[目的 ]研究森吉木霉M75发酵粗提液对松球壳孢菌Sphaeropsis sapinea代谢系统及生理生化的影响,探究其抑菌机制。[方法 ]采用分光光度计法,分别测定在不同处理时间段内森吉木霉M75发酵粗提液对松球壳孢菌代谢系统酶活性,以及对电导率、丙二醛含量的影响。[结果 ]森吉木霉M75发酵粗提液可显著影响松球壳孢菌代谢系统中各关键酶活性。其中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)在处理8～12 h内达到峰值,为75.25 U·(g·min)~(-1)、0.066 U·(g·s)~(-1)、5.8U·(g·s)~(-1)和12.33 U·(g·s)~(-1),分别是初始时的1.96、6.09、16.37和7.86倍;丙酮酸激酶(PK)、己糖激酶(HK)和乳酸脱氢酶(LDH)在处理12～24 h内显著下降,由初始时的0.55、0.066、2.35 U·(g·min)~(-1)下降至0.18、0.03、0.66 U·(g·min)~(-1),后下降趋缓;琥珀酸脱氢酶(SDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和辅酶Ⅰ含量在处理12h内呈快速下降趋势,由初始时的30.33U·(g·min)~(-1)、 15.55U·(g·min)~(-1)、 5.70nmol·(g·min)~(-1)分别下降至10.00 U·(g·min)~(-1)、3.65 U·(g·min)~(-1)、1.34 nmol·(g·min)~(-1),处理12 h后呈缓慢下降趋势,而对照组则不断升高;Na~+,K~+-ATP、Mg~(++)-ATP和Ca~(++)-ATP酶活性在处理8 h或12 h时达到峰值,分别为0.09、1.76和3.18μmolPi·(g·h)~(-1);此后迅速下降,处理24 h后下降趋缓并逐渐趋于0;松球壳孢菌细胞膜电导率在处理12 h内显著升高,且处理组在各时间段的电导率值始终高于对照组;丙二醛含量在处理24 h内显著升高并达到峰值1.06 nmol·g~(-1),处理24 h至96 h内呈缓慢下降趋势,但在各处理时间段仍显著高于对照组。[结论 ]森吉木霉M75发酵粗提液通过破坏松球壳孢菌的防御系统,阻碍了病原菌正常的生理代谢路径,从而抑制病原菌的正常生长。

[目的 ]研究森吉木霉M75发酵粗提液对松球壳孢菌Sphaeropsis sapinea代谢系统及生理生化的影响,探究其抑菌机制。[方法 ]采用分光光度计法,分别测定在不同处理时间段内森吉木霉M75发酵粗提液对松球壳孢菌代谢系统酶活性,以及对电导率、丙二醛含量的影响。[结果 ]森吉木霉M75发酵粗提液可显著影响松球壳孢菌代谢系统中各关键酶活性。其中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)在处理8～12 h内达到峰值,为75.25 U·(g·min)~(-1)、0.066 U·(g·s)~(-1)、5.8U·(g·s)~(-1)和12.33 U·(g·s)~(-1),分别是初始时的1.96、6.09、16.37和7.86倍;丙酮酸激酶(PK)、己糖激酶(HK)和乳酸脱氢酶(LDH)在处理12～24 h内显著下降,由初始时的0.55、0.066、2.35 U·(g·min)~(-1)下降至0.18、0.03、0.66 U·(g·min)~(-1),后下降趋缓;琥珀酸脱氢酶(SDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和辅酶Ⅰ含量在处理12h内呈快速下降趋势,由初始时的30.33U·(g·min)~(-1)、 15.55U·(g·min)~(-1)、 5.70nmol·(g·min)~(-1)分别下降至10.00 U·(g·min)~(-1)、3.65 U·(g·min)~(-1)、1.34 nmol·(g·min)~(-1),处理12 h后呈缓慢下降趋势,而对照组则不断升高;Na~+,K~+-ATP、Mg~(++)-ATP和Ca~(++)-ATP酶活性在处理8 h或12 h时达到峰值,分别为0.09、1.76和3.18μmolPi·(g·h)~(-1);此后迅速下降,处理24 h后下降趋缓并逐渐趋于0;松球壳孢菌细胞膜电导率在处理12 h内显著升高,且处理组在各时间段的电导率值始终高于对照组;丙二醛含量在处理24 h内显著升高并达到峰值1.06 nmol·g~(-1),处理24 h至96 h内呈缓慢下降趋势,但在各处理时间段仍显著高于对照组。[结论 ]森吉木霉M75发酵粗提液通过破坏松球壳孢菌的防御系统,阻碍了病原菌正常的生理代谢路径,从而抑制病原菌的正常生长。

[目的]解析生防菌株森吉木霉M75产生的挥发性有机化合物的成分。[方法]利用顶空固相微萃取气相色谱-质谱联用技术(HS-SPME-GC-MS)对森吉木霉(Trichoderma songyi)M75产生的挥发性气体中的有机化合物进行成分解析，并对其中的成分进行抑菌活性的检测。[结果]从森吉木霉M75菌株产生的挥发性气体中鉴定出18种化合物，包括醛类、萜类、酮类、烷烃类、芳烃类、酯类等。其中6-戊基-2H-吡喃-酮(6PP)含量最高，相对含量为18.56%，对松球壳孢菌(Sphaeropsis sapinea)抑制效果最好的化合物是芳樟醇，相对含量为5.86%，并且芳樟醇的抑菌谱较广，对多种植物病原菌如金黄壳囊菌(Cytospora chrysosperma)、栗疫菌(Cryphonectria parastica)和链格孢(Alternria sp)也具有较好的抑制效果，抑菌率均达到70.00%以上。[结论]木霉属真菌普遍具有产挥发性有机化合物的能力，本研究成功解析了森吉木霉M75菌株产生的挥发性有机化合物，为木霉的抑菌机制及抑菌物质的代谢等研究提供科学依据，为利用木霉属真菌开发生物防治剂奠定了基础。

【目的】由辣椒疫霉（Phytophthora capsici）侵染引起的疫病给辣椒等作物产业带来了巨大的经济损失。论文旨在明确球毛壳菌（Chaetomium globosum）代谢产物抑制辣椒疫霉的稳定性和抑菌机制，为研究与开发辣椒疫霉的微生物源抑菌剂提供参考。【方法】将球毛壳菌发酵粗提物分别在不同温度（40—121℃）、pH(1—13)、光照时间（0—12 d）和储存时间（0—60 d）条件下进行处理，采用菌丝生长抑制法测定经不同处理后粗提物对辣椒疫霉的抑制率，以探究粗提物抑制辣椒疫霉的热、酸碱、光和时间稳定性。利用光学显微镜观察粗提物对辣椒疫霉菌丝形态的影响，通过多种生理生化试验探究粗提物作用于辣椒疫霉12—72 h后，对辣椒疫霉细胞壁、细胞膜、活性氧代谢、蛋白质含量、还原糖含量和致病力的影响。【结果】在所设置的处理范围内，球毛壳菌发酵粗提物（1 mg·mL-1）经不同光照时间和储存时间处理后对辣椒疫霉的抑制率没有显著降低，抑制率维持在93%左右；粗提物在40—70℃的热处理范围内对辣椒疫霉的抑制率没有显著降低，70℃以上的热处理会显著降低粗提物对辣椒疫霉的抑制率，但抑制率不低于70%；粗提物在pH 1—5和9—13的酸碱处理范围内会显著降低对辣椒疫霉的抑制率，但抑制率也不低于70%。粗提物处理影响辣椒疫霉菌丝形态，使菌丝发生严重的扭曲皱缩现象，并影响活性氧代谢，使菌丝中的活性氧大量积累。辣椒疫霉经粗提物处理12—72 h后，其培养液中的碱性磷酸酶活性、β-葡萄糖苷酶活性、核酸和蛋白质含量均显著升高，且其菌丝中的丙二醛和过氧化氢含量显著增加。辣椒疫霉菌丝中的过氧化氢酶活性、可溶性蛋白和还原糖含量则在粗提物处理12—72 h内显著降低，而超氧化物歧化酶、过氧化物酶、多聚半乳糖醛酸酶和β-葡萄糖苷酶活性则仅在一定时间显著降低。【结论】在本试验所设置的处理范围内，球毛壳菌的小麦秸秆发酵粗提物抑制辣椒疫霉的效果不受光照及储存时间的影响，但超过70℃的热处理和pH 1—5和9—13的酸碱处理会显著降低粗提物对辣椒疫霉的抑制效果。此外，该粗提物通过改变菌丝形态，破坏细胞壁和细胞膜，引发细胞内物质泄漏，降低菌丝中蛋白质和还原糖含量，抑制抗氧化酶活性，干扰活性氧代谢使活性氧大量积累从而抑制辣椒疫霉。

实验证明 ,国内供试松球壳孢菌 (Sphaeropsissapinea)的致病力明显高于美国的B型菌株 ,与A型相似 ,致病性较强。B型也能无伤侵入 ,只是发病率明显低于A型。伤口并不是病菌侵入的唯一途径 ,自新梢伸长至针叶发育完全期间 ,病菌可直接侵入树木当年嫩梢并使之枯萎 ;此后 ,随着梢部组织的不断成熟与老化 ,伤口对病菌侵入与危害的作用才得以显现出来 ,无伤接种时不发病或只产生部分枯叶。气孔也是病菌侵入的途径之一。病菌不但可侵入当年新稍 ,而且还可于枝梢的 2a和 3a生处有伤侵入 ,使之染病甚至死亡。油松(Pinustabulaeformis)、赤松 (P .densiflora)、...

采用直接提取法和分步提取法对哈茨木霉T28发酵液进行萃取,获得6种提取物;将各提取物对致病疫霉进行抑菌活性研究,并对具有最佳抑菌效果的提取物进行GC-MS分析。结果表明:采用分步提取法和乙酸乙酯为萃取液的提取物对致病疫霉菌丝生长、孢子囊萌发、孢子囊释放游动孢子具有最佳的抑制效果,抑制率分别为67.06%,71.71%和76.25%;采用直接提取法获得的提取物抑制效果次之。2种方法的提取物中分别含有10个和15个组分,其中相同组分为2,5-二叔丁基酚、邻苯二甲酸二叔丁酯、邻苯二甲酸二异丁酯、十八碳酸甲酯、邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸单(2-二乙基己基)酯,这些组分可能为对致病疫霉菌具有抑制作用的...

采用对峙培养法和生长速率法,从29个木霉菌株中筛选出3株对金黄壳囊孢菌具有显著抑制效果的菌株T-33,T-14,T-09,并对3个菌株的抑菌活性成分进行复筛确定T-33菌株培养液的正丁醇浸提物对金黄壳囊孢菌菌丝生长的抑制率最高,达到94%,并能显著抑制分生孢子萌发。该抑菌活性成分可显著提高金黄壳囊孢菌细胞膜的通透性,降低病原菌蛋白质含量和SDH,PK,HK,LDH,MDH与辅酶Ⅰ的活力,同时导致Na+,K+-ATP酶,Mg2+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性急剧下降。结果表明:金黄壳囊孢菌细胞膜脂质过氧化严重,糖酵解途径、TCA循环、电子传递与氧化磷酸化过程等代谢途径均不能正常进行,产能下降...

试验测定了8个粘帚霉Gliocladium spp.菌株的发酵液对3种重要土传病原真菌尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum Schlecht.、立枯丝核菌Rhizoctonia solani和核盘菌Sclerotina sclerotiorun的抑菌效果。结果表明,HL-1-1、SH-1-1和SS-1-1的抑菌作用最强,抑菌率分别达83.48％、81.65%和78.68％,3个菌株之间差异不显著;SDT-10-1的抑菌作用最小,抑菌率仅为23.24％。热稳定性测定结果表明:发酵液121℃处理30 min,病原菌生长正常,抑菌作用消失;发酵液经60℃处理后供试菌株的抑菌效果明显,但效果...

[目的]本文分析了对多种昆虫具有高毒力的球孢白僵菌菌株NJBb2101发酵液产物对细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,旨在为筛选球孢白僵菌杀虫成分提供理论基础。[方法]以昆虫细胞Sf9为材料,利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测发酵液产物对细胞增殖的抑制作用;利用AO/EB(吖啶橙-溴化乙锭)染色和Annexin V-FITC/PI(Annexin V-fluorescein isothiocyante/propidium iodide)染色-流式细胞仪2种检测方法测定了高、低质量浓度(1.92和0.48 mg·mL~(-1))发酵液产物对细胞凋亡的诱导作用。[结果]NJBb2101发酵液产物对Sf9细胞增殖具有很强的抑制作用,测定的抑制中浓度(IC_(50))为0.907 mg·mL~(-1)(95%置信限为0.500～3.075 mg·mL~(-1))。AO/EB和Annexin V-FITC/PI染色-流式细胞仪检测发现高浓度(1.92 mg·mL~(-1))发酵液产物可以显著增强细胞凋亡率,平均凋亡率均在70%以上。[结论]球孢白僵菌发酵液中存在有效的杀虫成分,对昆虫细胞表现出增殖抑制和诱导凋亡的作用。

为测定实验室前期构建的可分泌Melittin(1-13)-LL(17-30)(M-L)杂合肽的毕赤酵母工程菌发酵上清液的抑菌谱以及生物稳定性。采用牛津杯琼脂扩散法测定其对16株指示菌的抑菌效果,以及经过模拟胃肠液和不同温度处理后的稳定性。结果表明,上清液对多种致病菌具有良好的抑菌效果,且抑菌直径半数在20mm以上,而对有益菌屎肠球菌无抑菌作用;经模拟胃液处理后,活性明显下降;但经过模拟肠液以及不同温度梯度处理后抑菌活性无明显变化。因此,杂合肽M-L发酵液抑菌谱广,温度耐受性好,但在胃液中稳定性较差。

本文以猴头真菌为研究对象,研究了温度、pH对发酵液抑菌活性的影响,考察了发酵液中多糖和蛋白质的抑菌活性,比较了不同溶剂对抑菌成分的萃取效果。结果表明,抑菌活性物质具有较好的热稳定性,在酸性条件下具有较强的抑菌活性,对蛋白酶不敏感,对粗多糖不敏感,正丁醇对其萃取效果较好。

[目的]微囊藻水华给湖泊生态系统及人类健康带来很大危害,本研究旨在探寻高效环保的微生物抑藻材料。[方法]通过流式细胞仪测定短短芽孢杆菌B15不同发酵时间及添加量下无菌发酵上清液的抑藻率,通过激光共聚焦显微镜和电子显微镜观察处理后的藻细胞形态,并通过叶绿素荧光仪测定处理前、后藻细胞光合作用的变化。另外,检测了发酵上清液在不同温度、p H值和蛋白酶处理下的活性变化。[结果]0.3%、0.7%、1.0%和2.0%添加量的发酵液处理6 d后抑藻率分别为51.89%、79.89%、89.47%和86.94%。发酵液

【目的】球孢白僵菌(Beauveria bassiana)作为一种重要的虫生真菌,已广泛应用于害虫生物防治,但其不成熟的规模化生产技术一直是限制球孢白僵菌广泛应用的主要问题之一。开展球孢白僵菌液体发酵工艺研究,提高液体发酵生物量,从而为固体发酵阶段提供优质的种子液,进而提高固体发酵的产孢量,为球孢白僵菌规模化生产提供参考。【方法】影响球孢白僵菌液体发酵的培养条件有温度、装样量、摇床转速、接种浓度和p H等,首先采用Plackett-Burman试验设计,筛选出影响球孢白僵菌菌株SDDZ-9的液体发酵的主要因子,然后运用最陡爬坡路径法,以试验值变化的梯度方向和各因素效应值的大小分别确定爬坡方向和...

分别以菌丝生长速率法和抑菌圈法测定了巨大芽孢杆菌B196菌株发酵滤液对18种植物病原真菌和7种细菌的抑制作用,发现该滤液抑菌谱较广,对供试的所有真菌均有抑制作用,对其中8种真菌的抑菌率在80%以上;对6种供试细菌有抑制作用,其中对水稻细菌性条斑病菌的抑菌活性最强,抑菌圈直径达到27.67 mm。以水稻纹枯病菌为指示菌,测定了B196菌株发酵滤液的酸碱稳定性、热稳定性、蛋白酶稳定性及紫外线稳定性。结果表明,发酵滤液在pH 2～8条件下抑菌活性没有明显变化;经121℃处理20 min,抑菌活性为原有活性78.43%;对胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K均稳定,但对木瓜蛋白酶敏感;对紫外线稳定,在处理4 ...

以前期筛选的植物内生真菌SDYS180（聚多曲霉菌Aspergillus sydowii）为试验材料，通过体外试验测定其对13株常见林木病原真菌的抑菌活性，并建立SDYS180粗提物对各病原真菌的毒力回归方程，同时测定了SDYS180粗提物对杨树叶斑病菌生理指标[电导率、可溶性蛋白（SP）质量分数、丙二醛（MDA）浓度、超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化物酶（POD）活性、过氧化氢酶（CAT）活性]的影响。结果表明，SDYS180菌体、发酵液和挥发性代谢产物对13株林木病原真菌的抑菌效果表现为菌体＞发酵液＞挥发性代谢产物，其中对杨树叶斑病菌的抑制活性最佳，粗提物对该菌的毒力回归方程为y=0.3010x+0.1437，R~(2)=0.986 4，EC_(50)=1.183 7 mg·mL~(-1)。SDYS180粗提物对杨树叶斑病菌的生理指标存在明显影响，主要表现为：试验期间处理组的电导率和MDA浓度大于对照组，8 h时电导率最大，达到27.73 ms·cm~(-1)，4 h时MDA浓度最大，达到0.183 μmol·g~(-1)；8 h后处理组的SP质量分数小于对照组；处理组的POD、SOD、CAT活性与对照组相比都呈现先增强后减弱的趋势，且均在4 h时达到最大值，分别为1 200 U·g~(-1)·min~(-1)、33 U·g~(-1)、5.46 U·g~(-1)·min~(-1)。可见，SDYS180是一株具有开发潜力的生防菌。