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[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
颜论 陈国建 陈明飞 游经番 彭姣姣 程春红
采用荧光定量PCR技术分析BjuFIP在不同非生物逆境胁迫下的表达模式.通过无缝克隆技术将BjuFIP的CDS序列构建到原核表达载体pGEX4T-1上，测序正确后转化大肠杆菌表达菌株BL21,对BjuFIP-GST蛋白进行体外诱导表达纯化.结果表明，BjuFIP-1显著受低温(4℃)、高温(37℃)和NaCl的诱导表达，BjuFIP-2显著受低温(4℃)、高温(37℃)、ABA、NaCl以及Mannitol的诱导表达，说明BjuFIP在调控榨菜响应非生物逆境胁迫过程中具有重要作用.SDS-PAGE电泳检测结果显示，在16、25和37℃以及1 mmol·L~(-1) IPTG诱导条件下，重组菌株均能够表达出分子质量约为55 ku的BjuFIP-GST融合蛋白，并且16℃诱导条件下，BjuFIP-GST蛋白较多以可溶性蛋白的形式存在，通过Glutathione Beads亲和层析柱纯化后，获得了大量纯度较好的BjuFIP-GST融合蛋白.BjuFIP显著受非生物逆境胁迫的诱导表达，在调控榨菜响应非生物逆境胁迫过程中具有重要作用，并且获得了大量纯度较高的BjuFIP-1-GST和BjuFIP-2-GST融合蛋白，为后期进一步探究BjuFIP在调控榨菜抗逆过程中的功能提供依据.
[期刊] 中国农业科学
[作者]
宣宁 柳絮 张华 陈高 刘国霞 边斐 姚方印
【目的】ZmAN14是玉米A20/AN1型锌指蛋白基因家族成员,该家族在水稻中广泛参与非生物胁迫应答。通过分析玉米旱21(H21)及转ZmAN14烟草在非生物胁迫下的表达情况,为玉米ZmAN14及其家族的功能和分子机制的全面解析提供新信息。【方法】通过对ZmAN14进行序列分析,发现其属于玉米A20/AN1型锌指蛋白基因家族。以玉米自交系H21为研究材料,在三叶期时对其进行非生物胁迫和ABA诱导处理,0、1、3、6、12和24 h时取整株样品,同时在玉米不同生长期取根、茎、叶、胚芽鞘、雌蕊、雄蕊、花丝、苞叶等不同组织样品,利用实时荧光定量PCR方法对ZmAN14的组织表达谱和非生物胁迫及ABA...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
周姗 李思达 董恒 詹亚光 曾凡锁
血红素加氧酶（ｈｅｍｅ ｏｘｙｇｅｎａｓｅ，ｈｏ）是一种普遍存在的敏感的和高活性的血红素分解代谢过程中的限速酶。本文揭示了白桦Ｂｐ ｈｏ在非生物胁迫及信号诱导调控的表达特征，为该基因在白桦中代谢调控功能的研究奠定基础。通过前期研究获得了白桦ｈｏ基因，命名为Ｂｐ ｈｏ，应用生物信息学软件分析了白桦Ｂｐ ｈｏ基因的分子结构特征，利用重金属镉（Ｃｄ）、盐（ｎａ Ｃｌ）以及４℃低温进行非生物胁迫处理，利用硝普钠（ｓｎｐ）和水杨酸（ｓａ）进行信号诱导，分析Ｂｐ ｈｏ的表达特征。生物信息学分析表明该基因全长８５５ Ｂｐ，含有完整的开放读码框，编码２８４个氨基酸（ｇｅｎｅＢａｎｋ登录号：ｋＪ１９７３３５）。．．．
[期刊] 草业科学
[作者]
马茜茜 张欢 朱杰 金献垚 陈雪松 陈涛 邬晓 王小珊 黄琳凯
冷季型牧草鸭茅(Dactylis glomerata)在生长过程中会受到各种逆境胁迫的影响。bZIP转录因子参与多种生物学过程，尤其在植物抵御生物和非生物胁迫过程中发挥关键作用。本研究利用生物信息学和实时荧光定量(qRTPCR)的方法，对鸭茅bZIP基因家族进行全基因组鉴定和分析并探究其表达模式。共鉴定出103个DgbZIP基因并将其划分为11个亚家族。对于同一亚族内成员而言，它们的保守序列和基因结构具有一定的相似性，并预测到许多与胁迫密切联系的顺式作用元件。研究结果表明，在热和干旱胁迫处理后A、C、S亚族成员较强烈地响应胁迫并参与表达调控。本研究为进一步揭示鸭茅bZIP基因响应逆境胁迫的分子机制提供了参考。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
孔维龙 于坤 但乃震 杨绍宗 包满珠 黄向荣 傅小鹏
【目的】WRKY转录因子是一类植物响应生物、非生物胁迫,对生长发育都起重要调控作用的转录因子。在甜菜全基因组信息分析的基础上,鉴定WRKY家族基因(Bv WRKYs),解析其组织特异性及盐、热胁迫下的表达情况,为该类基因的功能研究提供参考,为观赏甜菜和石竹目其他观赏植物的基因工程打下基础。【方法】以75条拟南芥WRKY蛋白为参考,根据WRKY保守蛋白序列(PF03106)利用hmm和BLAST同源性搜索对甜菜WRKY家族基因进行鉴定。利用Map Inspect、GSDS2.0、MEGA5.0、DNAMAN
[期刊] 西南农业学报
[作者]
卿冬进 邓国富 戴高兴 潘英华 陆春菊 李经成 周维永 陈韦韦 梁海福 陈荣林
【目的】在大肠杆菌中过表达、纯化水稻冷胁迫响应蛋白OsCML16,同时制备OsCML16蛋白抗体提供抗原，为采用该抗体研究水稻OsCML16蛋白的生物学功能提供参考依据。【方法】采用TMHMM 2.0在线分析软件对目的蛋白OsCML16进行跨膜区分析，利用高保真PCR扩增目的基因片段，以基因重组方法构建原核表达载体pET30a-OsCML16,并将重组质粒转入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中；通过IPTG诱导OsCML16蛋白表达，然后采用亲和层析方法纯化获得目的蛋白，最后运用质谱验证法分析验证蛋白序列的真实性。【结果】通过对OsCML16蛋白跨膜区分析，发现该蛋白不包含跨膜结构，适合外源表达全长蛋白。将OsCML16基因链接至pET30a载体能成功构建原核表达载体pET30a-OsCML16,目的基因序列无突变位点，可用于表达目标蛋白。外源表达的OsCML16蛋白经过SDS-PAGE电泳分析，结果表明，OsCML16蛋白在28℃下可诱导表达，采用亲和层析方法纯化融合蛋白His_6-OsCML16-His_6,能成功获得分子量约30 kD的目的蛋白。对纯化的蛋白进行质谱验证分析，结果鉴定到3条多肽属于OsCML16蛋白，表明外源表达的蛋白即为OsCML16蛋白。【结论】采用原核表达方法将水稻冷胁迫响应基因OsCML16在大肠杆菌中表达，运用亲和层析技术根据融合蛋白携带组氨酸标签纯化获得融合表达蛋白His_6-OsCML16-His_6,并以蛋白质谱技术验证该蛋白的序列完全正确，后续可将水稻OsCML16蛋白用于抗体制备及蛋白功能研究。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李培培 张皛 潘小玫 王金生 宋从凤
TA3-13是小麦中一个冷胁迫蛋白WCSP1编码基因的5′端截短的DNA序列。它与水稻白叶枯病菌Harpin蛋白的编码基因hpa1_(X∞)(又称hrf1,hrfA)具有59%的一致性。为了研究TA3-13蛋白的生物学性状和功能及其与Harpin蛋白的关系,本研究以pET30a(+)为载体,构建了His融合表达重组体,转化大肠杆菌后在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)和阿拉伯糖的诱导下获得了融合蛋白的表达。利用镍柱对融合蛋白进行了纯化研究,结果表明:融合蛋白在200 mmol·L~(-1)咪唑浓度下能够被有效地洗脱下来,电泳显示具有单一条带。烟草花叶病毒(TMV)接种试验显示:纯化的TA...
[期刊] 水产学报
[作者]
梅高尚 纪德华 李兵 徐燕 陈昌生 谢潮添
坛紫菜栽培中经常遭遇高温胁迫危害而产生烂菜现象,为研究坛紫菜在高温胁迫条件下的分子应答机制,分离并克隆高温胁迫应答的相关基因,应用引物退火控制(ACP)技术对耐高温型纯系Z-61叶状体在高温胁迫条件下的差异表达基因进行筛选时,获得一条在高温胁迫条件下表达水平显著降低的基因片段,通过5′-RACE技术获得了它的全长,命名为Phrps15a(GenBank登录号:JN991055.1)。该基因序列全长676 bp,包含一个390 bp的开放阅读框编码130个氨基酸的核糖体S15a蛋白(PhRPS15a),蛋白分子式为C664H1066N188O180S7,由3条螺旋、7个片层及8个环状连接组成,与...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐晓寒 叶小丽 邢安琪 武子辰 孙怡 朱江媛 王艮梅 王玉花
[目的]本文旨在验证茶树小G蛋白基因CsRAC5在非生物胁迫下的功能，并进一步探索茶树RAC/ROP蛋白的生物学功能。[方法]以茶树品种‘龙井长叶’为材料，研究盐胁迫、干旱处理和脱落酸(ABA)处理对茶叶中CsRAC5表达量的影响。通过农杆菌介导浸染法获得纯合的转基因拟南芥，并通过对盐胁迫、干旱处理和ABA处理下转基因拟南芥的萌发率、根长和生理生化等指标的测定，验证CsRAC5在非生物胁迫下的功能。[结果]盐胁迫、干旱处理和ABA处理均使茶树叶片中CsRAC5表达量显著下降；转基因拟南芥在盐胁迫和ABA处理下的萌发率、成活率及根长明显降低；干旱处理延缓了转基因拟南芥(OE6和OE7)的萌发时间，但OE6、OE7的7 d萌发率明显高于野生型拟南芥，且3个拟南芥株系的成活率和根长无显著差异。盐胁迫下转基因拟南芥丙二醛含量显著高于野生型拟南芥，但其可溶性糖含量和叶绿素含量显著低于野生型。[结论]转基因拟南芥对盐胁迫和ABA处理的敏感性明显提高，且呈现梯度依赖效应；CsRAC5基因降低了转基因拟南芥在干旱胁迫初期的抗旱能力。
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
蔡琼 丁贵杰 文晓鹏
克隆马尾松Ｐｉｎｕｓ ｍａｓｓｏｎｉａｎａ水通道蛋白（ａＱＰ），并对其生物信息学与干旱胁迫表达模式进行分析。采用逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）以及互补脱氧核糖核酸（Ｃ Ｄｎａ）末端快速扩增（ＲａＣＥ）方法克隆马尾松水通道蛋白基因。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Ｑ ＲＴ－ＰＣＲ）分析其在干旱胁迫下的响应模式。结果克隆到一个马尾松水通道蛋白基因，命名为Ｐｍ ＰｉＰ１（ＧＥｎ Ｂａｎｋ登录号为ｋＦ５８２０３８）。此基因Ｃ Ｄｎａ全长序列为１ ３０１ ＢＰ，包括８６７ ＢＰ的完整开放阅读框，９９ ＢＰ的５′末端非翻译区和３３５ ＢＰ的３′末端非翻译区。编码２８８个氨基酸残基，分子量为３０．８６．．．
关键词：
植物学 马尾松 水通道蛋白 克隆 表达
[期刊] 林业科学研究
[作者]
刘魏魏 杨璞 陈晓鸣
白蜡虫对低温的高度耐受性对其生存、繁殖及白蜡生产都至关重要。为探讨低温胁迫对白蜡虫hsp表达的影响,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR),对白蜡虫二龄雄虫在低温胁迫下7个不同的hsps(hsp21.5,hsp21.7,hsp40,hsp60,hsp70,hsc70,hsp90)的基因表达情况进行了检测。结果发现,除hsc70外,其余hsps均能被低温不同程度地诱导,其中hsp70、hsp21.7和hsp90的上调量十分显著。说明多数hsps都与白蜡虫幼虫应对低温胁迫相关。
关键词：
hsp 白蜡虫 低温胁迫 荧光定量
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
贾若南 林枫 许强华
为研究斑马鱼核糖体蛋白应对低氧胁迫的生物学功能，对低氧胁迫和常氧条件下斑马鱼（Danio rerio）鳃组织进行转录组分析，利用高通量测序检测了低氧胁迫与常氧条件下斑马鱼鳃转录组中核糖体蛋白家族基因的表达差异。结果表明：在两个不同浓度的低氧胁迫下，斑马鱼鳃组织中60个核糖体蛋白基因的表达量显著上调。其中大亚基核糖体蛋白基因35个，小亚基核糖体蛋白基因25个。在低氧胁迫下斑马鱼鳃中显著差异表达基因GO富集的前15条通路中，均包括核糖体蛋白基因，且其中的5条通路与核糖体蛋白组装合成相关。在富集到“translation”GO通路中，富集到44个核糖体蛋白基因。另外，利用前期筛选出的低氧条件下斑马鱼鳃中显著低表达的2个miRNAs，针对低氧下表达量显著上调的60个核糖体蛋白基因进行靶基因预测，结果表明：斑马鱼miR-455-3p可以同时靶向核糖体蛋白基因rpl13和rplp1来调控斑马鱼对低氧环境的适应。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
祁建民 姜海青 陈美霞 徐建堂 马红勃 方平平 林荔辉 陶爱芬 陈伟
【目的】研究耐旱性高的红麻品种在干旱胁迫条件下的蛋白质表达,揭示红麻耐旱性的生理机制。【方法】以鉴定出的耐旱性红麻品种GA42为材料,在苗期(五叶期)设置正常供水与控水比较试验,运用双向电泳分析红麻在干旱胁迫和正常供水条件下叶片蛋白质组的动态变化。【结果】对2-DE图谱分析后发现,在干旱胁迫下出现65个差异表达蛋白质点,选用表达量明显上调的9个蛋白质点,通过MALDI-TOF-TOF MS分析和数据库检索,鉴定出6个差异表达蛋白的功能,分别是2个核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶(Rubisco)或其大亚基(所有植物进行光合碳同化的关键酶)、1个Rubisco活化酶(广泛存在于植物中调节Rubisc...
关键词：
红麻 干旱胁迫 差异蛋白 双向电泳
[期刊] 中国农业科学
[作者]
许园园 蔺经 李晓刚 常有宏
【目的】最近在植物中发现了一类Ca2+传感蛋白——类钙调磷酸酶B亚基蛋白CBL(calcineurin B-likeproteins),CBL及其靶蛋白CIPK(CBL-interacting protein kinase)构成CBL/CIPK信号网络系统,在植物干旱、盐渍、低温等逆境胁迫应答中起重要作用。鉴定梨基因组中CBL家族基因成员,对其基因进化、结构与表达特征进行分析,为植物CBL基因功能分析与利用提供依据。【方法】通过生物信息学手段,结合梨基因组注释信息,鉴定梨CBL家族成员序列信息;利用MEGA6.0程序进行多序列比对、分类并构建系统进化树;利用per1程序、GSDS工具以及Clu...
[期刊] 华北农学报
[作者]
苏丽艳
为解析番茄乙烯受体基因SlETR6在非生物胁迫过程中的功能。以番茄为材料,克隆了番茄SlETR6基因,利用MEGA 5. 0软件对SlETR6基因编码的蛋白进行了聚类分析,并利用实时荧光定量PCR分析了SlETR6基因在番茄根、叶、花、果实不同发育时期的组织表达情况及对其在高盐、高温(40℃)、低温(4℃)、干旱胁迫条件下的表达模式。结果表明,SlETR6基因开放阅读框(Open reading frame,ORF)为2 265 bp,编码754个氨基酸,蛋白质分子质量为85. 05 ku,等电点为7. 28,与马铃薯St ETR-like蛋白的同源性最高;启动子分析显示,SlETR6基因含有热胁迫、干旱胁迫、低氧胁迫、光响应、乙烯、水杨酸及赤霉素应答等相关的顺式作用元件。实时荧光定量PCR分析表明,SlETR6在番茄不同组织中均有表达,且在花和转色期果实中有显著高表达。高盐胁迫6 h后,SlETR6基因呈现上调表达,12 h后达到峰值,而后回复正常表达水平;高温胁迫后,SlETR6基因表达量有明显的上升趋势;干旱胁迫早期SlETR6基因应答强烈,在胁迫处理1 h后表达量达到峰值。因此,推测SlETR6基因可能在番茄适应高盐、高温、干旱等逆境胁迫过程中发挥重要作用,可能参与番茄生长发育过程中的逆境调控。为番茄抗逆研究提供了新的候选基因资源。
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