成过程中的作用进行研究。【方法】利用Targetscan、RNAhybrid和RNA22在线预测mi R-663的靶基因,并对靶基因3′UTR区可能的mi R-663的作用位点进行分析。利用DNAMAN软件分析比对羊驼、人和牛等哺乳动物TGF-β1-3′UTR区的相似性。利用SacⅠ和XbaⅠ将羊驼TGF-β1基因的3′UTR区插入pmir GLO构建双荧光报告载体pmir GLO-TGF-β1-3′UTR并与mi R-663 mimic共转染293T细胞,通过测定荧光素酶活性来验...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李亚楠 赵兵令 王海东 陈天直 刘颖 常露程 董常生
【目的】探索内皮素3(EDN3)对来源于不同毛色体外培养的黑色素细胞产生黑色素作用机制及差异的影响。【方法】体外培养不同毛色皮肤来源的黑色素细胞,通过MTT法检测不同细胞在EDN3影响下的增殖率,分别提取两种细胞的总RNA和总蛋白,总RNA经反转录合成c DNA,采用实时荧光定量PCR方法检测EDN3对两种细胞内EDNRB、NRas及TYR在m RNA水平相对表达量的影响,总蛋白通过Western blot方法检测EDN3对两种细胞内EDNRB、NRas及TYR在蛋白水平的表达量是否发生变化,结果均使用S
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
谢光跃 刘桂琼 姜勋平 胡薛英 王建国
试验采用免疫组织化学染色对乌骨山羊不同被毛颜色皮肤中的黑色素细胞进行定位,再用多巴组织化学染色法对皮肤中有黑色素分泌的黑色素细胞进行定位,以HE染色法对黑色素细胞的形态进行观察。免疫组织化学染色结果显示,乌骨山羊皮肤中的黑色素细胞主要分布在表皮基底层和毛囊中;多巴组织化学染色结果显示,表皮中没有阳性反应,黑色被毛毛球部及外根鞘均有阳性反应,白色被毛毛球部及外根鞘则没有阳性反应,说明黑色被毛毛球部及外根鞘有成熟的黑色素细胞存在并能合成黑色素。HE染色结果显示,黑色被毛毛囊外毛根鞘中的黑色素细胞和周围细胞区分明显,呈空泡状和活化状态,周围有大量黑色素颗粒分布,白色被毛毛囊外根鞘黑色素细胞呈椭圆状,...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
谢光跃1 刘桂琼1 姜勋平1 胡薛英2 王建国3
试验采用免疫组织化学染色对乌骨山羊不同被毛颜色皮肤中的黑色素细胞进行定位，再用多巴组织化学染色法对皮肤中有黑色素分泌的黑色素细胞进行定位，以HE染色法对黑色素细胞的形态进行观察。免疫组织化学染色结果显示，乌骨山羊皮肤中的黑色素细胞主要分布在表皮基底层和毛囊中；多巴组织化学染色结果显示，表皮中没有阳性反应，黑色被毛毛球部及外根鞘均有阳性反应，白色被毛毛球部及外根鞘则没有阳性反应，说明黑色被毛毛球部及外根鞘有成熟的黑色素细胞存在并能合成黑色素。HE染色结果显示，黑色被毛毛囊外毛根鞘中的黑色素细胞和周围细胞区分明显，呈空泡状和活化状态，周围有大量黑色素颗粒分布，白色被毛毛囊外根鞘黑色素细胞呈椭圆状，...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张向娜 林勇 黄建安 刘仲华 梁丹丹
为研究茶叶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)、没食子儿茶素没食子酸酯(gallocatechingallate,GCG)和表儿茶素没食子酸酯(epicatechingallate,ECG)对体外培养B16小鼠黑色素瘤细胞黑色素生成及酪氨酸酶活性的影响,分别用不同浓度的EGCG、GCG、ECG和熊果苷(Arbutin,AR)处理细胞,观察效应物对细胞形态的影响,用溴化二苯四偶氮法(MTT法)测定茶叶提取物对细胞增殖率的影响,以左旋多巴(L–DOPA)
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵兵令 李亚楠 陈天直 刘颖 常露程 范瑞文 薛霖莉 王海东 董常生
【目的】探究GPNMB是否会通过调控MITF及其下游色素相关基因的表达来影响黑色素细胞中色素的生成,为进一步阐明GPNMB对黑色素细胞中色素生成的具体机制提供理论依据。【方法】首先对小鼠GPNMB核酸序列进行检索,通过对GPNMB和慢病毒表达载体序列分析来筛选出合适的酶切位点,在此选取SalⅠ和XbaⅠ作为酶切位点。并对GPNMB基因序列设计含有SalⅠ和XbaⅠ酶切位点的全长引物,克隆GPNMB基因全长序列,将含有酶切位点的GPNMB基因片段与T载体进行连接,送华大基因测序。将构建成功的T载体提取质粒,
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王宣刚 孔祥福 王欣桐 李恒顺 刘金相 王志刚 于海洋
牙鲆(Paralichthys olivaceus)是我国重要的海水增养殖鱼类，先天性免疫在其抵抗外界病原体入侵中发挥重要作用。巨噬细胞作为先天性免疫过程的重要组成部分，在鱼类免疫应答中扮演重要角色。巨噬细胞一般无法传代培养，因此，建立高效的巨噬细胞分离及原代培养技术显得尤为重要。本研究使用密度梯度离心法从牙鲆头肾中分离得到了巨噬细胞，通过差速贴壁法对获得的细胞进行纯化，后续经过优化培养条件和培养过程，采用L-15培养基(Gibco)、5%胎牛血清、1%青–链霉素、1%非必需氨基酸、30% L929细胞培养基在24℃、无CO_(2)的条件下进行培养，显微镜观察及吉姆萨染色结果显示，贴壁细胞具备巨噬细胞形态特征，使用巨噬细胞特异性基因标记mpeg1基因对细胞进行鉴定，结果显示，在分离得到的细胞中成功扩增出该基因。本研究建立了牙鲆巨噬细胞分离和培养技术，为体外研究巨噬细胞功能、深入了解硬骨鱼先天性免疫奠定了基础。
关键词：
牙鲆 巨噬细胞 原代培养 鉴定
[期刊] 华北农学报
[作者]
高泽成 梁春年 吴晓云 李明娜 张志飞 阎萍
旨在通过分子水平和组织学水平阐明牦牛不同被毛颜色的机理。采用实时荧光定量PCR技术检测皮肤组织中决定色素形成通路中的主效基因:鼠灰色基因(Agouti signaling protein gene(ASIP),Agouti)、小眼畸形相关转录因子(Microphthalmia-associated transcription factor,MITF)、黑色素皮质素受体1基因(Melanocortin 1 receptor,MC1R)和酪氨酸酶基因(Tyrosinasegene,TYR)表达量。结果表明:M
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