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[期刊] 华北农学报
[作者]
田义轲 李节法 王彩虹 殷豪 白牡丹
以黄金梨不同发育时间的新梢茎尖为试材,应用实时荧光定量PCR技术,对18S rRNA、Actin、GAPDH和S19这4个常用内参基因在梨茎尖组织中的表达稳定性进行了评估。GeNorm软件分析显示,它们表达稳定度的平均值(M)依次是0.365,0.392,0.457和0.517,即表达稳定性从高到低的排序是:Actin>18S rRNA>GADPH>S19。选择Actin作为校正内参基因,对处于不同发育时期的新梢茎尖组织中贝壳杉烯氧化酶基因PpKO的表达量进行研究,发现该基因在新梢生长过程中出现2次表达高峰,基本与春梢、秋梢的快速生长期吻合,且秋梢中的表达量远高于春梢。
[期刊] 林业科学
[作者]
杨帆 丁菲 杜天真
转录因子是指那些专一性地结合于DNA特定序列上、能激活或抑制其他基因转录的蛋白质(王少峡等,2004)。DREB(dehydration responsive element binding protein)转录因子是一种特异性的转录因子,当植物在干旱、低温及盐等逆境胁迫下,DREB转录
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
韩彩霞 赵德明 吴长德 宁章勇 杨建民 刘美丽 马李颖
为快速、准确定量绵羊PrP基因的mRNA,建立了绵羊PrP基因实时荧光定量聚合酶链反应检测方法。根据已报道的绵羊PrP基因序列,设计合成引物;采用RT-PCR方法扩增目的片段;构建标准重组质粒制备标准曲线,用于样品检测。结果发现,中枢神经系统组织PrP基因的表达量(copies/ng总RNA,39420)比外周组织(为7845)的高;在中枢神经系统中,脑干的PrP基因的表达量最高(为67020);外周器官中,淋巴结PrP基因的表达量最高(为29086),肾脏的表达量最低(为125)。建立绵羊PrP基因实时荧光定量PCR方法,对PCR扩增反应中每一个循环的产物进行定量分析,为进一步研究绵羊组织器...
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
付建新 张超 王艺光 赵宏波
为了筛选桂花Ｏｓｍａｎｔｈｕｓ ｆｒａｇｒａｎｓ不同组织基因表达分析中适合的内参基因，以桂花‘堰虹桂’Ｏ．ｆｒａｇｒａｎｓ‘ＹａｎｈＯｎｇｇｕｉ’花蕾、盛开花序、嫩叶、成熟叶和１年生茎等５个不同组织为材料，利用实时荧光定量聚合酶链式反应（ｑｒｔ－ＰＣｒ）检测７个候选内参基因的表达水平，并利用ｇｅｎＯｒｍ，ｎＯｒｍｆｉｎｄｅｒ和ＢｅｓｔＫｅｅＰｅｒ软件对各候选内参基因的表达稳定性进行评价，最后利用桂花不同组织中ＯｆＣｒｔｉｓＯ１基因相对表达水平验证筛选的内参基因的可靠性。结果表明：综合３个软件的评价排序，确定不同组织中最佳内参基因为Ｏｆｒａｎ１和ＯｆｕＢＣ２，而Ｏｆ１８ｓ是最差内参基因。ＯｆＣｒ．．．
[期刊] 林业科学研究
[作者]
张颖 陈婉婷 陈冉红 帅鹏 李明
[目的]筛选适用于杉木不同组织荧光定量PCR分析的稳定内参基因,提高杉木实时荧光定量PCR试验准确性,为杉木体内各个基因表达分析提供合适内参基因。[方法]通过实时荧光定量PCR获取GAPDH、EF1α、18S rRNA、28S rRNA、UBQ、UBC与Actin 7个候选内参基因在杉木无性系的根、茎和叶中的溶解曲线与Ct值;利用软件geNorm、Normfinder和BestKeeper对候选内参基因的表达稳定性进行评价;通过分析2个纤维素合酶基因ClCesA1和ClCesA2在杉木不同组织部位的相对表达情况,对候选内参基因的稳定性进行验证。[结果]geNorm、Normfinder和BestKeeper分析结果均表明:在杉木根和茎中最稳定的内参基因是EF1α和Actin; geNorm、Normfinder结果显示杉木叶中稳定的内参基因是UBQ和EF1α, BestKeeper显示杉木叶中最稳定合适内参基因是EF1α和Actin。以Actin与EF1α作为内参基因,荧光定量PCR分析表明,ClCesA1和ClCesA2基因的相对表达量在杉木不同组织中均有所不同,ClCesA2的相对表达量在各个组织中均高于ClCesA1。以不同内参基因作为试验内参基因分析ClCesA1和ClCesA2的表达情况得到,ClCesA1和ClCesA2在各个组织中的相对表达量排序主要为茎>叶>根。[结论]7个候选内参基因中,杉木不同组织中稳定表达的为Actin与EF1α,适合作为表达分析的内参基因;28S rRNA的表达稳定性低,不适合作为杉木定量PCR分析的理想内参基因。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
袁飞荣 严佳文 罗坤 Alessandra Gentile 王晓君 刘东波 邓子牛
以转rolABC基因枳橙B、D、E系及野生植株为材料,制备标准品,采用SYBR Green I染料,构建rol基因和β-actin基因的双标准曲线,校正引物扩增效率后,用2-△△Ct法对rol基因在嫩茎、嫩叶、功能叶、树皮和根中的mRNA水平进行相对定量,建立适合于rolA、rolB、rolC基因实时荧光定量RT-PCR分析方法.初步认为rolC基因在嫩茎、嫩叶、功能叶和树皮中表达量最高;其次是rolA基因,主要在嫩茎中表达;rolB基因表达量最低,主要在根系中表达.
[期刊] 林业科学
[作者]
王金星 张利军 廖资亿 张运根 邱乾栋 孙鹏 孙宇涵 胡瑞阳 卢楠 李云
实时荧光定量PCR是由美国Applied Biosystems公司于1996年在传统的PCR技术基础上发展起来的一种新的核酸定量技术(Mackay,2004),具有定量准确、灵敏度高、特异性强、重复性好及高通量等优点(Huggett et al.,2005),已成为医学、农学、林学、微生物学等众多领域中进行基因表达和转录组分析的常用技术之一(Postollec et al.,
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
程翔 蔡生力 刘红 李媛媛
中国明对虾卵黄蛋白原mRNA基因在卵巢和肝胰腺中都有表达。采用实时荧光定量PCR方法测定在卵巢不同发育时期卵巢和肝胰腺这两种组织的卵黄蛋白原mRNA的表达水平,提取组织总RNA,设计特异性引物进行荧光定量PCR扩增,对卵巢发育的各个阶段,卵原细胞增殖期、卵黄发生前期、初级卵黄发生期、次级卵黄发生期和消退期的卵黄蛋白原mRNA表达进行相对定量分析。结果表明:在卵巢中,卵黄蛋白原mRNA在前3个阶段随着卵巢的发育,表达量不断增加,分别为0.04、0.23和1.03,次级卵黄发生期开始减少到0.16,消退期卵黄蛋白原mRNA表达量又增加到1.00。而在肝胰腺,前4个阶段随着卵巢发育,表达量逐步增加,...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
曾文韬 柴春月 窦道龙
[目的]选择合适的内参基因是实时荧光定量PCR(qRT-PCR)研究的关键。大豆由于基因组复杂等原因,内参基因的选择尤为重要。[方法]结合实验室先前试验结果及相关文献,选择了10个持家基因(Cons4、ACT11、TUA、Cons15、ACT20、Cons7、CYP2、Cons6、Tubulin and ELF1B),依次用3个统计学软件Ge Norm、Norm Finder和Best Keeper进行综合分析,研究其在大豆不同组织和大豆疫霉侵染不同时间点根中的表达稳定性。[结果]Cons4、ACT11和TUA在大豆疫霉侵染过程中的大豆根中表达稳定性最好,而Tubulin和ELF1B在大豆的所...
[期刊] 水产学报
[作者]
李媛媛 蔡生力 刘红
卵黄磷蛋白作为卵黄蛋白的主要成分,可为甲壳动物胚胎和早期幼体发育提供能量,为研究其来源及合成规律,实验应用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法检测了凡纳滨对虾和罗氏沼虾性腺不同发育时期卵巢和肝胰腺两种组织中卵黄蛋白原mRNA的表达水平。结果发现,凡纳滨对虾和罗氏沼虾的卵巢和肝胰腺中都有卵黄蛋白原mRNA的表达。随着卵巢的发育,凡纳滨对虾卵巢中卵黄蛋白原mRNA的相对表达量在前5个阶段不断增加,分别为1.1,5.9,10.4,26.9,85.0,恢复期急剧减少,为1.6。肝胰腺中的相对表达量也不断增加,分别为1.3,3.3,7.1,37.3,51.6,恢复期急剧减少,为1.0。罗氏沼虾肝胰腺中...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王海鸿 雷仲仁
【目的】比较温度胁迫对两种生物型烟粉虱体内hsps诱导表达的差异。【方法】根据烟粉虱hsp70基因、hsp90基因和18Sr RNA序列,设计并合成引物用于实时定量RT-PCR,扩增产物连接到质粒pMD18-T载体上,重组质粒经筛选、签定和10×梯度稀释后作为模板,用于标准曲线的制作和样品检测,检测温度胁迫对B型和ZHJ-1型烟粉虱hsp70和hsp90mRNA转录水平的诱导情况。【结果】在受到34℃、37℃、40℃和43℃的高温胁迫时,两者hsps的诱导水平无显著差异(P>0.05);在受到4℃、7℃、10℃和13℃的低温胁迫时,B型烟粉虱体内hsps的诱导表达水平显著超过了ZHJ-1型烟粉...
[期刊] 林业科学
[作者]
刘文哲 牛明月 李秀云 林二培 黄华宏 童再康
【目的】利用定量ＰＣＲ和表达分析软件研究候选内参基因在光皮桦不同组织中的表达稳定性，并通过目的基因的表达分析验证其可靠性，以获得可用于光皮桦定量ＰＣＲ的稳定内参基因。【方法】选取１６个常用的看家基因作为候选内参基因，设计引物，通过普通ＰＣＲ、溶解曲线及琼脂糖凝胶电泳验证引物的特异性；通过实时荧光定量ＰＣＲ及软件ｇｅ ＮｏＲｍ、ＮｏＲｍ ＦｉＮｄｅＲ和Ｂｅｓｔ ＫｅｅＰｅＲ分析候选内参基因在光皮桦１６个不同组织中的表达稳定性，根据分析结果筛选出最佳的内参基因和组合，并进一步通过２个目的基因ＣｓＬｄ和ＫｏＲ对内参基因的稳定性进行验证。【结果】ＰＣＲ和电泳结果显示，候选内参基因ＰＣＲ目的片段条带清晰．．．
关键词：
光皮桦 内参基因 实时荧光定量PCR
[期刊] 西南农业学报
[作者]
韩建强 许文花 高斌
根据GenBank上猪GAPDH基因的序列设计并合成一对引物,采用SYBR GreenⅠ染料建立了Real-time PCR方法。以阳性重组质粒为标准品,建立了标准曲线,并进行了融解曲线分析。结果表明,所建立的方法具有快速、高通量、线性范围广以及重复性强等特点。研究结果为GAPDH作为内参基因用于猪相关基因定量表达分析奠定了基础。
[期刊] 林业科学
[作者]
成龙平 胡海涛 郭卫东 杨莉 王长春 杨玲
【目的】实时定量PCR结果的精确性在很大程度上取决于选择的内参基因的稳定性。通过评估候选管家基因的表达稳定性,筛选出用于牛奶子研究的最佳内参基因。【方法】设计简并引物从牛奶子中克隆12个潜在的内参基因片段,包括14-3-3、18S核糖体RNA(18SrRNA)、β-actin(Actin)、延长因子1-α(EF1-α)、真核起始因子4A(e IF4A)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、RNA聚合酶-Ⅱ(RPⅡ)、60S核糖体蛋白(RPL7)、翻译延长因子2(TEF2)、泛素连接酶E2(UBCE)、泛素(UBQ)和泛素延伸蛋白5(UBQ5)。采集牛奶子5个不同器官(根、茎、叶、花和红果)、4...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈林波 夏丽飞 梁名志 江昌俊
利用cDNA-AFLP技术进行茶树低温胁迫处理的基因表达差异分析,获得低温诱导后表达的差异片段TDF6(transcript de-rived fragment,TDF)。经BLAST比对发现该片段与杨树、橡胶树、百脉根的多元醇转运子(polyol transporter)分别有77%、76%、75%的同源性,命名为CsPLt。利用实时荧光定量PCR技术对多元醇转运子基因在不同胁迫以及不同组织中的表达进行分析,结果表明,多元醇转运子基因能被低温、脱水、高盐诱导表达,最大表达量分别比处理前提高7.3、12.2、5.3倍。在芽中表达最高,其次是花蕾,嫩茎表达量与嫩根相近,均比成熟叶种的表达量高,在...
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