植物病原丝状真菌G蛋白偶联受体（GPCR）在实现外界信号感知和传递过程中发挥着重要作用。基于GPCR蛋白所具有的典型7个跨膜保守结构域及非典型保守结构域，通过总结前人已报道的候选GPCR的同源比对方法，对其跨膜结构域数量预测方法及跨膜结构蛋白数据库进行对比，明确TOPCONS是目前开展GPCR跨膜结构域预测的较好方法。选择NCBI数据库中223个不同真菌的GPCR蛋白序列开展TOPCONS和TMHMM对比分析，结果显示，2种软件对GPCR的跨膜结构域数量预测结果不尽相同，TOPCONS预测结果的准确度较高；进一步对上述GPCR蛋白序列的氨基酸数目进行分析，明确具有7个跨膜结构域的GPCR蛋白氨基酸数目为200～1 406个。该研究可为进一步开展植物病原丝状真菌GPCR蛋白的结构预测及其功能研究提供参考。

[目的]利用灰飞虱Laodelphax striatellus基因组和转录组数据鉴定灰飞虱G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptor， GPCR）基因。[方法]构建灰飞虱基因组和转录组本地数据库，以黑腹果蝇Drosophila melanogaster和豌豆蚜Acyrthosiphon pisum的GPCR基因为参照序列进行本地BLAST，去除冗余和不含有多跨膜螺旋结构的序列后获得灰飞虱GPCR基因；利用NCBI CD-Search对灰飞虱GPCR序列进行跨膜结构域分析，利用Clustal W进行序列比对，用MEGA 6软件构建灰飞虱GPCR系统发育树。[结果]鉴定了114个灰飞虱GPCR基因，它们分属于A、B、C和D这4个家族。灰飞虱A家族的GPCR数量最多，尤其是其中的神经肽和蛋白激素受体亚家族的基因数量达55个。与黑腹果蝇的GPCR相比，灰飞虱GPCR不仅种类丰富，而且有基因重复和可能的缺失现象。[结论]灰飞虱具有较为全面的GPCR系统，本研究完善了灰飞虱GPCR基因的信息，为进一步研究灰飞虱GPCR的功能奠定了基础。

为了阐明紫贻贝幼体附着变态的内在机理,在天然诱导物-微生物膜的诱导参照下,通过使用G蛋白偶联受体(GPCRs)和信号通路的活化剂与抑制剂初步研究了其对该物种幼体附着变态过程的调控作用。结果显示,GPCRs活化剂Gpp[NH]p与抑制剂GDP-β-S没有诱导和抑制活性,表明可能非GPCRs的其他细胞反应过程参与了紫贻贝幼体的附着变态。腺苷酸环化酶/环腺苷酸(AC/cAMP)信号通路相关、理论上具有诱导活性的6种神经性试剂,除了磷酸二脂酶抑制剂(IBMX)外,其他在10-8~10-3M浓度下48、72 h后都没有活性,并且高浓度下表现出较高的神经性药物毒性。IBMX仅在10-4M浓度72 h后呈现...

【目的】通过对小麦3种不同营养型病原真菌的候选GPCR蛋白进行找寻及性质对比分析，为进一步找寻新型农药作用靶标奠定理论基础。【方法】选择全基因组序列已经公布的小麦3种营养型病原真菌，基于GPCR蛋白所具有的7重跨膜结构典型特征，利用3种蛋白跨膜在线预测程序（TOPCONS、TMHMM、Philius）对上述病原真菌的候选GPCR蛋白开展找寻，以及候选GPCR蛋白序列长度、理论等电点、不稳定系数、最强亲（疏）水性残基等特征和遗传关系进行对比分析。【结果】小麦白粉病菌、叶枯病菌、叶斑病菌中分别含有候选GPCR蛋白11、32、69个，蛋白序列平均长度为396 aa。蛋白的理论等电点平均值在8.78左右、不稳定系数在40左右，亲水性在-2.70左右，疏水性在3.20左右，而最强亲（疏）水性氨基酸残基分布不一致。上述112个候选GPCR蛋白的遗传关系聚类为三大类，分别具有71、36、5个蛋白。【结论】小麦不同营养型病原真菌的候选GPCR蛋白数量以活体型真菌数量最少、死体型真菌数量最多，半活体型真菌介于两者之间。不同候选GPCR蛋白在理论等电点、不稳定系数等理化性质及遗传关系等方面具有一定同质性特征，然而最强亲（疏）水性氨基酸残基相对具有较大差异。

【目的】建立一种简单方便的半抗原-载体蛋白偶联物电泳鉴定方法。【方法】选用SDS-PAGE、非变性琼脂糖凝胶电泳、高效毛细管区带电泳3种方法对载体蛋白、偶联剂变性的载体蛋白、半抗原-载体蛋白进行比较鉴定,同时与光谱法结果比较。【结果】对分子量差异较小的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物,SDS-PAGE不能有效分辨;但偶联前后载体电荷有变化时,非变性琼脂糖凝胶电泳却能有效分辨游离的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物,相对SDS-PAGE表现出更高的分辨灵敏度;毛细管区带电泳能高效分辨载体和半抗原-载体蛋白偶联物,结果直观,但需较贵重的专用仪器。琼脂糖电泳和毛细管电泳法与可见-紫外光谱法鉴定结果一致...

旨在建立丝状真菌蛋白质组的分析方法,对丝状真菌蛋质白学进行初步探索。使用液氮冷冻研磨、蜗牛酶消化、尿素裂解、硫酸铵沉淀预分级和二维液相色谱分离相结合的蛋白质组研究方法进行丝状真菌的蛋白质组分析;建立的丝状真菌蛋白提取分级分离方法有效的提高了蛋白的分离效率和提取数量,可以应用在丝状真菌蛋白质组研究中,共鉴定了396个蛋白,包括了参与各种细胞生理过程的蛋白,为进一步开展丝状真菌蛋白质组的研究打下了良好的基础。研究中建立的蜗牛酶消化破壁、尿素裂解的蛋白提取方法,可以显著提高丝状真菌胞浆蛋白的鉴定数量,特别是对于那些功能重要但丰度低的蛋白,适合于丝状真菌蛋白质组的研究。

【目的】克隆绿盲蝽(Apolygus lucorum)G蛋白偶联受体激酶2基因(AlGRK2)cDNA序列,明确其时空表达谱,阐明外源蜕皮激素(20E)对AlGRK2表达的影响,分析AlGRK2在绿盲蝽生长发育中的作用,为进一步研究其在蜕皮激素信号转导通路中的功能打下基础。【方法】RACE法克隆获得AlGRK2全长,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析不同日龄绿盲蝽及雌成虫不同组织中AlGRK2的表达谱,分析外源20E诱导及RNAi处理后,AlGRK2 mRNA表达的应答反应及对绿盲蝽生长发育主要参数(发育历期、若虫体重及成虫羽化率)的影响。【结果】AlGRK2 cDNA序列全长2 715 bp,开放阅读框2 106 bp,编码701个氨基酸,ExPASy预测其蛋白分子量为80.2 kD,理论等电点为6.56;蛋白结构分析显示AlGRK2包含4个结构域,即G蛋白信号调节区(RGS,54—175 aa)、丝氨酸/苏氨酸激酶结构域(S-TKc,191—454 aa)、丝氨酸/苏氨酸型蛋白激酶的伸展部分(S-TK-X,455—534 aa)和PH结构域(PH,558—655 aa),其中PH结构域是GRK2蛋白的典型结构域;系统发育分析结果表明,绿盲蝽GRK2与茶翅蝽GRK2亲缘关系最近;AlGRK2在绿盲蝽1—16日龄虫体内均有表达,mRNA表达量呈现出波动式下降的模式,在绿盲蝽初始龄期的表达量较高,而在末龄期的表达量显著下降;AlGRK2在绿盲蝽雌成虫卵巢和脂肪体中高表达,在胸与足中的表达量较低;外源20E处理后,AlGRK2在绿盲蝽1日龄和3日龄表达量显著下调,AlGRK2在雌成虫各组织中均表达上调,在卵巢及脂肪体中上调幅度最大,相反的是,20E信号通路中PLC抑制剂U73122处理的AlGRK2表达量下调;绿盲蝽若虫发育历期、末龄若虫体重和成虫羽化率均显著下降,相反的是,U73122处理组若虫期的发育历期显著延长;此外,与注射ds GFP处理组相比,注射ds AlGRK2处理后绿盲蝽的AlGRK2表达水平显著下降,若虫死亡率及发育历期显著增加,而成虫羽化率和5龄若虫体重均显著下降。【结论】AlGRK2在绿盲蝽体内的表达谱显示出发育阶段特异性和组织特异性;外源20E抑制剂及RNAi处理后,均可抑制AlGRK2的表达,同时还可对绿盲蝽生长发育产生不利影响,表现为延缓绿盲蝽的发育进度、降低5龄若虫体重及成虫羽化率。

该文从核桃种子中分离纯化具有抑菌活性的胰蛋白酶抑制剂，分析其抑菌活性，并过测量其抑菌圈的大小来确定其抑菌能力的强弱。实验选用湖北省武汉市８５１８核桃为原料，采用Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ－ＤｅＡｅ５２阴离子交换层析、ｓｅｐｈＡｒｏｓｅ４Ｂ－Ｔｒｙｐｓｉｎ亲和层析和Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ离心超滤等分离纯化方法，从核桃种子中分离出一种胰蛋白酶抑制剂，命名为ＷＴｉ。测得纯化的核桃胰蛋白酶抑制剂的抑制率为０．３，对白腐病病原真菌（ｓＣｌｅｒｏＴｉｕＭ ＣｅｐｉｖｏｒｕＭ Ｂｅｒｋ）和叶斑病病原真菌（ＡｌＴｅｒｎＡｒｉＡ ＡｌＴｅｒｎＡｒｉＡ）有一定的抑制作用，并且随着ＷＴｉ蛋白浓度的增加对病原真菌生长抑制愈加明显．．．

The regulation of energetic efficiency through the physiological uncoupling of oxidative phosphorylation may be a common strategy developed early in evolution.Uncoupling protein families are transporters in mitochondrial inner membrane.There are five UCP homologs in mammalian genome.UCP1-3 are close...

采用十二烷基肌氨酸钠法提取哈氏弧菌(Vibrio harveyi)SpGY020601株的外膜蛋白(OMPC),采用酚水法提取溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)EpGS021001株的脂多糖(LPS)。通过碳化二亚铵(EDC)介导的缩合反应,将哈氏弧菌的OMPC与溶藻弧菌的LPS偶联。OMPC-LPS偶联物、未偶联的哈氏弧菌OMPC、溶藻弧菌LPS、哈氏弧菌OMPC和溶藻弧菌LPS的简单混合物以及生理盐水按相同程序免疫卵形鲳(Trachinotus cvatus)。检测血清溶菌酶活性、血清抗体微量凝集反应结果显示,卵型鲳经OMPC-LPS偶联物、OMPC、LPS以及二者的简单...

植物NLR(nucleotide binding leucine-rich repeat)蛋白是一类具有核苷酸结合域并富含亮氨酸重复序列的胞内免疫受体，通过识别进入细胞内的病原生物效应蛋白，激活植物免疫反应。近年来，植物NLR免疫受体蛋白的三维结构解析与生物学功能研究取得了诸多进展，从分子水平上揭示了植物NLR受体对病原生物效应蛋白的识别机制、受体多聚体化以及免疫信号激活机制，同时也为植物NLR免疫受体的人工设计和改造提供了重要的结构基础。本文综述了近十年植物NLR免疫受体蛋白的结构生物学研究进展，并探讨了未来该领域亟待回答的科学问题和面临的挑战。

油体是植物种子贮脂的亚细胞颗粒,作为植物体中最小的细胞器贮存脂类(主要为三酰甘油),为随后的生命活动及活跃的代谢过程提供能量。油体结合蛋白是依附于油体表面的一类蛋白质,包括油质蛋白、油体钙蛋白、油体固醇蛋白-A和油体固醇蛋白-B。本文综述了植物油体的亚细胞结构、化学组成、大小及其类型,油体结合蛋白的结构特征与功能及其编码基因的表达调控等的研究进展。讨论了植物油体作为一种新型植物生物反应器在生物工程上的应用前景和存在的问题。

为了研究杜仲内生真菌对植物病原真菌的抑制作用,以苹果腐烂病菌(Cytospora sp.)、番茄灰霉病菌(Botrytis cintrea)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium f.sp.cucumerinum)、玉米大斑病菌(Helminthos porium turcicum)和白菜黑斑病菌(Alternaria brassicae)为供试菌种,对49株杜仲(Eucommia ulmoides Oliv)内生真菌及其次生代谢物进行了抑菌活性试验。结果表明,有22株内生菌至少对3种测试菌有抑制作用...

克隆大豆油体蛋白特异启动子及油体蛋白基因的全长序列,利用连接PCR的方法,通过一个肠肽酶位点将人成骨蛋白成熟肽编码序列连接到油体蛋白基因3’端并克隆到表达载体pCAMB IA1302中,构建"油体蛋白-肠肽酶-人成骨蛋白"植物表达载体。通过酶切、PCR和测序鉴定,证明表达载体构建成功,将其命名为pCAM-oleo-Bmp7。通过蛋白分析软件DNAstar、S ignalP3.0和ProtComp v8.0等软件对重组蛋白的理化性质、二级结构、信号肽和细胞定位进行了分析和预测,证明融合蛋白很好的保留了原来两个蛋白的二级结构和理化性质。

为获得中国西门塔尔牛解偶联蛋白(Uncoupling proteins,UCPs)ucp1、ucp2、ucp3基因的组织表达谱,揭示该基因与能量代谢的关系,探索调控肉牛脂肪沉积的关键基因表达规律,筛选影响肉牛肥育性状的候选基因。以20头中国西门塔尔牛为试验材料,提取其15种组织(肝脏、淋巴、肋间肉、肩肉、脾脏、肾脏、背最长肌、肺、心脏、肠脂、网脂、睾丸、小肠、胰脏、背膘)总RNA,设计合成ucp1、ucp2、ucp3基因的引物,以牛β-actin基因为内参,利用实时荧光定量PCR技术,检测ucp1、ucp2、ucp3基因的mRNA在以上各组织中的表达。结果表明,ucp1、ucp2、ucp3基因...