【目的】以樟子松根部深色有隔内生真菌（Dark Septate Endophytes, DSE）的分离鉴定和抗病促生菌株的筛选为目标，验证其对于樟子松的抗病性及生长发育的影响，为进一步研究深色有隔内生真菌-樟子松互作抗病机制打下基础。【方法】采用形态学鉴定和分子生物学技术相结合的方法，对樟子松根内深色有隔内生真菌进行了分离、鉴定，然后通过对峙培养和发酵液抑菌实验筛选抑制立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）的高效生防菌株，以及将深色有隔内生真菌接种到一年生樟子松苗上测定其对樟子松的促生作用。【结果】共分离得到24株DSE菌株，主要包括Phialocephala bamuru、Phialocephala fortinii、Alternaria tamaricis、Paraphoma chrysanthemicola、Paraphoma radicina等。对峙培养条件下A024、A002对立枯丝核菌抑制效果最好，达到74.69%和71.20%，其中A024对立枯丝核菌的相对抑制效果达到22.47%，在抑制立枯丝核菌生长的同时，自身菌落生长未受到限制。发酵液抑菌实验中，抑制效果最好的菌株包括A024、A083和A002，抑制率分别为69.41%、64.11%和54.11%，可有效抑制立枯丝核菌菌丝的生长。樟子松一年生苗接种实验，菌株A003、A024对樟子松表现出较好的促生作用，同对照相比苗高、地径和生物量分别提高21.34%和15.40%、34.14%和30.67%、70.52%和35.85%。【结论】通过筛选得出的深色有隔内生真菌菌株A024对立枯丝核菌的抑制效果显著，且菌株A024和A003显著促进樟子松苗木的生长发育。本研究可为进一步研究深色有隔内生真菌-樟子松互作抗病机制提供理论依据和实践基础。

【目的】探究干旱胁迫下深色有隔内生真菌（Dark septate endophytes, DSE）对樟子松Pinus sylvestris var. mongolica幼苗的接种效应。【方法】采用棚内盆栽试验，以2年生樟子松幼苗为材料，进行J09、J32、J35、A065和灭菌PD培养液5种接种处理，设置正常浇水（WW）、中度干旱胁迫（MW）和重度干旱胁迫（LW）3种干旱处理，观测不同处理下DSE定殖形态，测定幼苗生长指标、幼苗生理指标、根际土壤理化性质及根际土壤酶活性。【结果】随着干旱胁迫的加剧，菌丝直径变粗，横隔变短，微菌核增多；与不接种相比，在MW干旱胁迫时，DSE对樟子松的促生作用最显著，樟子松的地径、地上鲜质量、地下鲜质量、地上干质量和地下干质量最高分别提高了67.72%、36.13%、41.58%、36.13%和41.48%；与不接种相比，干旱胁迫下，接种DSE显著提高樟子松幼苗超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）的活性和谷胱甘肽（GSH）的含量，最高分别可达229.60%、67.80%、28.16%和37.83%；接种DSE可显著降低幼苗丙二醛（MDA）、可溶性糖（PSS）和脯氨酸（PRO）的含量，与未接种相比，最高分别为74.16%、105.91%和51.24%;DSE能提高土壤有机质（OM）、全氮（TN）、速效氮（AN）、全磷（TP）、速效磷（AP）、全钾（TK）和速效钾（AK）的含量，与未接种相比，最高分别增加了19.85%、40.64%、35.25%、57.92%、48.11%、55.62%和68.84%；与未接种相比，DSE还能不同程度地提高土壤过氧化氢酶（S-CAT）、蔗糖酶（S-SC）和脲酶（S-UE）活性，最高分别可达71.85%、128.64%和65.05%，特别是干旱胁迫下，接种J09和A065对寄主植物的生物量、形态和生理指标有显著的正向影响；接种J09和A065后，根际土壤酶活性和理化性质显著提高，而接种J35显著抑制了樟子松幼苗的生长指标和生理指标。【结论】DSE定殖形态的变化可能是提高寄主植物的耐旱机制之一，DSE的定殖种类显著影响寄主植物耐旱性；接种J09和A065可以通过改善植物的生长指标、提高生理指标、维持较高的根际土壤理化性质和根际土壤酶活性等方式来缓解中度干旱胁迫和重度干旱胁迫对寄主植物的不利影响。因此，J09和A065有潜力应用于樟子松微生物肥料中。

从广西8个甘蔗主产区分离得到10个DSE菌株。这些菌株的核糖体DNA的28S基因D1/D2区序列与Genbank中最相似序列构建的系统发育树结果表明:10个菌株在系统树上聚为3个大分支。其中4个菌株以68%的支持率与枝孢属Cladosporium、茎点霉属Phoma、Lophiostoma sp.和Emericella sp.聚为一大类;5个菌株在84%的支持率上与Conlarium sp.、Cercophora sp.和Schizothecium sp.聚为一大类;1个菌株与Phialocephala fortinii聚为一类,支持率为100%。10个菌株均能与甘蔗共生而无致病性,其中7个菌...

【目的】研究NaCl胁迫下深色有隔内生真菌(DSE)菌株对白皮松的生长、光合荧光参数和矿质离子含量的影响。【方法】进行NaCl胁迫和接种处理，NaCl胁迫设置4个浓度水平：0%、0.1%、0.2%、0.3%;设置接种Paraphoma radicina(Pr),Phialophora mustea(Pm),Alternaria tenuissima(At),Acrocalymma vagum(Av)和未接种对照(CK)组。NaCl胁迫处理30 d,测定侵染率、植株生物量、光合荧光参数以及K~+、Na~+含量等。【结果】Pr、Pm、At、Av菌株的侵染率分别在0.3%、0.2%、0.1%、0.2%NaCl浓度达到最高。相比于0%NaCl胁迫，0.3%NaCl胁迫下的接菌白皮松地上、地下及总生物量均显著提高。接菌处理提高了白皮松总叶绿素含量和光合参数；降低叶绿素荧光ABS/RC、DIo/RC值，提高TRo/RC、ETo/RC值。此外，在0.3%NaCl浓度下，接种Pm、At、Av菌株的白皮松地上部分Na~+含量显著降低，分别下降34.0%、26.6%、26.3%;接种Pm、Av菌株的白皮松地下部分Na~+含量显著低于未接菌白皮松，分别下降24.4%和26.6%;在0.2%NaCl浓度下，接种Pr、Pm、At、Av菌株的白皮松地下部分K~+含量分别显著增加42.9%、58.99%、56.96%、55.92%,从而提高了植株K~+/Na~+比。【结论】适度的NaCl胁迫可提高DSE侵染率，接种DSE能降低NaCl胁迫对白皮松光合的影响，调节体内K~+、Na~+离子含量，缓解白皮松受到的胁迫伤害，以维持逆境下白皮松的生长发育。

【目的】明确不同碳源及氮源对４种深色有隔内生真菌（Ｄａｒｋ ｓｅｐｔａｔｅ ｅｎＤｏｐｈｙｔｅｓ，Ｄｓｅ）生长的影响，确定４种Ｄｓｅ生长的最适碳源和氮源，为深色有隔内生真菌的研究和应用奠定基础。【方法】以沙门外瓶柄霉（ｅｘｏｐｈｉａｌａ ｓａｌｍｏｎｉｓ）、甘瓶霉（ｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａ ｍｕｓｔｅａ）、菊异茎点霉（ｐａｒａｐｈｏｍａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉｃｏｌａ）和枝状枝孢菌（ｃｌａＤｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃｌａＤｏｓｐｏｒｉｏｉＤｅｓ）４种深色有隔内生真菌为材料，在固体和液体条件下培养，研究不同碳源（葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、果糖、乳糖、可溶性淀粉和山梨醇）和氮源（磷酸氢二铵、草酸铵、．．．

采用菌物学、生物化学等方法,对樟子松根部深色有隔内生真菌(DSE)D011和D014的分类地位进行分子验证,并从菌株生长和营养代谢的角度研究了DSE对盐胁迫的响应。结果表明:1)菌株D011和D014的ITS序列分别与Phialocephala.fortinii(D011)和P.helvetica(D014)相似度达到95%,Gen Bank登录号分别为KF973 196和KF973192;2)在Na Cl和Na2SO4胁迫条件下,DSE菌株D011和D014的生长和营养代谢与盐浓度呈明显的相关性,不同盐浓度条件下差异显著(p

【目的】筛选米槁(Cinnamomum migao)根部内生促生真菌菌株,探究其对米槁幼苗生长生理的影响。【方法】从贵州省黔南布依族苗族自治州的祥乐村、坝碰村和平艾村采集米槁鲜根,分离纯化得到内生真菌,利用透明圈法对所得菌株进行促生作用研究,将所得菌株接种至蒙金娜无机磷固体培养基、解钾固体培养基及King液体培养基进行促生能力测定,筛选促生能力强的菌株;再将筛选所得菌株分别回接至米槁幼苗,以接种等量空白培养基为对照,培养180 d后测定幼苗的生长生理指标。【结果】从米槁根部分离纯化得到41属177株内生真菌,利用透明圈法筛选得到16株具透明圈的真菌;促生能力测定结果表明,球毛壳菌(Chaetomium globosum)、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、深绿木霉(Trichoderma atroviride)及深色有隔内生真菌(Acrocalymma vagum) 4株菌株具有较高促生潜力。接种试验结果表明,球毛壳菌能显著促进米槁幼苗对钾的吸收,哈茨木霉能显著促进过氧化氢酶(CAT)活性及幼苗对磷的吸收,深绿木霉能显著促进米槁幼苗苗高及地下部分的生长,深色有隔内生真菌能显著促进幼苗SOD活性。4种促生菌对米槁幼苗的促生作用不同,其中促生菌的产IAA能力与米槁幼苗的生长显著相关,溶磷、解钾能力与PPO活性呈显著负相关(P<0.05)。【结论】球毛壳菌、哈茨木霉、深绿木霉及深色有隔内生真菌对米槁幼苗生长均有促进作用,但不同菌种对米槁幼苗生长发育的作用机理不同。

以海南省白沙镇野生黄花美冠兰Eulophia flava作为实验材料,对不同生境的黄花美冠兰植株根部的内生真菌群落多样性及其对黄花美冠兰组培苗生长作用的研究。从丛生于甘蔗林和荒山中的黄花美冠兰植株新鲜营养根段中共分离出52株内生真菌,鉴定为17个属。丝核菌属(Rhizoctonia13.46%)和镰刀菌属(Fusarium13.46%)为优势属。共生培养表明Dijk&Eck(DE)培养基为黄花美冠兰组培苗和真菌的最佳共生培养基;角菌根菌属CeratorhizaH3、卷顶毛壳菌Chaetomium murorumH12、顶柱霉属AcrocylindriumH52、棘壳孢属Pyrenochaeta...

【目的】建立深色有隔内生真菌(dark septate endophyte,DSE)的遗传转化体系,获得绿色荧光蛋白(GFP)标记的DSE转化子,为研究DSE在植物根系的侵染定殖行为和侵染定殖规律奠定基础。【方法】以前期从健康枸杞根系分离的1株DSE菌株枝状枝孢菌(Cladosporium cladosporioides)S12菌株为供试材料,确定潮霉素B对其的最低抑制质量浓度,然后研究菌龄(13,15,17,19和21 h)、酶解时间(1.0,1.5,2.0,2.5,3.0和3.5 h)、崩溃酶质量浓度(10,15,20,25,30和35 mg/mL)和渗透压稳定剂种类(NaCl、KCl、CaCl_2和MgSO_4)对S12菌株原生质体制备的影响。采用聚乙二醇(PEG)介导原生质体转化法将PDL2质粒(含hph和gfp基因)转入S12菌株,对所获转化子进行表型、GFP荧光、PCR及拮抗活性(以尖孢镰刀菌枸杞专化型Fusarium oxysporum f. sp. Lycium barbarum LR-1菌株为靶标菌)检测,筛选与野生型S12菌株无明显差异且带有GFP标记的转化子。【结果】S12菌株在YPD液体培养基中培养17 h,以0.7 mol/L NaCl为稳渗剂,用30 mg/m L的崩溃酶酶解2.5 h,原生质体制备数量最多,为4.53×10~6 mL~(-1)。通过PEG介导,将PDL2质粒(含hph和gfp基因)转入S12菌株,可得47株转化子,转化效率2.35株/μg,从中筛选出10株生长速度和产孢量与野生型S12菌株无明显差异的转化子。荧光观察、PCR和拮抗活性检测结果表明,外源基因已成功整合到S12菌株中,成功建立了S12菌株的遗传转化体系,并获得了GFP标记菌株,有6株转化子对LR-1菌株的抑菌率与野生型S12菌株无明显差异。【结论】成功建立了遗传稳定性良好的S12菌株遗传转化体系,筛选出了6株抑菌效果与野生型菌株相当的转化子。

从健康杨树植株的叶(芽)、皮、枝中分离获得154株内生真菌,经形态观察分类鉴定归属于3个目、5个科、13个属中。利用两点对峙培养拮抗试验、孢子萌发试验和人工接种试验,从中筛选杨树烂皮病病原菌的拮抗菌。试验结果表明所获内生真菌(4属)菌株对病原菌菌丝生长和孢子萌发均存在不同程度的抑制作用,其中,青霉属真菌(Penicilliumsp.)的菌株拮抗效果表现最明显。青霉菌可迅速对病原菌菌落包围、覆盖,从而使植物病原菌生长受到抑制,孢子萌发试验中,3 d的培养滤液就可对病原菌孢子萌发产生抑制作用,表现出一定的生防潜能。

【目的】研究根际益生菌互作对植物促生及土壤微生态环境的影响,为开发植物促生抗逆作用的生物菌肥提供理论基础。【方法】在盆栽条件下,对樟子松苗木接种假单胞杆菌Pseudomonas fluorescens1-42和褐环乳牛肝菌Suillus luteus N94,采用高通量测序技术、比色法、火焰光度计法等测定1年生樟子松幼苗生长指标、土壤理化指标和根际微生物多样性指标并研究其变化规律。【结果】1)1-42和N94处理组幼苗生物量同对照组(CK)相比显著增加(P

兰科植物的生长发育离不开其根部内生真菌的共生。为探明羊耳蒜（Ｌｉｐａｒｉｓ ｊａｐｏｎｉｃａ）根部内生真菌种类和多样性规律，选取东北地区７个不同地理种群的羊耳蒜植株进行根部内生真菌的分离、培养，根据形态特征和ｉＴｓ序列进行种类鉴定及其多样性与环境因子的相关性分析。共分离到内生真菌９个类群２０１个菌株，其中大部分菌株属于ＴｕＬａｓｎｅＬＬａ和ｓｏｒｄａｒｉｏｍｙｃｅＴｅｓ真菌，在所调查的地理种群中均有分布，而其余７类真菌为稀有属。不同地理种群羊耳蒜根部内生真菌的多样性无显著差异，但ｃＢｓ种群分离得到的真菌类群较少。各地理种群根部内生真菌的类群数量和多样性均与羊耳蒜株高呈显著正相关，推测内生真菌种．．．

美花兰(Cymbidium insigne)为大花蕙兰(Hybrid cymbidium)杂交育种的主要原生种之一,具有极为重要的保护和开发利用价值。内生真菌在兰科植物整个生活史中起着重要的作用。为了解美花兰内生真菌菌群种类,本研究采用组织分离法首次对海南岛五指山地区的野生美花兰根部的内生真菌进行分离,并根据所分离真菌的形态和ITS序列进行鉴定。共分离到内生真菌132株,确定为14属,隶属于半知菌类的Pestalotiopsis 5株,Aspergillus 16株,Penicillium 27株,Trichoderma 13株,Cylindrocarpon 14株,Curvularia 4株...

从能源植物麻疯树的根部凸起部分韧皮部、木质部中分离到内生真菌42株,应用PCR技术对分离菌rDNA的内转录间隔区(ITS区)基因克隆后测序,并将所测序列提交到欧洲分子生物学实验室核酸数据库(European Molecular Biology Laboratory Gen-bank),通过Blast程序将该序列与数据库已有的序列进行分析比较。结果表明,42个菌株分别与Genbank中的拟盘多毛孢菌属Pestalotiopsis、头孢霉属Cephalosporium、枝顶霉孢霉属Acremonium、镰孢霉菌Fusarium、木霉属Trichoderma、毛霉属Mucor、青霉属Penicill...

【目的】分析药用植物肿节风的内生真菌多样性,筛选具有较强抗菌活性的菌株,为寻找新的抗菌药物资源打下基础。【方法】采用平板对峙法从肿节风的不同组织中分离出具有抗菌活性的内生真菌,结合形态特征和ITS序列对其进行种类鉴定,筛选出抗菌活性强的内生真菌菌株。【结果】从肿节风的不同组织中分离、纯化得到111株内生真菌,选择42株不同形态类型的菌株进行分子鉴定,分属于9目20属28种。筛选出抗菌活性强的RJ-1和JJ-1菌株[分别鉴定为橡胶生拟茎点霉菌(Phomopsis heveicola)和新壳梭孢菌(Neofusicoccum parvum)],对15种病原真菌具有较强的抑制作用,其中对三七灰霉病菌(Botrytis sp.)、三七根腐病菌(Fusarium solani)、三七炭疽病菌(Colltetorrichum gloeosporioides)、香蕉炭疽病菌(Colltetorrichum sp.)、艾纳香褐斑病菌(Phoma sp.)、苦玄参叶斑病菌(Alternaria sp.)和肿节风炭疽病菌(Colletotrichum dematium)等7种病原菌的抑制率均在80%以上,具有强的抑菌广谱性。【结论】肿节风存在丰富的内生真菌,其中的RJ-1和JJ-1菌株对15种病原真菌具有较强的抑制作用,可作为抗菌活性菌株开展深入研究。