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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
胡黎明 申建梅 宾淑英 廖泓之 林进添
采用RT-PCR及RACE技术克隆了桔小实蝇(Bactrocera dorsalis(Hendel))takeout基因的cDNA全长序列,命名为BdorTO。测序结果表明:BdorTO开放阅读框全长747 bp,编码248个氨基酸,相对分子质量约为28.15×103,等电点为5.29。Signal P软件分析表明,该蛋白N端具21个氨基酸的信号肽,为分泌型蛋白。氨基酸序列比对表明,BdorTO蛋白与其他昆虫TO蛋白的序列一致性较低,其中与刺舌蝇(Glossina morsitans)的序列一致性最高,一致性值为48.6%。荧光定量PCR分析表明,BdorTO在触角中的表达量最高,推测Bdor...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
申建梅 胡黎明 宾淑英 林进添
【目的】克隆桔小实蝇14-3-3蛋白的基因(Bactrocera dorsalis14-3-3,Bdor14-3-3),研究Bdor14-3-3mRNA在不同组织和不同发育时期的表达情况,探索其是否参与了桔小实蝇的发育过程。【方法】采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和快速扩增cDNA末端(RACE)技术克隆Bdor14-3-3;采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法,研究Bdor14-3-3 mRNA在桔小实蝇不同组织及不同发育时期的相对表达量。【结果】克隆获得了Bdor14-3-3基因,其编码区长度为747 bp,编码248个氨基酸残基。氨基酸序列一致性分析表明,在昆...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐永杰 郭英 王延博 金芳芳 刘邓英 梁小娟 宋新强 陈世锋 熊远著 马云
基于2-DE和MS的蛋白质组学方法分析梅山猪骨骼肌发育过程中蛋白质动态表达变化,发现CCT5差异表达。为进一步获得猪CCT5基因的序列特征、时空表达及生物学功能等相关信息,克隆猪CCT5基因,分析不同物种序列进化关系,检测CCT5在猪不同组织和骨骼肌不同发育阶段中的表达。序列分析结果表明:在获得的2 286 bp猪CCT5 cDNA序列中包括1 626 bp的完整开放阅读框(ORF),编码541个氨基酸,其氨基酸序列与人的相似性为97%,表明该蛋白在不同物种间高度保守。荧光定量PCR结果显示,CCT5基因在猪肌肉和脂肪中表达量最高,心、肝等组织中表达量很低,没有肌纤维特异性;不同发育阶段骨骼肌...
关键词：
猪 CCT5 骨骼肌 克隆 表达
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
胡黎明 曾玲 申建梅 宾淑英 廖泓之 陈高峰 林进添
【目的】克隆桔小实蝇丝氨酸蛋白酶基因(Bactrocera dorsalis serine protease,BdorSer),研究BdorSer在不同组织和不同发育时期的表达情况,探索其可能参与的生理过程。【方法】采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和快速扩增cDNA末端(RACE)技术克隆BdorSer,对其编码蛋白氨基酸序列信息和进化关系进行分析;采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法,研究BdorSer mRNA在桔小实蝇不同组织及不同发育时期的相对表达量。【结果】克隆获得了BdorSer,该基因ORF全长1 239bp。氨基酸序列一致性分析表明,BdorSer与...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵海明 易欣 胡美英 安国栋 王会冬 黄林
为探讨非典型气味受体基因Orco的功能,采用RT-PCR和RACE方法克隆获得桔小实蝇Bacto-cera dorsalis(Hendel)Orco受体的全长cDNA序列,命名为Bdor/Orco(GenBank登录号为EU621792)。测序结果表明Bdor/Orco开放阅读框全长1 422bp,编码473个氨基酸残基。对其组成成分、疏水/亲水区域、信号肽、蛋白质二级结构,以及分子进化关系等进行了预测与推断,分析结果表明Bdor/Orco与其他昆虫的Orco具有较高的氨基酸序列一致性,特别是C末端。对该基因在桔小实蝇成虫不同组织和发育时期表达量的荧光定量PCR分析,结果表明Bdor/Orco...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
胡黎明 申建梅 胡美英 宾淑英 廖泓之 林进添
【目的】克隆桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)P450基因,研究其在不同组织及发育时期的表达情况,探索其可能存在的生理功能。【方法】采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和快速扩增cDNA末端(RACE)技术,克隆桔小实蝇P450基因CYP6A41;采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法,研究CYP6A41mRNA在桔小实蝇不同组织及不同发育时期的相对表达量。采用Homology程序模拟构建CYP6A41蛋白的三维结构,应用CDOCK程序将之与甲酸乙酯、乙酸乙酯、甲基丁香酚3种气味分子进行模拟对接分析。【结果】克隆获得了桔小实蝇P450基因,并命...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
姜维 薛鹏 何永新 陈玉林
【目的】克隆山羊Eda基因CDS区全序列,并对其进行序列分析,研究Eda基因在毛囊生长周期不同阶段皮肤组织中的表达规律。【方法】以太行黑山羊为研究对象,采集其毛囊生长休止期、生长期和退行期背部皮肤组织,采用RT-PCR技术克隆山羊Eda基因,通过在线软件Blastn进行基因cDNA序列分析,用SMART进行氨基酸序列分析,利用SWISS-MODEL软件进行蛋白质结构分析;以β-actin为看家基因,采用实时荧光定量PCR技术对Eda mRNA在毛囊生长不同时期皮肤组织中的表达规律进行分析。【结果】太行黑山羊Eda-A1基因CDS区全长1 176bp,编码391个氨基酸;Eda-A2比Eda-A...
[期刊] 水产学报
[作者]
杨国坤 徐双阳 梁晓敏 秦超彬 张艳敏 孟晓林 聂国兴
为研究GIP（葡萄糖依赖性肠促胰岛素，glucose-dependent insulinotropic polypeptide）在鲤体内的生理功能，实验利用RT-PCR（reverse transcription-polymerase chain reaction）技术从鲤前肠克隆得到gip，对其进行生物信息学分析，并对其mRNA的表达进行检测。结果显示，鲤gip的开放阅读框（open reading frame，ORF）为324 bp，编码107个氨基酸。经过结构预测鲤Gip前体蛋白包括信号肽、N端结构域、Gip成熟肽和C端结构域。氨基酸序列比对及系统进化树分析结果显示，鲤Gip蛋白与斑马鱼Gip蛋白的亲缘关系最近。Real-time PCR结果显示，gip在鲤各个组织中均有表达，但在前肠和垂体组织表达量最高。葡萄糖灌喂实验结果表明，鲤的脑和前肠中gip的表达量在灌喂葡萄糖1和2 h后显著增加。在饥饿再投喂实验中，鲤前肠中gip的表达量在饥饿后显著降低，而再投喂后表达量显著升高。在饲养实验中，高糖和高脂均能显著增加鲤前肠中gip基因的表达量。本研究克隆了鲤gip，并且不同的营养状态可以调节其表达水平。研究结果可初步阐明Gip的生理功能，为探究Gip调节鱼类糖脂代谢的机制提供理论依据。
关键词：
鲤 Gip 鉴定 表达分析
[期刊] 淡水渔业
[作者]
郑尧 陈家长 梁宏伟 王在照
对雌核发育彭泽鲫（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ ｖａｒ．Ｐｅｎｇｚｅ，Ｐｅｎｇｚｅ ＣｒｕＣｉａｎ ＣａｒＰ，ＰＣＣ）中的ＰＣＣ－ｈｉｒａ进行了克隆，序列分析，并对雌鱼９种组织和１１个发育阶段中的表达进行了研究。结果显示，ＰＣＣ－ｈｉｒａ ＣＤｓ全长３０２８ ｂＰ，编码１００９个氨基酸残基，具有７个典型ＷＤ４０结构域，ＰＣＣ－ｈｉｒａ与鲫ｈｉｒａ具有９９％的同源性，跟其他鲫属鱼具有较高的亲缘关系。ＰＣＣ－ｈｉｒａ分别在孵化后３６和４４ Ｄ达到最高值和最低值，且在雌鱼脑中的含量极显著高于其他８种组织。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
蒋菁菁 李英文 陈大庆 刘绍平 段辛斌 李小芳 范振华 汪登强
补体系统经活化形成末端补体复合物,C7是将此复合物与目的细胞的细胞膜结合的重要分子。本研究从已有的cDNA文库中克隆鲢(Hypophthalmichthys molitrix)补体C7的cDNA,其全长2 625 bp,编码821个氨基酸。同源性分析表明,鲢补体C7与草鲤鱼的氨基酸序列相同率最高(为93%)。与已报道的硬骨鱼类补体C7相同,鲢补体C7具有一些保守的结构,如TSP1、LDLRa、MACPF、EGF、TSP1、CCP。对12尾鲢补体C7进行遗传多样性分析发现有6个突变位点,其中5个是同义突变,另外一个是非同义突变,确定6个等位基因。在鲢正常组织和嗜水气单胞菌感染的免疫器官组织中,对...
关键词：
鲢 C7 遗传多样性 克隆 表达
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘珊 李冰 张成锋 魏可鹏 朱健
为了解Na+-K+-ATPase α1基因的分子结构及其在建鲤盐度调控过程中起到的作用,采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)的方法分离克隆了建鲤(Cyprinus carpio var.jian)Na+-K+-ATPase α1基因全长cDNA,得到3 397 bp的全长cDNA,包括3 081 bp的开放阅读框(ORF),232 bp的5-末端非编码区(UTR)以及219 bp的3-末端非编码区(UTR)。对推测的该基因氨基酸序列进行同源性比对和系统分析显示:建鲤与其他鱼类该基因的氨基酸序列相似度为90.22%~95.52%,与斑马鱼(Danio rerio)相似度最高(95.52%),与...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张治科 吴圣勇 雷仲仁
【目的】鉴定西花蓟马（Ｆｒａｎｋｌｉｎｉｅｌｌａ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）气味结合蛋白（ｏｄｏｒａｎｔ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｏｂｐ）并对其序列特征及分布情况进行研究，为阐明该虫嗅觉识别的机制、利用干扰昆虫嗅觉识别来进行害虫防治提供依据。【方法】利用ｒｔ－ｐｃｒ和ｒａｃｅ技术克隆西花蓟马气味结合蛋白基因，用ｄｎａＭａｎ软件进行序列分析，用ｂｌａｓｔ进行同源性比较，并用Ｍｅｇａ６．０的邻接法（ｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇ）构建系统进化树，应用服务器ｃｈｏｕ＆ＦａｓＭａｎ预测蛋白的二级结构，通过实时荧光定量ｐｃｒ检测该基因在西花蓟马不同发育期以及成虫不同组织中的分布情况。【结果】克．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨克强 王跃进 张今今 王西平 张剑侠 万怡震
表达序列标签 (expressed sequence tag,EST)是在生物体特定时空表达基因的一段 c DNA序列。随着生物信息学的发展 ,EST已成为基因定位、基因克隆、基因表达分析的有力工具。文章对应用 EST克隆基因和分析基因表达的研究进展进行了综述 ,并讨论了利用 EST进行基因克隆和表达分析时应注意的问题和发展趋势
关键词：
表达序列标签 基因克隆 基因表达
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
胡黎明 申建梅 胡美英 宾淑英 黄华枝 廖泓之 林进添
利用RT-PCR和RACE方法克隆获得桔小实蝇Bactrocera dorsalis(Hendel)二硫键异构酶(pro-tein disulfide isomerase,PDI)基因的cDNA序列,命名为BdorPDI。测序结果表明,BdorPDI开放阅读框全长1 497bp,编码498个氨基酸。氨基酸序列结构分析表明,该序列有PDI蛋白家族的典型特征:N端含有信号肽序列;在序列的N端及C端具有二硫键/巯基氧化还原位点CGHC;在C末端含有内质网滞留信号肽KDEL。进化树分析表明:桔小实蝇的PDI蛋白序列与脊椎动物安乐蜥(Anolis carolinensis)的序列(XP_00321737...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
申建梅 胡黎明 宾淑英 廖泓之 林进添
利用RT-PCR和RACE方法克隆获得橘小实蝇α1微管蛋白基因的cDNA全长序列,命名为α1-Bdortub。测序结果表明,α1-Bdortub开放阅读框全长1 353 bp,编码450个氨基酸残基。氨基酸序列比对表明,α1-Bdortub与黑腹果蝇α1-tubulin的氨基酸序列相似性最高,为99.8%。不同部位和不同时期的实时荧光定量PCR分析表明,α1-Bdortub在不同部位都有表达,雌虫翅中的表达是其生殖节中的12倍。从幼虫期到蛹期α1-Bdortub mRNA表达量逐渐提高;第1、2、3天幼虫中的含量分别为第10天蛹的0.71、1.16、4.01倍;在第1、4、7天蛹中的含量分别为...
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