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[期刊] 华北农学报
[作者]
史红丽 韩明玉 赵彩平
建立适宜桃基因组DNA的SRAP-PCR扩增体系,为桃基因图谱的构建和分子标记打下基础。以桃基因组DNA为模板,通过正交试验设计,从dNTPs、Mg2+、Taq酶、引物、模板5种因素4个水平对桃SRAP-PCR反应体系进行优化,所建立的体系为25μL:dNTPs为0.12 mmol/L,Mg2+为4 mmol/L,Taq酶2 U,引物为0.3 mmol/L,模板DNA50ng。PCR反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性l min,35℃复性l min,72℃延伸l min,5个循环;94℃变性l min,50℃复性l min,72℃延伸l min,35个循环,72℃延伸10 min。
关键词：
桃 SRAP 优化 正交试验
[期刊] 林业科学研究
[作者]
郑婷婷 林萍 王开良 姚小华 杨水平
Camellia oleifera is one of the important oil tree species in south China,and C.oleifera industry is quickly developed with the support of the national policies in recent years.The disorder of C.oleifera varieties is one of the key issues restricting the development of C.oleifera industry.Because of...
关键词：
油茶 SRAP 正交设计 体系优化
[期刊] 华北农学报
[作者]
李晓慧 王从彦 徐小利 常高正 张四普
以西瓜品种中华拳王为试材,探索了西瓜SRAP-PCR反应程序,并对西瓜SRAP-PCR反应体系的各影响因子进行了梯度设置试验,筛选和建立了可扩增多态性高、重复性好、带型清晰的最佳SRAP-PCR反应程序和体系。反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,35℃退火1 min,72℃延伸1 min,共5个循环;94℃变性1 min,50℃退火1min,72℃延伸1 min,共35个循环;72℃延伸5 min;4℃保存。反应体系(Total为15μL):DNA 100 ng,Mg2+2.0 mmol/L,dNTPs 0.3 mmol/L,Primer 60 ng,Taqpolymer...
关键词：
西瓜 SRAP 体系优化
[期刊] 华北农学报
[作者]
李红双 邱杨 李锡香
以萝卜基因组DNA为模板,对其SRAP-PCR反应体系的各个主要影响因子进行了系统的优化,建立了重复性好、多态性丰富的萝卜SRAP-PCR反应体系:20μL反应体系中,DNA50 ng、Mg2+2.25 mmol/L、dNTP 0.2 mmol/L、Taq1 U、Primer 0.7μmol/L。扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min、35℃复性1 min、72℃延伸1 min,5个循环;94℃变性1 min、50℃复性1 min、72℃延伸1 min,35个循环,72℃延伸10 min,4℃保温。该反应体系在不同萝卜种质资源遗传多样性分析、遗传图谱构建、分子标记辅助选择育种...
关键词：
萝卜 SRAP-PCR 反应体系
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
王红玲 张珏 教忠意 隋德宗
为了丰富柳树分子标记的手段,以旱柳Salix matsudana为材料,通过正交实验设计法,获得适于旱柳的相关序列扩增多态性(sequence-related amplified polymorphism,SRAP)-聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)体系;对SRAP-PCR扩增过程中的2次退火温度进行优化。结果如下:优化反应体系,25.00μL反应液中,含20.84nkat的Taq酶,2.00μL Mg2+(25.00mmol·L-1),2.50μL碱基混合物(脱氧核糖核苷酸dNTPs,各2.50mmol·L-1),1.50μL引物(20.00μmo...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
叶兰香 蒋彧 李萍 王海娥 何俊蓉 刘菲 卓碧萍 袁宁
序列相关扩增多态性(SRAP)是新一代的分子标记技术,尚未在兰花中应用过。本实验运用改进了的CTAB法提取国兰总DNA,并L16(45)正交设计,对影响中国兰PCR反应的4个因素(引物浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、扩增模版)在4个水平上进行优化试验,结果采用DPS软件分析。结果表明,在25μl总体积中,Taq酶为1个单位的情况下,中国兰SRAP-PCR反应最佳扩增体系为:Mg2+2 mmol.L-1、DNA模版100μg、dNTPs 0.25 mmol.L-1、引物0.3μmol.L-1。这一优化的SRAP-PCR体系的建立为后续国兰SRAP分析奠定基础。
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
任立宁 郭起荣 何高峰 徐振国 孙立方 王青
首次报道竹类植物SRAP-PCR反应体系的建立与优化。以竹叶总DNA为模板,经过大量实验,建立和优化了竹子SRAP-PCR的50μL反应体系,20 ng模板DNA,2.0 mmo1/L Mg2+,175μmol/LdNTPs,0.2μmol/L引物,1.5 UTaqDNA聚合酶,5μL10×buffer,退火温度52℃为最优反应组合。该反应条件下扩增条带清晰,多态性丰富。
关键词：
竹子 SRAP-PCR 反应体系 优化
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
汪成成 崔文山 董健 冯健 王骞春 姜韬 闫文文 张璐
利用正交设计L16(45)对日本落叶松SRAP-PCR反应体系的模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物、Taq酶浓度五因素在四个水平上进行优化试验,PCR结果采用统计软件SPSS13.0进行分析,结果表明:各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响,其中模板DNA影响最大;筛选得到日本落叶松SRAP-PCR反应的最佳体系(20μL)为模板DNA浓度为120ng.20μL-1,dNTPs的浓度为0.15mmol·L-1,引物浓度为0.3μmol·L-1,Mg2+浓度为1.5mmol·L-1,Taq酶浓度为0.5U.20μL-1。这一优化体系的建立为今后利用SRAP标记技术对日本落叶松遗传多样...
关键词：
正交设计 SRAP-PCR 日本落叶松
[期刊] 华北农学报
[作者]
郭小菲 姜立娜 蔡祖国 任文娟 赵一鹏
为建立菜用大黄最佳的SRAP反应体系,进一步对菜用大黄品种进行遗传多样性分析,以菜用大黄基因组DNA为模板,采用单因素与正交设计相结合的方法,对SRAP-PCR扩增体系中的模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物和Taq DNA聚合酶浓度5个因素进行优化,并确立菜用大黄SRAP-PCR的最佳体系。结果表明:菜用大黄各因素对反应体系影响大小依次为:引物浓度>Mg2+浓度>dNTPs浓度>Taq DNA聚合酶浓度>DNA用量;最佳反应体系为:25μL反应体系中含10×PCR Buffer 2.50μL、模板DNA 30 ng、Mg2+2.50 mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、Taq...
关键词：
菜用大黄 SRAP-PCR 体系优化
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孙祖霞 刘兆磊 陈素梅 陈发棣 楼望淮 郭海林
以荷花(Nelumbo nucifera Gaertn)品种‘新红’叶片为材料,采用L16(45)正交试验设计,对SRAP-PCR反应体系中的Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物和模板DNA用量5因素进行了优化,并确立了适用于荷花SRAP-PCR的最佳反应体系。结果表明:荷花的SRAP-PCR最佳反应体系为:反应总体积10μL,包含2.0 mmol.L-1 Mg2+、300μmol.L-1 dNTPs、0.5 UTaqDNA聚合酶、4μmol.L-1上下游引物、50 ng DNA及10×PCR Buffer。各因素水平变化对反应体系影响由大到小依次为:TaqDNA聚合酶、Mg2+、引...
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
彭珠清 范辉华 刘宝 刘燕 李静
建立适合无患子Sapindus mukurossi的相关序列扩增多态性-聚合酶链式反应(SRAP-PCR)最佳反应体系,为研究无患子种质资源的遗传多样性、亲缘关系及遗传改良等奠定基础。以南平产的无患子叶片为材料,采用单因素法对体系中的DNA模板、镁离子、三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs),引物和TaqDNA聚合酶等5因素进行优化。确立了适合无患子SRAP的最佳反应体系(20μL):1×PCR缓冲液,50 ng模板DNA,2.0 mmol·L-1镁离子,0.2 mmol·L-1dNTPs,0.5×16.67 nkat(0.5 U)TaqDNA聚合酶,0.4μmol·L-1引物。利用该体系对12份...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
李雪萍 苗昌盛 朱恩作 贺春玲 李在留
以野生濒危植物掌叶木的叶片为材料,通过正交试验与单因素试验相结合的方法,研究了模板DNA用量、Taq DNA聚合酶用量、dNTP浓度、Mg2+浓度、引物浓度等因素对SRAP-PCR反应的影响,建立了适宜于掌叶木SRAP分析的扩增体系,即20μL的反应体系中含模板DNA约20 ng,Mg2+2.0 mmol/L,引物0.6μmol/L,dNTP 0.20 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.5 U。该研究为利用SRAP技术分析掌叶木遗传多样性、进行掌叶木种质资源相关研究等奠定了良好的基础。
关键词：
掌叶木 SRAP PCR 优化
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王燕 龚义勤 赵统敏 刘广 郁樊敏 叶海龙 柳李旺
对番茄基因组DNA的SRAP-PCR体系中Mg2+、dNTPs和引物浓度进行了优化,结果表明反应体系中适宜浓度为Mg2+1.5~3.0 mmol.L-1,dNTPs 0.05~0.20 mmol.L-1,引物0.25μmol.L-1;模板DNA为10~20 ng(10μL反应体系)。运用优化的体系,筛选获得3个合作906与其父母本多态性标记引物组合。利用15个引物组合对11个番茄主要品种以及1个近缘野生种进行种质鉴定的SRAP标记分析,10个多态性的引物组合共检测到55个多态性位点,平均每个引物可鉴别3.7个品种,双引物组合m e8/em8-1与m e6-1/em14-1可以区分所有供试材料。...
关键词：
番茄 SRAP 体系优化 品种鉴定
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
尹跃 曹有龙 陈晓静 何军 张波
以宁杞1号为试验材料,探讨Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶用量、引物浓度、模板DNA用量对枸杞SRAP-PCR反应的影响.建立20μL反应体系,模版DNA 50 ng,Buffer 1×,Mg2+1.5 mmol.L-1,dNTPs 0.3 mmol.L-1,引物0.3μmol.L-1,Taq DNA聚合酶用量为1 U,并利用该反应体系,两对不同引物组合Me1/Em1和Me3/Em5对12份枸杞样品DNA进行SRAP-PCR扩增,1.8%琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,不同品种(系)间DNA谱带多态性丰富,说明该体系稳定可靠.
关键词：
枸杞 SRAP-PCR 单因素分析
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
郭丽琴 卫尊征 张金凤 王欢 李贤 郭军
采用均匀设计方法,对影响杨属SRAP-PCR体系的MgCl2、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶和模板浓度等因素分别进行了U16(45)和U12(35)两轮优化,建立了适用于杨属的SRAP-PCR反应体系。在25μL反应体系中,MgCl23.5mmol/L、dNTPs0.20mmol/L、引物0.44μmol/L、TaqDNA聚合酶1.50U、模板浓度28ng/L为最适条件。在此基础上又对退火温度进行了摸索,结果发现,扩增结果对退火温度变化不敏感。最后运用优化体系对杨属3派10个种共16个单株的DNA进行扩增验证,结果获得的DNA条带清晰,多态性比较丰富。说明这一优化的SRAP-PCR反应体...
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