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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
林莹 韩玉辉 熊思嘉 李泽斌 张欣 顾婷婷
[目的]本研究对森林草莓中组蛋白去乙酰化酶基因(HDAC)进行鉴定和分析,并研究其在生长发育以及逆境胁迫响应过程中的表达变化,为深入研究森林草莓组蛋白去乙酰化调控机制奠定基础。[方法]运用生物信息学方法,对森林草莓中HDAC基因进行鉴定,并进行蛋白结构域、染色体定位、基因复制类型和其他进化分析。利用转录组数据分析森林草莓中HDAC基因在不同组织和发育阶段中的表达变化。运用实时荧光定量PCR对森林草莓中HDAC基因在低温、高温胁迫下的表达变化进行分析。[结果]森林草莓中包含12个HDAC基因,其中RPD3/
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵彦玲 任子利 宁淑芳 杨小淦 卢晟盛 卢克焕
【目的】探讨猪孤雌胚早期发育过程中组蛋白H4K5乙酰化水平与组蛋白去乙酰化酶(HDAC1)基因mRNA表达水平之间的关系。【方法】收集早期猪孤雌胚(2-细胞、4-细胞、桑椹胚和囊胚),运用细胞免疫组化和激光共聚焦显微镜,通过检测这些胚胎的相对荧光强度来评判其H4K5的乙酰化水平;运用实时定量PCR的方法检测猪早期孤雌胚发育过程中HDAC1基因mRNA表达的动态变化。【结果】从2-细胞到囊胚开始,其H4K5的乙酰化均在细胞核内表达,且各阶段表达量逐步提高,至囊胚期达最高(分别为1124.77±127.78、1305.81±184.23、1795.19±318.67及2149.63±529.47)...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
张永卓 刘雅琳 陆海 李慧
组蛋白去乙酰化酶HDAC具有调节细胞增殖、诱导细胞分化、凋亡的作用,是近年生物学研究热点之一,而在木本植物方面的作用却鲜有报道。【目的】本实验用组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)对杨树悬浮细胞进行处理,通过改变细胞的组蛋白乙酰化水平,来探讨其对基因表达谱变化的影响。【方法】用0.5μmol/L的TSA处理悬浮细胞,10 d后收集材料用于RNA-Seq分析,比较经过TSA处理与对照组的悬浮细胞之间转录组表达差异情况。【结果】通过显微镜观察发现,对照组细胞呈均匀椭圆形,而经过TSA处理后的细胞出现圆形及长条形细胞。通过转录组分析得到4 465个差异表达基因(DEGs),其中2 363个基因上调,2 102个基因下调。差异表达基因主要富集在细胞周期、苯丙素生物合成、细胞壁结构成分和乙酰化相关等途径。【结论】通过分析TSA处理和对照组的悬浮细胞基因表达差异,发现TSA通过影响组蛋白乙酰化水平直接或间接影响细胞生长、细胞壁组分和细胞周期的相关基因,为认识组蛋白乙酰化对植物生长发育的影响提供依据。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
徐小明 段馨 周欢群 林戈 卢光琇
【目的】探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(曲古菌素A(TSA)和丙戊酸盐(VPA))对人胚胎成纤维细胞(human embryonic fibroblasts,hEF)组蛋白乙酰化(acH4K12)和组蛋白单甲基化(H4K20me1)的影响,为进一步探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂对人类体细胞核移植胚胎表观遗传重编程的作用机制奠定基础。【方法】使用0~400 nmol/L TSA或0~4 mmol/L VPA处理hEF 24 h,用核型分析及荧光原位杂交(FISH)检测hEF细胞遗传学变化,使用间接免疫荧光染色和激光共聚焦显微镜观察TSA和VPA对hEF的acH4K12及H4K20me1水平的影响。【结果...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张宗源 蒋咏梅 章文贤
【目的】组蛋白乙酰化修饰对真菌生长发育和次级代谢合成具有重要的调控作用。研究组蛋白乙酰化对静置培养的灵芝生长发育和主要代谢物合成的影响,为表观遗传手段提高灵芝多糖和灵芝酸生物合成提供理论依据。【方法】采用液体振荡-静置两阶段法培养灵芝。在静置培养阶段添加不同浓度(0、0.6、60、120和180μmol·L~(-1))辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA),采用常规方法测定或观察灵芝生物量、糖消耗、上层菌丝膜形成、菌丝体形态、灵芝孢子生成以及灵芝酸和灵芝多糖生物合成,利用蛋白免疫印迹技术测定灵芝组蛋白乙酰化水平;利用qRT-PCR技术对灵芝多糖(ugp、gls和pgm)、灵芝酸(hmgr、sqs、se和ls)生物合成关键基因以及灵芝全局调控因子相关基因(vet和LaeA)进行表达分析。【结果】SAHA处理使灵芝组蛋白H_4乙酰化水平提高,最高为对照组的1.6倍;抑制了灵芝菌丝体生长和色素产生,改变了菌丝体的形态。灵芝孢子的形成也受到抑制,且SAHA浓度越大,抑制程度越明显。SAHA处理显著增加了灵芝多糖的产量,最高增加50%;灵芝酸生物合成受到抑制,与对照相比降低13%—27%;qRT-PCR分析结果表明SAHA处理下灵芝多糖与灵芝酸合成关键酶基因表达均有不同程度上调,其中灵芝多糖合成关键酶基因提升1.5—3.5倍,灵芝酸合成关键酶基因提升1.8—12.1倍;灵芝全局性调控因子vet和LaeA的表达被抑制,仅为对照组的11.30%—62.4%。【结论】组蛋白乙酰化可通过灵芝全局调控因子调控灵芝生长发育进而影响灵芝酸生物合成,同时组蛋白乙酰化对灵芝多糖生物合也有影响。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李春 王永 李义 丁静
[目的]本文旨在鉴定森林草莓同源异型域-亮氨酸拉链家族(homeodomain-leucine Zipper,HD-Zip)Ⅰ亚家族的转录因子,分析其序列属性及表达模式,为其进一步功能研究和利用奠定基础。[方法]运用生物信息学方法,鉴定和分析森林草莓HD-ZipⅠ亚家族基因的系统进化关系、蛋白基序、基因结构、复制方式及启动子元件等;利用公共转录组数据和荧光定量PCR技术,分析其在花和早期果实中以及黑暗、脱落酸(ABA)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)或水杨酸(SA)处理的离体叶片中的表达模式。[结果]森林草莓HD-ZipⅠ亚家族包含11个基因,它们含有0～3个内含子,相对均匀地分布在第1和3～7号染色体上。全基因组/片段复制是HD-ZipⅠ亚家族基因扩张的主要复制方式。光和激素响应元件是其启动子区所占比例最高的2类顺式作用元件。转录组数据显示,多数HD-ZipⅠ基因在森林草莓除成熟花粉粒和胚之外的花和早期果实组织中表达量较高。5个HD-ZipⅠ亚家族基因的定量结果表明,FvH4_1g20230、FvH4_5g36570、FvH4_5g15520和FvH4_7g32570基因在ABA、6-BA或SA处理3和6 h时有响应;FvH4_7g32570基因在黑暗时被诱导,FvH4_5g36570、FvH4_7g32570、FvH4_1g20230、FvH4_5g15520基因在ABA诱导的离体叶片衰老过程中发生显著的表达变化;而在6-BA处理的叶片中,这5个基因的表达与对照相比均无持续的显著变化。[结论]HD-ZipⅠ亚家族基因很可能在黑暗和ABA诱导的森林草莓离体叶片衰老过程中起重要的调控作用,并参与森林草莓花和早期果实的发育以及激素响应过程。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李丹 唐有军 翟爱华
为扩大米糠蛋白在食品工业的应用范围,利用乙酸酐对米糠蛋白进行酰化改性处理,改变米糠蛋白的功能性质。通过单因素试验,确定了乙酸酐酰化改性米糠蛋白的最适反应条件:米糠蛋白质量浓度为60mg/mL,反应温度30℃,乙酸酐添加量为蛋白质质量的20%。在最适反应条件下,分别反应30和60min,制得酰化度分别为52.9%和78.3%的乙酰化米糠蛋白。对上述2种乙酰化米糠蛋白制品的溶解性、乳化性、起泡性等功能性质进行评价,结果表明:乙酰化改性对米糠蛋白的溶解性、乳化稳定性以及起泡性均有一定改善,而酰化米糠蛋白的乳化活性、泡沫稳定性随着酰化程度的提高有所下降。
关键词：
米糠蛋白 乙酸酐 乙酰化 功能性质
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
左锋 王振忠 钱丽丽 李丹 关琛
为探寻芸豆蛋白加工利用新途径,采用乙酰化处理对芸豆分离蛋白进行改性,通过分析改性过程中芸豆蛋白暴露巯基、游离巯基、二硫键及表面疏水性的变化,探讨乙酰化改性对芸豆分离蛋白凝胶特性的影响。结果表明:1)当乙酸酐与芸豆蛋白质量比为0.2时,蛋白酰化度达到89%,改性过程基本完成,改性后的芸豆分离蛋白在中性条件下(pH6~8)表现出较高的溶解度;2)随乙酰化改性程度的增加,芸豆蛋白总游离巯基的质量摩尔浓度逐渐下降,表面巯基、二硫键的质量摩尔浓度逐渐上升,表面疏水性表现为先下降后上升的趋势。与未改性蛋白相比,乙酰化改性后芸豆分离蛋白的表面巯基的质量摩尔浓度和表面疏水性显著性提高,增强了凝胶形成过程中蛋白质分子相互作用,显著提高了凝胶的硬度、弹性和内聚性。
关键词：
芸豆分离蛋白 乙酰化 乙酸酐 凝胶特性
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李帅 蒋西子 梁伟芳 陈思涵 张享享 左登攀 胡亚会 江彤
【目的】草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)是侵染草莓的主要病毒,但其侵染草莓的机制尚不清楚。论文以SVBV的P6蛋白为诱饵筛选森林草莓(Fragaria vesca)c DNA文库的寄主因子,为解析SVBV侵染草莓的分子机制提供理论依据。【方法】SVBV接种森林草莓,提取出现明显症状叶片的总RNA,Dnase I处理后,用SMART法反转录合成ds c DNA,均一化处理c DNA并酶切纯化,将1 kb,表明森林草莓c DNA文库符合试验标准。最终利用SD
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
仲岩 张甜 陈钊 程宗明
[目的]本文旨在研究取自欧洲不同生态环境下的森林草莓生态型中的2个NBS-LRR抗病基因，揭示不同生态型中同一基因的遗传变异特征。[方法]选取森林草莓中具有代表性的2个NBS-LRR基因为目的基因，从不同森林草莓生态型中对其进行PCR扩增、测序并得到相应的核苷酸序列。利用ProtParam网站分析其理化性质；利用MEGA v7.0和DNAMAN v7.0对核苷酸序列以及蛋白序列进行多重比对，查找序列突变位点；利用Pfam、SMART、COILS等网站分析基因编码蛋白质的结构域组成；利用MEGA v7.0计算2个基因中不同生态型之间的K_(a)/K_(s)值、Pi值并构建系统进化树，分析其受到的选择压力及遗传进化关系。[结果]以Hawaii4的序列为参照，FvH4＿5g22710和FvH4＿1g15230基因在某些森林草莓生态型中发生了点突变和缺失突变。通过结构域分析可知FvH4＿5g22710基因只在Rx＿N结构域区段发生了突变，而在NB-ARC结构域和LRR基序中没有发生，FvH4＿1g15230基因在其编码的蛋白质RPW8、NB-ARC结构域和LRR基序区段均发生了突变。进化树的拓扑结构显示，来自在同一国家的生态型，其目的基因更偏向于聚类在同一进化枝上；2个基因的平均K_(a)/K_(s)值均小于1，说明它们均受到纯化选择的驱动。[结论] 2个NBS-LRR基因在不同的森林草莓生态型中都有一定程度的变异，这提高了抗病基因的遗传变异程度，可能与提高森林草莓抗病性有一定关联。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张伟 姬明丽 张军华 千智斌
从红鳍东方鲀（Ｔａｋｉｆｕｇｕ ｒｕｂｒｉｐｅｓ）肝脏组织中提取总ｒＮａ，通过ｒＴ–ｐＣｒ扩增，获得ｓｉｒＴ３基因的编码阅读框（Ｏｒｆ），用原核表达载体ｐ ｅＴ３２ａ（＋）构建ｐ ｅＴ３２ａ／ｓｉｒＴ３重组质粒，用异丙基–β–Ｄ–硫代半乳糖苷（ｉｐＴｇ）将重组质粒ｐ ｅＴ３２ａ／ｓＴｒＴ３在大肠杆菌ｒＯｓｅＴＴａ（Ｄｅ３）进行诱导表达，并用镍柱纯化融合表达蛋白。结果显示，红鳍东方鲀ｓｉｒＴ３基因（Ｔｒ ｓｉｒＴ３）Ｏｒｆ区大小为１ ２６３ ｂｐ大小，编码４２０个氨基酸。经ｉｐＴｇ诱导表达后，获得１个带组氨酸（Ｈｉｓ）标签的融合蛋白，目的蛋白主要存在于上清溶液中，为可溶性表达。用镍离子亲和层析柱．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李碧侠 赵芳 付言峰 任守文 王金玉
【目的】分析去乙酰化酶SIRT1基因在猪不同发育阶段卵泡颗粒细胞中的表达规律,为进一步了解SIRT1基因在猪卵泡发育中的调控机制奠定基础。【方法】采集猪卵巢,分离卵泡颗粒细胞,根据直径将其分为≤1.5mm,>1.5~≤3.0mm,>3.0~≤5.0mm,>5.0mm 4个组,利用免疫组织化学方法分析SIRT1蛋白在不同发育阶段卵泡颗粒细胞中的表达定位,利用qRT-PCR和Western blotting方法分析SIRT1基因在不同直径卵泡颗粒细胞中mRNA和蛋白的表达量。【结果】SIRT1蛋白在不同发育卵泡颗粒细胞中均有表达,随着卵泡的发育,SIRT1蛋白表达量逐渐升高,其在原始卵泡中表达量最...
关键词：
SIRT1基因 猪 卵泡发育
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马延森 李晓 陈志 兰向丽 武小椿 靳亚平 刘伟
【目的】制备抗果蝇组蛋白乙酰转移酶Atac2的单克隆抗体,为进一步研究Atac2基因的功能提供重要的试验工具。【方法】PCR扩增果蝇Atac2蛋白N端前26个氨基酸的编码基因,构建GST-Atac2融合蛋白表达载体pGEX-Atac2。转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),进行诱导表达,通过GST亲和层析法纯化GST-Atac2融合蛋白。以GST-Atac2为抗原免疫8周龄的Balb/c小鼠,取脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA法检测阳性孔,经有限稀释法亚克隆,筛选单克隆杂交瘤细胞株,检测抗体的特异性、效价和亚型,并检测其亲和常数。【结果】PCR扩增获得了目的片段。成功...
关键词：
果蝇 Atac2 原核表达 单克隆抗体
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
赵芳 任守文 赵为民 付言峰 李碧侠
构建猪ＳＩＲＴ１基因全长编码区（ｃｏｄＩｎｇ ＲｅｇＩｏｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ，ｃｄＳ）的真核表达载体，转染猪原代卵巢颗粒细胞，探讨ＳＩＲＴ１基因过表达对猪卵巢颗粒细胞中ＡＭＰＫ基因的转录及其蛋白活性的影响。测序结果表明，猪ＳＩＲＴ１基因的ｃｄＳ区全长大小为２ ２２９ ｂＰ，与ｎｃｂＩ发布的猪ＳＩＲＴ１基因Ｍ ＲｎＡ序列（ｅｕ０３０２８３．２）一致；转染Ｐ ｅｇＦＰ–ｃ１–ＳＩＲＴ１载体的颗粒细胞中ＳＩＲＴ１的Ｍ ＲｎＡ表达水平和蛋白表达水平极显著高于空载体对照组（Ｐ
[期刊] 林业科学
[作者]
朱家琪
简要论述了木材化学改性领域中的木材乙酰化，介绍了木材乙酰化的基本原理及方法，乙酸酐法的工艺及其发展状况和乙酰化实水及人造板在性能上的改进。
关键词：
木材化学改性,乙酰化
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